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瘤果槲寄生及其3种寄主齐墩果酸和熊果酸的含量研究



全 文 :书·研究论文·
[基金项目]国家自然科学基金项目(编号:81173537);广西壮族自治区科学研究与技术开发计划项目(编号:桂科攻0992003B-30);广西自然
科学基金项目(编号:2010GXNSFA013264) [作者简介]朱开昕,男,主管中药师,研究方向:主要从事天然药物开发研究、中药制剂研发,电
话:0777-2878443,E-mail:kaixinzhu908@126.com [通讯作者]李永华,男,博士,高级工程师,研究方向:主要从事天然药物开发研究,电话:
0777-2878443,E-mail:liyonghua185@126.com
瘤果槲寄生及其3种寄主齐墩果酸和熊果酸的含量研究
朱开昕1,2,张协君2,苏本伟2,赵明惠2,李静2,裴河欢2,李永华2 (1.钦州市中医院,广西 钦州535000;2.钦州市中
医药研究所,广西 钦州535000)
[摘要] 目的:考察瘤果槲寄生及其3种寄主植物齐墩果酸和熊果酸含量的关系。方法:采用 HPLC法对瘤果槲寄生及其寄
主植物齐墩果酸、熊果酸含量进行测定,齐墩果酸、熊果酸采用乙醇超声提取30 min,用 Agilent Eclipse XDB-C18柱,甲醇-乙
腈-0.05%醋酸铵溶液(12∶67∶21)为流动相,流速1.0mL·min-1,检测波长210 nm。结果:齐墩果酸和熊果酸的线性范围分别
为3.91~313 mg·L-1(r=0.999 8)和8.15~652 mg·L-1(r=0.999 9),与峰面积呈良好线性关系,平均加样回收率分别为
99.27%和99.75%。结论:瘤果槲寄生含齐墩果酸,不含熊果酸。瘤果槲寄生与其寄主齐墩果酸含量没有直接关系,为其自身
固有。
[关键词] 瘤果槲寄生;寄主植物;齐墩果酸;熊果酸;高效液相色谱法
[中图分类号]R927  [文献标识码]A  [文章编号]1001-5213(2012)13-0997-03
Correlation analysis of oleanolic acid and ursolic acid between Viscum ovalifolium DC and its
three kinds of host trees
ZHU Kai-xin1,2,ZHANG Xie-jun2,SU Ben-wei 2,ZHAO Ming-hui 2,LI Jing2,PEI He-huan2,LI Yong-
hua2(1.Qinzhou Hospital of traditional Chinese Medicine,Guangxi Qinzhou535000,China;2.Qinzhou institute of tradition-
al Chinese Medicine,Guangxi Qinzhou 535000,China)
ABSTRACT:OBJECTIVE To analyze the component correlation of oleanolic acid and ursolic acid between Viscum ovalifolium
DC and its three kinds of host trees.METHODS Oleanolic acid and ursolic acid were extracted with ethanol solution by ultra-
sound for 30 minutes,and they were determined by HPLC.Agilent C18column(250 mm×4.6 mm,5μm)was used for the de-
termination,with a flow rate of 1.0mL·min-1and column temperature of 25℃.The mobile phase was methanol-acetonitrile-
0.05%solution of ammonium acetate(12∶67∶21)and detection wave length was 210 nm.RESULTS There were good linearity
in the range of 3.91-313 mg·L-1(r=0.999 8)and 8.15-652 mg·L-1(r=0.999 9)for oleanolic acid and ursolic acid respec-
tively,and the average recovery rates were 97.27%and 99.75%respectively.CONCLUSION Oleanolic acid is accumulated
and ursolic acid is not accumulated in Viacum ovalifoliumDC.The contents of oleanolic acid that fromViscum ovalifoliumDC
and its host trees have no direct relationship,suggesting that oleanolic acid may be the inherent component of Viscum ovalifoli-
um DC.,not the accumulation that from its host trees.
