全 文 ：书收稿日期:2012-11-01; 修订日期:2013-03-02
基金项目:国家药典委维药质量标准提高项目资助( No． 520)
作者简介:马 成( 1976-) ，男( 汉族) ，陕西周至人，现任新疆医科大学药学院
副教授，博士学位，主要从事天然药物应用与开发研究工作．
维药索索葡萄中齐墩果酸薄层鉴别方法研究
马 成1，热娜·卡斯木1，徐 熠3，董彦妤1，努尔比娅·塔来提1，刘 涛2，马 龙2
(1 ．新疆医科大学药学院，新疆 乌鲁木齐 830011;
2．新疆医科大学公共卫生学院，新疆 乌鲁木齐 830011; 3．新疆分析测试研究院，新疆 乌鲁木齐 830011)
摘要:目的 以齐墩果酸为对照品，制定新疆维吾尔药材索索葡萄的质量标准之薄层鉴别方法。方法 收集三个产地(吐鲁番，
鄯善和哈密) ，10 个批次的索索葡萄生药材，根据《中国药典》( 2010 版)附录ⅥB(薄层色谱法)中相关项下方法进行薄层鉴别。
以齐墩果酸作为对照品，考察不同提取方法和不同提取溶剂对齐墩果酸薄层的影响;考察不同展开系统、显色剂、温度、湿度、点
样量和不同厂家硅胶板对索索葡萄中齐墩果酸薄层鉴别的影响，从中选出维药索索葡萄中齐墩果酸薄层鉴别的最佳条件。结
果 采用丙酮为溶剂，超声提取 30 min，吸取供试品溶液和对照品溶液各 2 μl点于青岛海洋化工有限公司高效硅胶板之上，在环
己烷 －丙酮 －乙酸乙酯 －甲酸( 9∶ 2∶ 1∶ 0． 2)系统中展开，喷以 10%硫酸乙醇显色，供试品与齐墩果酸对照品在同样的位置显
紫色的斑点，色谱斑点清晰，能有效提供索索葡萄的鉴别特征。结论 实验建立的索索葡萄药材中齐墩果酸的薄层鉴别方法，操
作简便，重现性好，专属性强，能够为其薄层鉴别提供实验资料和科学依据。
关键词:索索葡萄 ; 质量标准; 薄层鉴别; 齐墩果酸
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2013． 05． 066
中图分类号:Ｒ29 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2013) 05-1178-02
TLC Identification of Oleanolic Acid in the Uyghur Medicine Vitis vinifera L
MA Cheng1，Ｒena·Kasimu1，XU Yi3，DONG Yan-yu1，Nuerbiya·Talaiti1，LIU Tao2，MA Long2
( 1． College of Pharmacy，Xinjiang Medical University，Urumqi，Xinjiang 830011 China; 2． College of Public Health，
Xinjiang Medical University，Urumqi 830011，Xinjang; 3． Xinjiang Uyghur Autonomous Ｒegion Academy of Instrumen-
tal Analysis，Urumqi，Xinjiang 830011 China)
Abstract:Objective To set up the TLC identification of Vitis vinifera． L ( Chinese name“Suosuo”grape，traditional Uyghur medi-
cine) with oleanolic acid as standard compound．Methods According to the Chinese Pharmacopoeia ( 2010 Ｒevision) Appendix Ⅵ B
( TLC) ，different extract methods and solvents，developing system，chromogenic agents，temperature，humidity，drawing amounts and thin
