全 文 ：29
第 1 2 卷 第 7 期
2010 年 7 月
辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 12 No. 7
Jul . ，2010
绵马贯众又名东北贯众，为鳞毛蕨科植物粗茎
鳞毛蕨 Dryopteris crassirhizoma Nakai 的干燥根茎及
叶柄残基 [1]。始载于《神农本草经》，有驱虫、止血、
清热解毒的功能，临床上用于风热感冒、虫积腹痛、
热毒疮疡、痄腮肿痛、崩漏等。本实验采用鸡胚体外
抗病毒实验方法，对绵马贯众的 3 个提取部位进行
了抗鼠肺病毒 FM1 株的实验研究，旨在找出绵马贯
众抗病毒的有效部位。
1 实验材料
1.1 药物及主要试剂
绵马贯众饮片购于沈阳众意愿大药房。阳性对
照药利巴韦林颗粒（四川百得药业有限责任公司，批
号 070501）。
1.2 病毒
甲型流感病毒鼠肺适应株 A/FM1/47(H1N1)，
中 国 预 防 医 学 科 学 院 病 毒 研 究 所 提 供，冻 存 于
辽宁中医药大学病毒室，经鼠肺、鸡胚传代后为
FM1M9E2M4E3M2E4M2E3。
1.3 鸡胚
9 日龄尼克白种鸡胚，SPF 级，购于辽宁省益康
生物制品厂。
1.4 1％鸡红血球悬液
采集健康公鸡血，阿氏液抗凝，生理盐水 1500
r/min 离心洗涤 3 次，弃上清，以无菌生理盐水配制成
1％悬液，4℃冷藏备用。
1.5 主要仪器
II 级 生 物 安 全 柜 ( 美 国 Baker 公 司，型 号 ：
SG403TXCE) ；低温高速离心机 ( 德国 Heraeus，
型号 ：Biofuge 28RS) ；台式压力蒸汽灭菌器 ( 沈
阳盛达生物电子设备有限公司 ) ；电热恒温培
养箱 ( 上海跃进医疗器械厂 ) ：AS3120 电子超声
仪。
绵马贯众提取物抗甲型流感病毒FM1株实验研究
徐 程，于 艳，孙科峰，南春红，杨关林，宫成军，席 瑞
（辽宁中医药大学附属医院，辽宁 沈阳 110032）
摘 要 ：文章采用鸡胚体外抗病毒实验方法对绵马贯众3种提取物进行了实验研究。结果 ：绵马贯众3种提取
物的预防作用从强到弱的顺序为水提取物、乙醚提取物和乙醇提取物 ；绵马贯众3种提取物的治疗作用从强到弱的
顺序为乙醇提取物、水提取物和乙醚提取物。
关键词 ：绵马贯众 ；FM1
中图分类号 ：R285.5 文献标识码 ：A 文章编号 ：1673-842X (2010) 07- 0029- 03
收稿日期 ：2010-04-18
基金项目 ：辽宁省教育厅科学技术研究创新团队项目（2006T096）
作者简介 ：徐程（1963-）, 男 , 辽宁沈阳人 , 副主任中药师 , 主要从事中药制剂生产和中药质量分析研究工作。
DHEA-S、FTI、FINS、HOMA-IR 与其他两组比较均
有显著性升高，SHBG 显著性降低。DHEA-S 是一类
性激素前体物质，不具有雄激素的生物活性，在有关
酶的作用下转化为雄烯二酮、睾酮和雌酮，在女性由
肾上腺皮质合成。以往研究指出的 PCOS 患者存在
高雄激素主要是针对血液中的睾酮浓度，而并未关
注到 DHEA-S 等。直到近年来国外研究发现，PCOS
妇女血浆中的 DHEA-S 水平明显比同期妇女要高
的多 [6]，周武等 [7] 通过比较 PCOS 患者血清 DHEAS
与 SHBG 关系时发现，随着血清 SHBG 浓度的下降，
DHEAS 浓度上升，两者表现为明显的负相关关系
（r=-0.4103，P<0.05）。国外文献相关分析显示 PCOS
血清 SHBG 与 IR 的各项指标密切相关，而且在控制
了体重因素的影响后，SHBG 下降与 Homa-IR 升高
的这种趋势仍然存在。提示血清 SHBG 可反映 IR 程
度 [8-9]，并可间接预示 PCOS 患者糖代谢异常的进展。
由此进一步证明 PCOS 痰湿证具有明显的 IR 特征，
血清 DHEA-S、FTI 以及 SHBG、FINS、HOMA-IR 等
可作为其特征性指标。◆
参考文献
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278-280.