KEY WORDS:Viscum ovalifolium DC;host trees;oleanolic acid;ursolic acid;HPLC
  瘤果槲寄生Viscum ovalifoliumDC.系槲寄生
科槲寄生属植物,广泛分布于海南、广东、广西、云
南、亚洲东南部,实验证明其含有齐墩果酸[1],具有
较高的药用价值,在民间也以“柚寄生”或“寄生”入
药使用,具有健脾消食,活血消肿,化痰止咳等功效。
由于桑寄生有累积寄主化学成分的现象[2-3],本实验
通过对瘤果槲寄生及其3种寄主植物齐墩果酸、熊
果酸含量关系的考察,对瘤果槲寄生是否累积寄主
植物齐墩果酸、熊果酸进行研究。
1 材料
高效 液 相 色 谱 仪 (日 本 岛 津 公 司,LC-
20AT),紫外检测器(日本岛津公司,SPD-20A);
Agilent C18色谱柱(5μm,4.6 mm×250 mm)。齐
墩果酸对照品 (中国药品生物品检定所,批号
110709-200505);熊果酸对照品(中国药品生物品检
定所,批号110742-200516);乙腈、甲醇、乙醇为色
谱纯,其他试剂均为分析纯,水为超纯水。寄主植物
柿树、黄皮树、柚树及其瘤果槲寄生样品均采自广西
境内野生环境,采集时间为2011年7月,寄生植物
·799·中国医院药学杂志2012年第32卷第13期Chin Hosp Pharm J,2012 July,Vol 32,No.13
经中国科学院华南植物研究所丘华兴教授鉴定为瘤
果槲寄生Viscum ovalifolium DC。将采集的样品
洗净阴干,枝叶分开,粉碎过45目备用。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 流动相:甲醇-乙腈-0.05%醋酸铵
溶液(12∶67∶21);检测波长:210 nm;流速:1.0mL
+min-1;柱温:室温。
2.2 溶液的制备 精密称取齐墩果酸3.13 mg,熊
果酸6.52 mg,加乙醇溶解并定容至10 mL,制成每
毫升中含0.313 mg齐墩果酸和0.652 mg熊果酸的
混合对照品母液。另精密称取样品粉末0.5 g,置具
塞锥形瓶中,精密加入乙醇溶液25 mL,超声提取
30 min,冷却补重,摇匀,离心,经0.45μm微孔滤膜
过滤,得样品溶液。
2.3 线性关系考察 将齐墩果酸、熊果酸混合对照
品溶液母液用乙醇溶液分别稀释成含齐墩果酸为
3.91,19.56,39.13,78.25,156.50,313.00mg·L-1和
含熊 果 酸 为8.15,40.75,81.50,163.00,326.00,
652.00mg·L-1对照品溶液,分别进样10μL,记录,
测定峰面积。以质量浓度为横坐标,峰面积为纵坐
标,将所得数据进行线性回归。结果齐墩果酸回归方
程为:Y=4 434.7 X+7 108.1,r=0.999 8,线性范围
为3.91~313.00mg·L-1。熊果酸回归方程为:Y=
4 996.1 X+14 119,r=0.999 9,线性范围为8.15~
652.00mg·L-1。结果表明,齐墩果酸和熊果酸在上
述质量浓度范围内,与峰面积呈良好线性关系。
2.4 稳定性试验 取同一供试品溶液,分别在0,
1,2,4,6,8,12 h进样10μL,测定峰面积,计算
RSD。结果齐墩果酸RSD=0.99%,熊果酸RSD=
0.76%,表明样品在12 h内保持稳定。
2.5 精密度试验 取混合对照品重复进样5次,每
次进样10μL,测定峰面积,计算RSD。结果齐墩果
酸RSD=0.60%,熊果酸RSD=0.90%,表明仪器
精密度符合要求。
2.6 重复性试验 取同一批柿叶样品,共5份,按
“2.2”项下制备样品溶液,分别进样10μL,测定峰面
积,计算含量的RSD。结果齐墩果酸RSD=0.80%,
熊果酸RSD=0.90%,结果表明重复性良好。
2.7 回收率试验 称取已知含量的柿叶样品6份,
分别精密加入齐墩果酸、熊果酸适量,按“2.2”项下
方法制备样品溶液,吸取10μL进样进行测定,计
算。结果见表1。
2.8 含量测定 分别取样品溶液10μL进样,测定
峰面积,计算齐墩果酸、熊果酸的含量,HPLC图谱
见图1,齐墩果酸、熊果酸含量结果见表2。
表1 齐墩果酸、熊果酸加样回收试验结果
Tab 1 Results of recovery test of oleanolic acid and ursolic
acid
名称
原有量
/mg
加入量
/mg
测出量
/mg
回收率
/%
平均回收率
/%
RSD
/%




0.756 8  0.76  1.531 1 101.88