layer boards were investigated for optimizing TLC identification of Vitis vinifera L． Ｒesults Using ultrasonic extraction 30min with ace-
tone，drawing 2 μl solution on efficient thin layer board ( 200 mm × 100 mm，Qingdao Ocean Chemical Co．，Ltd． ) ，developing system
cyclohexane － acetone － ethyl acetate － formic acid ( 9∶ 2∶ 1∶ 0． 2) was applied． After spaying with 10% sulfuric acid in ethanol，
significant purple color appeared on the sample solution with the oleanolic acid at same position．Conclusion The established TLC iden-
tification of Vitis vinifera L． ( oleanolic acid as the standard compound) is simple，repeatable and specific． It can improve and lay a foun-
dation on the quality standardization of Vitis vinifera L．
Key words: Vitis Vinifera L; Quality standards ; TLC ; Oleanolic acid;
索索葡萄 Vitis vinifera L．为葡萄科植物葡萄的果实，是维吾尔医
学的一种药用植物［1，2］，维吾尔医药以果实阴干后入药，具有健脾胃、
理肺、调理血液质、降低机体热盛等功效，用于发热咳喘，胃弱少食和
小儿麻疹等症［3］。《本草纲目》中亦有记载，葡萄品种甚多，入药以
索索葡萄(又名琐琐葡萄、豆粒葡萄)为佳。具有补气血，强筋骨，利
小便的功效，可用于治疗气血虚弱，肺虚咳嗽，浮肿等症。索索葡萄
属无核红葡萄系，我国主要产于新疆的吐鲁番，鄯善和哈密。
研究发现，索索葡萄中含果糖、葡萄糖、有机酸、维生素类和氨基
酸等营养成分［2］，还有黄酮，萜类和甾体类等生物活性物质［4 ～6］。已
发现的黄酮类成分有芦丁，异槲皮苷等，三萜成分齐墩果酸是代表性
成分之一，也是抗病毒活性成分，同时还具有护肝降酶、降糖等多方
面的药理作用［7，8］，临床上用于治疗急性黄胆型肝炎和慢性病毒性肝
炎等，且其毒性低副作用少。比色法测定索索葡萄中总三萜类成分
含量为0． 49%［9］，HPLC 法测定索索葡萄皮中齐墩果酸的含量为
0． 9%［10］，索索葡萄中齐墩果酸含量较高。
目前维吾尔医药基础研究薄弱，索索葡萄在维吾尔药分册(卫
生部颁地方药材标准，1999 年版)中质量标准只有显微鉴别和化学
鉴别，没有记录对索索葡萄的薄层鉴别。给索索葡萄药材的质量控
制和规范化使用带来不便。本研究建立索索葡萄中齐墩果酸的薄层
鉴别方法，为制定索索葡萄药材的质量标准中薄层鉴别相关内容提
供科学依据。
1 仪器与试剂
超声仪(SK2510HP，上海科导超声仪器有限公司)、分析天平
(AB104 －N，梅特勒托利多)、自动点样仪(LINOMA15，CAMAG)、自
动拍照仪(ＲEPＲ051AＲ3，CAMAG)、青岛海洋化工有限公司(薄层 G
板 50 mm ×100 mm、薄层 H板 50 mm ×100 mm、高效板 200 mm ×100
mm)、安徽良臣硅源材料有限公司(高效G板50 mm ×100 mm)、Mer-