DOI：10.13194/j.jlunivtcm.2010.07.31.xuch.063
30
辽 宁 中 医 药 大 学 学 报 1 2 卷
2 实验方法[2]及结果
2.1 实验用药物的制备
2.1.1 绵马贯众水提取物的制备 称取绵马贯众
100g，置圆底烧瓶中，加水加热回流提取 2 次，每次
加水 8 倍量，每次提取 1h，过滤，滤液浓缩至 100mL，
制成 1g/mL 溶液。
2.1.2 绵马贯众乙醚提取物的制备 称取绵马贯众
100g，置圆底烧瓶中，加乙醚加热回流提取2次，每次
加水6倍量，每次提取1h，过滤，滤液挥干乙醚，残渣
加8%吐温-80溶解，使成100mL，制成1g/mL溶液。
2.1.3 绵马贯众乙醇提取物的制备 称取绵马贯
众 100g，置圆底烧瓶中，加 70% 乙醇加热回流提取
2 次，每次加水 6 倍量，每次提取 1h，过滤，滤液挥干
乙 醇，残 渣 加 8% 吐 温 -80 溶 解，使 成 100mL，制 成
1g/mL 溶液。
2.1.4 阳性对照药溶液的制备 称取利巴伟林颗粒
适量，加水使溶解，制成 50mg/mL 溶液。
2.1.5 溶剂对照液（8%吐温-80）的制备 量取吐
温 -80 8mL，加水适量，水浴加热使溶解，待冷却至
室温，加水使成 100mL，制成 8% 的水溶液。
以上各药材提取物经高速离心机 4000r/min 离
心 30min，取上清液，高温高压灭菌后 4℃冷藏备用。
2.2 流感病毒增毒及其在鸡胚上半数感染量的测定
将病毒原液接种于局部消毒后的9日龄SPF鸡
胚尿囊腔每胚接种0.1mL，石蜡封口，33~35℃温箱孵
育48h，4℃过夜。收取尿囊液，红细胞凝集试验测血
凝滴度。将流感病毒系列对数稀释 (10-1~10-12)，分别
接种在事先标记好的鸡胚尿囊腔内，每个浓度接种4
只鸡胚，0.2mL/只，并做生理盐水对照。将注射了流
感病毒的鸡胚放入 33~35℃温箱内，48h后取出，放
入4℃冰箱内过夜 ：收取尿囊液，每胚0.1mL依次加
入作好标记的血凝板上，再加入预先配制好的1％鸡
血球0.1mL，轻摇后40min观察结果，用 karber公式
计算。测得EID50为10-7.5，实验用 100EID50。
2.3 药材提取物及阳性对照药对鸡胚最大无毒剂
量的测定
用含 PS（青霉素 G 和链霉素混合试剂）10％的
生理盐水将药物原液作连续 2 倍系列稀释，每次抽
取 0.2mL 分别接种在预先作好标记的鸡胚上，每个
浓度接种 8 个鸡胚，并设生理盐水对照。将接种好
的鸡胚放入 34℃温箱内孵育 72h，每 12h 观察记录
鸡胚存活情况，24h 内死亡的鸡胚不记入药物毒性
作用致死数。结果如表 1。
表 1 最大无毒剂量结果
组别 最大无毒剂量稀释倍数
最大无毒剂
量（mg/mL）
绵马贯众水提取物 1 ：1 1000
绵马贯众乙醚提取物 1 ：2 500
绵马贯众乙醇提取物 1 ：1 1000
利巴韦林组 1 ：1 50
溶剂对照组 1 ：1 -
2.4 药材提取物及阳性对照药最大不凝血剂量的测定
将药材各提取物从原液开始，用生理盐水作
连续 2 倍系列稀释至 1 ：1024，再加入等量的 1%
鸡红血球悬液，混匀，40min 后观察结果。结果如
表 2。
2.5 药材提取物及阳性对照药对甲型流感病毒感染
鸡胚预防作用
药物和溶剂原液稀释至最大不凝血剂量，并从
表 2 最大不凝血剂量结果
组别 最大不凝血剂量稀释倍数
最大不凝血剂
量（mg/mL）
绵马贯众水提取物 1 ：512 1.59
绵马贯众乙醚提取物 1 ：128 7.81
绵马贯众乙醇提取物 1 ：16 62.50
利巴韦林组 1 ：1 50.00
