全 文 :The protective effect and to investigate the mechanism of the roots of the Isodonis ternifoliae
on immune liver injury in mice induced by BCG + LPS
Zhou Zhipin,Wang Qin,Ye Xiaoxue,Zhang Quanxing
(Ruikang Hospital of Guangxi Traditional Chinese Medical University,Nanning 530011)
Objective:To study on the protective effect and to investigate the mechanism of the roots of the Isodonis ternifoliae on immune liver in-
jury in mice induced by BCG + LPS in order to supply trust worthy basis. Methods:The experimental liver injury model induced by BCG +
LPS in mice was applied to observe the effect and the mechanism of the roots of the Herba isodonis ternifoliae on immune liver injury. The ac-
tivities of ALT in serum and the pathological damages of liver in the mice were observed. The levels of T-SOD,MDA,TNF-α and IL-6 in se-
rum of mice were detected. Results:The roots of the Herba isodonis ternifoliae could markedly inhibit the activities of ALT and the levels of
MDA,IL-6 (P < 0. 05) ,could increased the activities of T-SOD (P < 0. 05)in blood serum of mice whose livers injured by BCG + LPS,and
could markedly release liver tissue injury. Conclusions:The protective effect of the cultivated Herba isodonis ternifoliae on experimental liver
injury induced BCG + LPS in mice is significant. The mechanism of the protective effect on injured liver of the Herba isodonis ternifoliae may-
be due to its anti-lipid peroxidatuon and adjusting immune action,including decreasing the levels of MDA (P < 0. 05) ,increasing the activi-
ties of T-SOD (P < 0. 05) ,adjusting the levels of,TNF-α,IL-6 in blood serum of mice.
Key words Isodonis ternifoliae(三叶香茶菜) ;immune liver injury
醋炙蓬莪术活血化瘀作用研究
*
孙 涛1,余成浩1**,彭 腾1,廖 建2,冯业琼2,胡 鹏1
(1成都中医药大学,成都 610075;2四川省食品药品安全监测及评审认证中心,成都 610017)
摘 要 目的:探讨醋炙蓬莪术不同提取物(水提物、挥发油、油水混合物、醇提物)的活血化瘀作用。方法:采用毛细血管法
测定凝血时间;建立急性血瘀模型,测定血瘀大鼠全血粘度、血浆粘度、红细胞压积、红细胞变形指数、纤维蛋白原、卡松粘度等。结
果:醋炙蓬莪术水提物 5g生药 /kg、挥发油 5g生药 /kg、油水混合物 5g生药 /kg、醇提物 5g生药 /kg均能显著延长小鼠凝血时间。醋
炙蓬莪术挥发油 5g生药 /kg能够明显降低全血粘度、全血低切相对指数、红细胞聚集指数、全血还原粘度、红细胞变形指数、纤维蛋
白原;醋炙蓬莪术油水混合物 5g生药 /kg能够明显降低全血粘度、全血低切相对指数、红细胞聚集指数、全血还原粘度;醋炙蓬莪术