ck KGAA TLC Silica gel 60(薄层 G板 50 mm ×100 mm)。
齐墩果酸对照品(中国药品生物制品鉴定所，上海源叶生物科
技有限公司)，索索葡萄药材(10 批，分别收集自吐鲁番，鄯善，哈密，
乌鲁木齐，经新疆维吾尔自治区药品与食品检验所苏莱曼·哈力克
主任药师鉴定)，环己烷、三氯甲烷、甲醇、无水乙醇、乙酸乙酯、甲酸、
丙酮等试剂均为分析纯(天津富宇试剂厂)。
2 方法与结果
索索葡萄生药材收集自吐鲁番，鄯善，哈密和乌鲁木齐，共 10 个
批次，三个主产地，分别为吐鲁番、鄯善和哈密，药材编号见表 1。
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时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 5 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 5
书表1 索索葡萄药材来源
编号 商品名 收集地 产地 批号
Ⅰ 索索葡萄 吐鲁番市农贸市场 吐鲁番市 sspt －1 －2010 －08
Ⅱ 索索葡萄 吐鲁番地区维吾尔医院 吐鲁番市 sspt －2 －2010 －08
Ⅲ 索索葡萄 鄯善县连木沁镇三大队 鄯善县连木沁镇 sspt －3 －2010 －09
Ⅳ 索索葡萄 乌鲁木齐市维吾尔医院 吐鲁番市 sspt －4 －2010 －09
Ⅴ 索索葡萄 吐鲁番市葡萄沟风景区 吐鲁番市 sspt －5 －2010 －09
Ⅵ 索索葡萄 哈密地区维吾尔医院 哈密市五堡镇 sspt －6 －2010 －09
Ⅶ 索索葡萄 哈密市广场北路汇好中西医门诊中药房 哈密市 sspt －7 －2010 －09
Ⅷ 索索葡萄 乌鲁木齐市维吾尔药店 吐鲁番市 sspt －8 －2010 －09
Ⅸ 索索葡萄 乌鲁木齐市维吾尔药店 吐鲁番市 sspt －9 －2010 －09
Ⅹ 索索葡萄 乌鲁木齐市维吾尔药店 吐鲁番市 sspt －10 －2010 －09
2． 1 溶液制备
2． 1． 1 对照品溶液的制备 精密称取齐墩果酸标准品 10 mg，加甲醇
溶解制得浓度为 1 mg/ml的齐墩果酸对照品溶液。
2． 1． 2 供试品溶液的制备 将索索葡萄在干燥洁净研钵中研碎，平
行称取 2． 0 g置 6个具塞锥形瓶中，标号为①②③④⑤⑥，其中①和
②分别加 20 ml甲醇，③和④分别加 20 ml乙醇，⑤和⑥分别加 20 ml
丙酮，常温下，将①③⑤超声 30 min(超声功率为 100W，频率 59 Hz，
超声前温度为 22℃，超声 30 min后温度为 39℃)，过滤后蒸干滤液，
残渣加甲醇2 ml使溶解。②④⑥回流提取30 min，过滤后蒸干滤液，
残渣加甲醇 2 ml使溶解。
依照《中国药典》(2010 版)附录ⅥB(薄层色谱法)中相关项下
方法进行薄层层析［11］，吸取 6 组供试品溶液和齐墩果酸对照品溶
液，点于自制硅胶薄层板上，放入展开剂中展开，取出，晾干，喷 10%
硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光和紫外灯光
(366 nm和 254 nm)下检视。结果显示用甲醇和乙醇提取的供试品
溶液粘度较大，不易点样，提取物含糖量较高，对齐墩果酸薄层干扰
较大。超声法和回流法相比，回流提取索索葡萄时，提取物中含糖量
较高，不易点样，超声法提取操作简单，因此建议使用超声法提取，提
取溶剂选用丙酮。
2． 2 索索葡萄中齐墩果酸 TLC鉴别
2． 2． 1 展开系统选择 分别吸取供试品溶液和齐墩果酸对照品溶
液，点于自制硅胶薄层板上，放入展开剂中展开，参考文献［12］选则展
开剂为环己烷 －丙酮 －乙酸乙酯 －甲酸(9∶ 2∶ 1∶ 0． 2)，氯仿 －甲
醇 －甲酸(30∶ 1∶ 0． 1)，环己烷 －氯仿 －乙酸乙酯 －甲醇 －甲酸(20
∶ 4∶ 4∶ 2∶ 1)，正己烷 －氯仿 －乙酸乙酯 －甲醇 －甲酸(20∶ 4∶ 4