溶剂对照组 1 ：64 -
最大不凝血剂量做连续 2 倍系列稀释至 1 ：32，每
胚 0.1mL 分别接种鸡胚，每组 4 个鸡胚，37℃孵育
2h，并设生理盐水组和病毒对照组，然后分别接种
0.1mL 100EID50 的病毒悬液，生理盐水对照组注射
0.9% 的生理盐水 0.1mL，放入 37℃温箱内 48h，再
于 -20℃冰箱内冷冻 1h，抽取鸡胚尿囊液，测定血凝
滴度。结果见表 3~7。
表 3 绵马贯众水提取物对甲型流感
病毒感染鸡胚的预防作用
系列稀
释倍数
原液稀
释倍数
药物浓度
（mg/mL）
平均血
凝滴度
1 ：1 1 ：512 1.95 -
1 ：2 1 ：1024 0.98 -
1 ：4 1 ：2048 0.49 -
1 ：8 1 ：4096 0.24 -
1 ：16 1 ：8192 0.12 1 ：3.33
1 ：32 1 ：16384 0.06 1 ：40
表 4 绵马贯众乙醚提取物对甲型流感
病毒感染鸡胚的预防作用
系列稀
释倍数
原液稀
释倍数
药物浓度
（mg/mL）
平均血
凝滴度
1 ：1 1 ：128 7.81 -
1 ：2 1 ：256 3.91 -
1 ：4 1 ：512 1.95 -
1 ：8 1 ：1024 0.98 -
1 ：16 1 ：2048 0.49 1 ：7.5
1 ：32 1 ：4096 0.24 1 ：360
表 5 绵马贯众乙醇提取物对甲型流感
病毒感染鸡胚的预防作用
系列稀
释倍数
原液稀
释倍数
药物浓度
（mg/mL）
平均血
凝滴度
1 ：1 1 ：16 62.50 -
1 ：2 1 ：32 31.25 -
1 ：4 1 ：64 15.61 -
1 ：8 1 ：128 7.81 -
1 ：16 1 ：256 3.91 -
1 ：32 1 ：512 1.95 -
表 6 利巴韦林组药物对甲型流感病毒感染鸡胚的预防作用
系列稀
释倍数
原液稀
释倍数
药物浓度
（mg/mL）
平均血
凝滴度
1 ：1 1 ：1 50.00 -
1 ：2 1 ：2 25.00 -
1 ：4 1 ：4 12.50 -
1 ：8 1 ：8 6.25 -
1 ：16 1 ：16 3.13 -
1 ：32 1 ：32 1.56 -
表 7 8% 吐温 -80 对甲型流感病毒感染鸡胚的预防作用
系列稀释倍数 原液稀释倍数 平均血凝滴度
1 ：1 1 ：64 1 ：100
1 ：2 1 ：128 1 ：180
1 ：4 1 ：256 1 ：180
1 ：8 1 ：512 1 ：240
1 ：16 1 ：1024 1 ：400
1 ：32 1 ：2048 1 ：480
注 ：盐水对照组均为阴性，病毒对照组均为 1 ：640。
2.6 药材提取物及阳性对照药对甲型流感病毒感染
鸡胚治疗作用
药物和溶剂原液稀释至最大不凝血剂量，并从
最大不凝血剂量做连续2倍系列稀释至1 ：32，每胚
31
1 2 卷 辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
接种0.1mL 100EID50的病毒悬液，每组 4个鸡胚，并
设生理盐水组和病毒对照组，37℃孵育 2h，然后分
别注射各药物 0.1mL，对照组注射 0.9% 的生理盐水
0.1mL，放入 37℃温箱内 48h，再于 -20℃冰箱内冷
冻 1h，抽取鸡胚尿囊液，测定血凝滴度。结果见表
8~12。
表 8 绵马贯众水提取物对甲型流感
病毒感染鸡胚的治疗作用
系列稀
释倍数
原液稀
释倍数
药物浓度
（mg/mL）
平均血
凝滴度
1 ：1 1 ：512 1.95 -
1 ：2 1 ：1024 0.98 -
1 ：4 1 ：2048 0.49 -