0.758 3  0.78  1.531 6  99.14
0.763 7  0.81  1.553 9  97.56
0.759 5  0.73  1.481 6  98.92
0.765 2  0.75  1.532 1 102.25
0.761 3  0.79  1.518 8  95.89
99.27  2.26



1.451 8  1.46  2.905 6  99.58
1.454 7  1.48  2.961 3 101.80
1.465 2  1.42  2.836 6  96.58
1.457 1  1.45  2.902 3  99.67
1.468 1  1.49  2.921 6  97.55
1.450 5  1.46  2.958 3 103.27
99.75  2.30
图1 对照品及样品高效液相色谱图
A.对照品;B.柿树叶;C.柿树枝;D.柿树瘤果槲寄生叶;E.柿树瘤果
槲寄生枝;F.黄皮叶;G.黄皮枝;H.黄皮瘤果槲寄生叶;I.黄皮瘤果
槲寄生枝;J.柚树叶;K.柚树枝;L.柚树瘤果槲寄生叶;M.柚树瘤果
槲寄生枝;1-齐墩果酸;2-熊果酸
Fig 1 HPLC chromatograms of reference and samples
A.reference;B.Diospyros kaki L.f.leaf;C.Diospyros kaki L.f.
branch;D.Viscum ovalifoliumDC leaf hosted in Diospyros kaki L.
f;E.Viscum ovalifolium DC branch hosted in Diospyros kaki L.f;
F.Folium Clausenae Lansi leaf;G.Folium Clausenae Lansii
branch;H.Viscum ovalifolium DC leaf hosted in Folium Clausenae
Lansii;I.Viscum ovalifolium DC branch hosted in Folium Clause-
nae Lansii;J.Citrus maxima (burm.f.)merr.Leaf;K.Citrus
maxima(burm.f.)merr.branch;L.Viscum ovalifolium DC leaf
hosted in Citrus maxima(burm.f.)merr.;M.Viscum ovalifolium
DC branch hosted in Citrus maxima (burm.f.)merr.;1-oleanolic
acid;2-ursolic acid
·899· 中国医院药学杂志2012年第32卷第13期Chin Hosp Pharm J,2012 July,Vol 32,No.13
表2 桑寄生药材及其寄主植物齐墩果酸、熊果酸含量
Tab 2 The contents of oleanolic acid and ursolic acid of
Chinese Taxilus Herb and their host trees
样品名称
齐墩果酸
/mg·g-1
熊果酸
/mg·g-1
柿树
寄主枝 0.248 2  0.520 2
寄主叶 2.407 3  5.552 3
瘤果槲寄生枝 1.406 7 -
瘤果槲寄生叶 11.980 5 -
黄皮
寄主枝 - -
寄主叶 - -
瘤果槲寄生枝 1.533 3
瘤果槲寄生叶 11.960 7
柚树
寄主枝 - -
寄主叶 - -
瘤果槲寄生枝 3.979 8 -
瘤果槲寄生叶 14.727 7 -
注:以上结果为3批样品测定的平均值
3 讨论
本实验考察过中国药典2010年版一部枇杷叶
项下的流动相甲醇-乙腈-0.05%醋酸铵溶液(12∶67
∶21)及参考文献[5-6]曾采用的乙腈-0.15%磷酸水
(85∶15)、乙腈-甲醇-水-磷酸-三乙胺(50∶30∶20∶
0.02∶0.04)等条件,通过比较,结果选择甲醇-乙腈-
0.05%醋酸铵溶液(12∶67∶21),此条件下基线及分
离较理想。
实验结果表明,3种寄主植物中,只有柿树枝叶
含有齐墩果酸和熊果酸,而3种寄主上的瘤果槲寄
生枝和叶都只含有齐墩果酸,不含熊果酸,推断瘤果
槲寄生齐墩果酸的含量与其寄主齐墩果酸的含量没
有直接关联,应为其自身固有,与寄主没有直接关
系。
参考文献:
[1] 杨燕军,沙聪威,陈梅果.瘤果槲寄生化学成分的研究(Ⅱ)
[J].中国药学杂志,2011,46(1):11-13.