∶ 2∶ 1)，取出，晾干，喷 10%硫酸乙醇溶液，105 ℃加热至斑点显色
清晰，分别置日光和紫外灯光(366 nm和 254 nm)下检视。供试品色
谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的
斑点。结果见图 1。
结果显示展开剂①(环己烷 －丙酮 －乙酸乙酯 －甲酸)和展
开剂②环己烷 －氯仿 －乙酸乙酯 －甲醇 －甲酸)展开效果较好，对
照品溶液与供试品溶液在 366 nm和 254 nm紫外光下相同位置显
荧光斑点，在日光下显紫色斑点，且其余成分分离效果较好，斑点
清晰，数目较多，拖尾现象不明显，斑点较圆整，Ｒf 值在 0． 3 ～ 0． 8
之间，展开剂③(氯仿 －甲醇 －甲酸)对照品与供试品斑点不在同
一位置，且拖尾现象严重，斑点不清晰，斑点数目较少，展开剂④
(正己烷 －氯仿 －乙酸乙酯 －甲醇 －甲酸)与①和②相比分离效
果较差，斑点数目较多。由于展开剂②的组分较展开剂①复杂，因
此选定展开剂①为最佳展开剂。
2． 2． 2 显色剂选择 分别吸取供试品溶液和齐墩果酸对照品溶
液，点于自制硅胶薄层板上，放入“2． 2． 1”确定的展开剂中展开，
取出，晾干，用不同显色剂显色(10%硫酸乙醇，5%磷钼酸，碘蒸
气) ，结果显示在相同展开剂展开条件下，10%硫酸乙醇显色效
果较好，在日光下，对照品与供试品在同一位置显紫色斑点，显色
后在 254 nm和 366 nm下有荧光;在日光下使用磷钼酸显色时，
对照品与供试品在同一位置显蓝色斑点;在日光下使用碘显色
时，对照品与供试品在同一位置显黄色斑点，斑点消失较快;且使
用磷钼酸和碘蒸气显色时在紫外光下无荧光。因此选用 10%硫
酸乙醇作为显色剂。
图 1 索索葡萄在四种展开剂中 TLC图(日光)
2． 2． 3 温度考察 分别吸取供试品溶液和齐墩果酸对照品溶
液，点于自制硅胶薄层板上，放入“2． 2． 1”确定的展开剂中，分别
在 4℃(层析缸和展开剂需提前放入该温度下饱和 2 h 以上)和
20 ℃条件下展开，取出，晾干，喷 10%硫酸乙醇显色。结果显示
4 ℃时索索葡萄在展开剂中展开 Ｒf值明显降低，斑点拖尾，索索
葡萄齐墩果酸薄层鉴别在常温下展开效果较好，斑点较圆整。
2． 2． 4 湿度考察 分别吸取供试品溶液和齐墩果酸对照品溶液，
点于自制硅胶薄层板上，放入“2． 2． 1”确定的展开剂中，分别在
相对湿度为 32%，42%，65%，88%条件下展开(先将装有硫酸 －
水混合溶液的烧杯放入层析缸内 1 h以上，再将展开剂倒入层析
缸内饱和 30 min后，放入薄层板展开) ，取出，晾干，喷 10%硫酸
乙醇显色。结果显示索索葡萄在不同湿度下展开时，Ｒf 值没有
明显改变，湿度对索索葡萄中齐墩果酸 TLC影响不大，在相对湿
度 30% ～80%下色谱行为稳定。
2． 2． 5 点样量考察 用自动点样器分别吸取 2，3，4，5，6，7，8 μl
供试品溶液和齐墩果酸对照品溶液，点于同一硅胶板上(200 mm
×100 mm) ，放入“2． 2． 1”确定的展开剂中展开，取出，晾干，喷
10%硫酸乙醇显色。结果显示索索葡萄中齐墩果酸含量较高，对
照品溶液供试品溶液点样量为 2 μl即可，点样量过大，齐墩果酸
斑点有扩散现象。
(A －预制 H板，C －高效 G板，E －预制 G板，青岛海洋化工厂;
B －高效 G板，安徽良臣硅源材料有限公司;
D －薄层 G板，Merck KGAA TLC Silica gel 60;
F －自制薄层板
图 2 索索葡萄中齐墩果酸在不同薄层板上的 TLC图(日光)
2． 2． 6 不同薄层板的考察 用自动点样器吸取供试品溶液和齐
墩果酸对照品溶液各 2 μl，点于不同硅胶板上，放入“2． 2． 1”确定
的展开剂中展开，取出，晾干，用 10%硫酸乙醇显色。结果显示
青岛海洋高效 G板 Ｒf值较理想，齐墩果酸与其他成分分离度好，
斑点清晰，无拖尾和扩散。