1 ：8 1 ：4096 0.24 -
1 ：16 1 ：8192 0.12 -
1 ：32 1 ：16384 0.06 -
表 9 绵马贯众乙醚提取物对甲型流感
病毒感染鸡胚的治疗作用
系列稀
释倍数
原液稀
释倍数
药物浓度
（mg/mL）
平均血
凝滴度
1 ：1 1 ：128 7.81 -
1 ：2 1 ：256 3.91 -
1 ：4 1 ：512 1.95 -
1 ：8 1 ：1024 0.98 -
1 ：16 1 ：2048 0.49 1 ：70
1 ：32 1 ：4096 0.24 1 ：180
表 10 绵马贯众乙醇提取物对甲型流感
病毒感染鸡胚的治疗作用
系列稀
释倍数
原液稀
释倍数
药物浓度
（mg/mL）
平均血
凝滴度
1 ：1 1 ：16 62.50 -
1 ：2 1 ：32 31.25 -
1 ：4 1 ：64 15.61 1 ：7.5
1 ：8 1 ：128 7.81 1 ：50
1 ：16 1 ：256 3.91 1 ：100
1 ：32 1 ：512 1.95 1 ：160
表 11 利巴韦林组药物对甲型流感
病毒感染鸡胚的治疗作用
系列稀
释倍数
原液稀
释倍数
药物浓度
（mg/mL）
平均血
凝滴度
1 ：1 1 ：1 50.00 -
1 ：2 1 ：2 25.00 -
1 ：4 1 ：4 12.50 -
1 ：8 1 ：8 6.25 -
1 ：16 1 ：16 3.13 -
1 ：32 1 ：32 1.56 -
表 12 8% 吐温 -80 对甲型流感病毒感染鸡胚的治疗作用
系列稀释倍数 原液稀释倍数 平均血凝滴度
1 ：1 1 ：64 1 ：120
1 ：2 1 ：128 1 ：240
1 ：4 1 ：256 1 ：400
1 ：8 1 ：512 1 ：400
1 ：16 1 ：1024 1 ：480
1 ：32 1 ：2048 1 ：480
注 ：盐水对照组均为阴性，病毒对照组均为 1 ：640。
2.7 各药组在最大不凝血剂量直接抑制甲型流感病
毒的作用
用 pH 为 7.4 的 hanks 工作液将药物和溶剂原液
稀释至最大不凝血剂量，并从最大不凝血剂量做连
续 2 倍系列稀释至 1 ：32，分别加入等量 100EID50 的
流感病毒，置 33~35℃温箱中于 1、4、8、16、24h 测各
组药物不同时间点血凝滴度，同时设病毒对照组和
hanks 液对照组。结果见表 13~17。
3 讨 论
本实验对绵马贯众 3 种提取物进行了鸡胚法抗
表 13 绵马贯众水提取物对甲型流感病毒的直接抑制作用
系列稀
释倍数
药物浓度
（mg/mL）
血凝滴度
1h 4h 8h 16h 24h
1 ：1 1.95 1 ：640 1 ：640 1 ：320 1 ：160 1 ：160
1 ：2 0.98 1 ：640 1 ：640 1 ：320 1 ：320 1 ：160
1 ：4 0.49 1 ：640 1 ：640 1 ：640 1 ：320 1 ：160
1 ：8 0.24 1 ：640 1 ：640 1 ：640 1 ：320 1 ：160
1 ：16 0.12 1 ：640 1 ：640 1 ：640 1 ：320 1 ：160
1 ：32 0.06 1 ：640 1 ：640 1 ：640 1 ：320 1 ：160
表 14 绵马贯众乙醚提取物对甲型
流感病毒的直接抑制作用
系列稀
释倍数
药物浓度
（mg/mL）
血凝滴度
1h 4h 8h 16h 24h
1 ：1 7.81 1 ：640 1 ：640 1 ：160 1 ：80 1 ：40
1 ：2 3.91 1 ：640 1 ：640 1 ：160 1 ：80 1 ：80