[2] 李永华,卢栋,朱开昕,等.桑寄生及其夹竹桃科寄主植物强心
苷含量相关性研究[J].时珍国医国药,2010,21(6):1397-
1398.
[3] 李永华,苏本伟,张协君,等.桑寄生及其寄主植物桑树1-脱氧
野尻霉素含量相关性研究[J].中国中药杂志,2011,36(15):
2102-2106.
[4] 张前军,赵超,杨小生,等.高效液相色谱法测定连线草中熊果
酸的含量[J].中国中药杂志,2006,31(18):1533-1534.
[5] 戚志华,王四旺,王剑波,等.不同生长期女贞子中齐墩果酸和
熊果酸的含量变化[J].中国中药杂志,2007,32(15):1583-
1585.
[收稿日期]2011-12-22
[基金项目]教育部博士点基金资助项目(编号:20095503120008);重庆市教育委员会资助项目(首批高等学校优秀人才资助) [作者简介]
熊华蓉,女,博士研究生,专业方向:新药研究  [通讯作者]张景勍,女,教授,硕士生导师,研究方向:从事药物新剂型与新技术研究,电话:
13308300303,E-mail:zjqrae01@163.com
美斯地浓缓释片体外释放与体内吸收的相关性
熊华蓉1,谭群友2,罗文1,王睿1,赵春景3,张景勍1 (1.重庆医科大学药物高校工程研究中心和生物化学与分子药理
学重点实验室,重庆400016;2.第三军医大学大坪医院野战外科研究所胸外科,重庆400042;3.重庆医科大学附属第二医院药
剂科,重庆400010)
[摘要] 目的:研究美斯地浓缓释片体外释放与体内吸收的相关性。方法:以水为溶出介质,测定美斯地浓缓释片的体外释
放度,采用高效液相色谱法测定兔口服美斯地浓缓释片后的血药浓度,按照Loo-Riegelman公式计算药物的吸收分数,并对体
内外相关性进行评价。结果:不同时间点的体内吸收百分数与体外累计释放百分数相关系数良好(r=0.997),相关性方程为
Y=1.667 7 X+0.563。结论:美斯地浓缓释片体外释放累积百分数与体内吸收百分数具有显著的体内外相关性。
[关键词] 美斯地浓 缓释片 释放度 体内外相关性
[中图分类号]R945  [文献标识码]A  [文章编号]1001-5213(2012)13-0999-04
Evaluation on the correlation of in vivo mestinon-in vitro release of mestinon sustained-release
tablets
XIONG Hua-rong1,LUO Wen1,TAN Qun-you2,WANG Rui 1,ZHAO Chun-jing3,ZHANG Jing-qing1
(1.Medicine Engineering Research Center in University,Chongqing Key Laboratory of Biochemical&Molecular Pharmacology,
Chongqing Medical University,Chongqing 400016,China;2.Department of Thoracic Surgery,Institute of Surgery Research,
Daping Hospital,Third Military Medical University,Chongqing 400042,China;3.Department of Pharmacy,Second Affilia-
ted Hospital,Chongqing Medical University,Chongqing 400010,China)
ABSTRACT:OBJECTIVE To evaluate the correlation of in vivo absorption-in vitro release of mestinon sustained-release tab-
·999·中国医院药学杂志2012年第32卷第13期Chin Hosp Pharm J,2012 July,Vol 32,No.13