2． 2． 7 10 个批次索索葡萄中齐墩果酸薄层鉴别 按照“2． 1． 2”
确定的提取方法制备 10 个批次的索索葡萄供试品溶液，吸取齐
墩果酸对照品溶液和供试品溶液 2 μl 点于青岛海洋化工厂产高
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 5 时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 5 期
书效薄层硅胶板之上，置于“2． 2． 1”确定的展开剂中展开，取出，晾
干，喷以 10%硫酸乙醇显色，分别在日光和紫外 366 nm 下检视，
结果如图 3、4 所示。索索葡萄在紫外 366 nm下的 TLC图可作为
日光下的辅助检视条件。
图 3 不同批次的索索葡萄生药材齐墩果酸 TLC图 (日光)
图 4 不同批次的索索葡萄生药材齐墩果酸 TLC图(366nm紫外光)
3 讨论
齐墩果酸是索索葡萄的主要化学成分之一，也是活性成分之
一，在索索葡萄皮中含量可达 0． 9%，含量较高，可作为生药材薄
层鉴别的对照品。实验结果表明，本文建立的薄层鉴别方法，方
法简便、可靠，结果稳定，重现性好，专属性强;能够对不同产地
10 个批次的索索葡萄生药材进行薄层鉴别，供试品与对照品在
相同位置显紫红色，其余成分的色谱行为相似;显色后在紫外
366 nm下检视，比日光下检视更为清晰，可作为日光下检视的辅
助和补充。
索索葡萄作为维吾尔医学常用药材，有长期的使用历史和广
泛的民间应用基础;但维吾尔药材的化学成分分析和质量标准研
究较为薄弱，加之葡萄品种繁多，属性不同，为避免混淆，规范索
索葡萄的药材使用，提高药材品质，保证用药安全，本次实验研究
结果为索索葡萄生药材质量控制和评价提供了依据。为索索葡
萄的定性鉴别提供了一种快速有效的方法，为进一步开发和利用
索索葡萄提供了科学依据。
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珍国医国药，2000，11(5) :467．
临床报道
收稿日期:2012-05-01; 修订日期:2012-11-20
加味桂枝芍药知母汤
治疗类风湿性关节炎 51 例临床观察
顾绍瑜
(江苏省连云港圣安医院 222100)
摘要:目的 分析加味桂枝芍药知母汤治疗类风湿性关节炎的疗效。方法 选取该院于 2008 ～ 2012 年收治的类风湿性关
节炎患者 108 例，随机均分为观察组与对照组，比较两组患者的各项指标及治疗效果差异。结果 观察组患者接受中西
医结合治疗后，各项检查指标均显著低于对照组患者( P ＜ 0． 05) ; 观察组患者接受治疗后的临床总有效率明显高于对照
组患者( P ＜ 0． 05) 。结论 加味桂枝芍药知母汤可以有效改善类风湿性关节炎患者的实验室指标，提高治疗有效率。
关键词:加味桂枝芍药知母汤; 类风湿性关节炎; 疗效
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2013． 05． 067
中图分类号:Ｒ259 文献标识码:C 文章编号:1008-0805( 2013) 05-1180-02
类风湿性关节炎是我国的常见疾病，属于自身免疫性疾病范
畴，病程较长，可引起患者关节畸形和各项功能异常，给患者带来
了极大的身心痛苦［1］，一般治疗方式的疗效不甚理想，迫切 需要
寻找一种全新的有效的治疗方法。本文主要分析加味桂枝芍药
知母汤治疗类风湿性关节炎的疗效。现报道如下。
1 资料与方法
1． 1 一般资料 取本院风湿科于 2008 年 5 月至 2012 年 5 月间
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时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 5 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 5