1 ：4 1.95 1 ：640 1 ：640 1 ：160 1 ：160 1 ：160
1 ：8 0.98 1 ：640 1 ：640 1 ：320 1 ：160 1 ：160
1 ：16 0.49 1 ：640 1 ：640 1 ：320 1 ：160 1 ：160
1 ：32 0.24 1 ：640 1 ：640 1 ：320 1 ：320 1 ：160
表 15 绵马贯众乙醇提取物对甲型
流感病毒的直接抑制作用
系列稀
释倍数
药物浓度
（mg/mL）
血凝滴度
1h 4h 8h 16h 24h
1 ：1 62.50 1 ：640 1 ：640 1 ：160 1 ：40 -
1 ：2 31.25 1 ：640 1 ：640 1 ：160 1 ：40 -
1 ：4 15.61 1 ：640 1 ：640 1 ：160 1 ：80 -
1 ：8 7.81 1 ：640 1 ：640 1 ：160 1 ：80 1 ：40
1 ：16 3.91 1 ：640 1 ：640 1 ：320 1 ：80 1 ：40
1 ：32 1.95 1 ：640 1 ：640 1 ：320 1 ：160 1 ：80
表 16 利巴韦林组药物对甲型流感病毒的直接抑制作用
系列稀
释倍数
药物浓度
（mg/mL）
血凝滴度
1h 4h 8h 16h 24h
1 ：1 50.00 1 ：640 1 ：640 1 ：160 1 ：80 1 ：80
1 ：2 25.00 1 ：640 1 ：640 1 ：160 1 ：80 1 ：80
1 ：4 12.50 1 ：640 1 ：640 1 ：320 1 ：160 1 ：80
1 ：8 6.25 1 ：640 1 ：640 1 ：320 1 ：160 1 ：80
1 ：16 3.13 1 ：640 1 ：640 1 ：320 1 ：160 1 ：80
1 ：32 1.56 1 ：640 1 ：640 1 ：320 1 ：160 1 ：80
表 17 8% 吐温 -80 对甲型流感病毒的直接抑制作用
系列稀
释倍数
原液稀
释倍数
血凝滴度
1h 4h 8h 16h 24h
1 ：1 1 ：64 1 ：640 1 ：640 1 ：320 1 ：320 1 ：160
1 ：2 1 ：128 1 ：640 1 ：640 1 ：320 1 ：320 1 ：320
1 ：4 1 ：256 1 ：640 1 ：640 1 ：320 1 ：320 1 ：320
1 ：8 1 ：512 1 ：640 1 ：640 1 ：320 1 ：320 1 ：320
1 ：16 1 ：1024 1 ：640 1 ：640 1 ：640 1 ：640 1 ：320
1 ：32 1 ：2048 1 ：640 1 ：640 1 ：640 1 ：640 1 ：320
注 ：Hanks 液对照组均为阴性，病毒对照组均为 1 ：640。
甲型流感病毒 FM1 株的实验研究，结果表明 ：（1）
本实验绵马贯众 3 种提取物均有抗甲型流感病毒
FM1 株的作用，与病毒对照组有显著性差异。（2）
绵马贯众的乙醚提取物最大无毒剂量依次为水提取
物、乙醇提取物和乙醚提取物。（3）绵马贯众 3 种提
取物对甲型流感病毒 FM1 株的预防作用从强到弱
的顺序为水提取物、乙醚提取物和乙醇提取物。（4）
绵马贯众 3 种提取物对甲型流感病毒 FM1 株的治疗
作用从强到弱的顺序为乙醇提取物、水提取物和乙
醚提取物。（5）绵马贯众 3 种提取物对甲型流感病
毒 FM1 株的体外直接抑制病毒作用从强到弱的顺
序为乙醇提取物、乙醚提取物和水提取物。◆
参考文献
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