水提物 5g生药 /kg和醇提物 5g生药 /kg具有降低模型大鼠血液流变学指标的趋势。结论:醋炙蓬莪术能够延长小鼠凝血时间和改
善大鼠血液流变学,提示醋炙蓬莪术具有活血化瘀作用。
关键词 醋炙蓬莪术;活血化瘀;凝血时间;血液流变学
莪术名称始见于《药性论》,古名蓬莪[1],《药物出产辨》记
载产四川为正地道[2]。蓬莪术主产于四川、福建等省,主含
挥发油和姜黄素类成分,研究表明蓬莪术具有抗肿瘤、抗血栓、
抗炎、抗菌、抗病毒、保肝、抗纤维组织增生等作用[3,4]。现将醋
炙蓬莪术不同提取物(水提物、挥发油、油水混合物、醇提物)的
活血化瘀作用进行实验研究。
1 材料和方法
1. 1 试验药物 醋炙蓬莪术由四川省崇州市供给,经成都中医
药大学李敏教授鉴定为 C. phaeocaulis Va1.的干燥根茎。醋炙
蓬莪术水提物:取醋炙蓬莪术,浸泡 30min,加 20 倍量水,煎煮 2
次,每次 1. 5h,水煎液过滤后浓缩至 100%,冷藏备用。醋炙蓬
莪术挥发油:取醋炙蓬莪术样品,采用 CO2 超临界流体萃取法
提取挥发油[5]。醋炙蓬莪术油水混合物:取醋炙蓬莪术,浸泡
30min,按《中国药典》2005 版一部附录用水蒸汽法进行提取挥
发油后,将蒸馏液浓缩,加入挥发油(TWEEN-80 助溶) ,调节为
100%,冷藏备用。醋炙蓬莪术醇提物:取醋炙蓬莪术,浸泡
30min,12 倍量的 80%乙醇回流提取 2 次,每次 1. 5h,回收乙醇,
浓缩至 100%,冷藏备用。复方丹参片,江西桔王药业有限公
司,批号:081101,规格:0. 25g /片。
1. 2 动物 昆明种小鼠 60 只,雌雄各半,体重为 20 ~ 22g;SD
大鼠 70 只,雌雄各半,体重 200 ± 20g。实验动物生产许可证号:
04-11。均由成都中医药大学实验动物研究中心提供。检疫后
备用。
1. 3 试剂 盐酸肾上腺素注射液,重庆迪康长江制药有限公
司,批号:080503,规格:1ml:1g。
1. 4 仪器 SA-6000 型全自动血液粘度测定仪,北京赛科希德
401 中药药理与临床 2012;28(2)
* 基金项目:国家自然科学基金项目(NO. 81001668) ;成都中医药大学自然科学基金项目(ZRYB201140) **通讯作者
DOI:10.13412/j.cnki.zyyl.2012.02.041
科技发展有限公司;挥发油提取器(四川大学华西医学中心玻
璃仪器厂)。
1. 5 方法
1. 5. 1 醋炙蓬莪术各提取物对小鼠凝血时间的影响 取小鼠
60 只,随机分为空白对照组、复方丹参片、醋炙蓬莪术水提物
组、醋炙蓬莪术醇提物组、醋炙蓬莪术挥发油组、醋炙蓬莪术油
水混合物组。各组分别灌胃蒸馏水、复方丹参片药液、醋炙蓬莪
术水提物、醋炙蓬莪术醇提物、醋炙蓬莪术挥发油、醋炙蓬莪术
油水混合物药液 10ml /kg,每日一次,连续给药 6 日。末次给药
1小时后,用玻璃毛细管插入小鼠内眦球静脉丛,深约 4 ~ 5mm,
自血液流进管内开始计时,血液注满后取出毛细管平放于桌
上,每隔 30 秒,折断两端毛细管约 0. 5cm,并缓慢向左右拉开,
观察折断处是否有血凝丝至血凝丝出现为止,所历时间即血凝
时间。
1. 5. 2 醋炙蓬莪术各提取物对大鼠急性血瘀模型血液流变学
的影响 取大鼠 70 只,药物服用方法同前,每日一次,连续给
药 7 日。末次给药 1 小时后,除空白对照组外,其余各组皮下注
射肾上腺素 0. 08ml /100g,共 2 次,两次间隔 4h。在第一次注射
后 2h,将大鼠浸入冰水 5min,然后禁食,于次晨取血检测血液流
变学各指标(全血粘度、血浆粘度、红细胞压积、红细胞聚集指
数、红细胞变形指数、纤维蛋白原、卡松粘度等)。
2 结果
2. 1 对小鼠凝血时间的影响 与空白对照组比较,醋炙蓬莪
术各提取物组(水提物、挥发油、油水混合物、醇提物)均能明显
延长小鼠的凝血时间,结果见表 1。
表 1 对小鼠凝血时间的影响(珋x ± s)
组 别 鼠数(只) 剂量(g /kg) 凝血时间(s)
空白对照组 10 60. 00 ± 34. 64
复方丹参片 10 0. 75 156. 00 ± 36. 88△△
水提物组 10 5. 0 159. 00 ± 37. 54△△
醇提物组 10 5. 0 207. 00 ± 76. 75△△
挥发油组 10 5. 0 201. 00 ± 78. 80△△
油水混合 10 5. 0 189. 00 ± 67. 89△△
与空白对照组比较 △ P < 0. 05,△△ P < 0. 01
2. 2 对大鼠急性血瘀模型血液流变学的影响 与空白对照组
比较,模型对照组全血粘度、血浆粘度、红细胞压积、全血高低切
相对指数、全血还原粘度、红细胞刚性指数、卡松粘度等显著升
高。与模型对照组比较,醋炙蓬莪术挥发油能够明显降低全血
粘度、全血低切相对指数、红细胞聚集指数、全血还原粘度、红细
胞变形指数、纤维蛋白原;醋炙蓬莪术油水混合物能够明显降
低全血粘度、全血低切相对指数、红细胞聚集指数、全血还原粘
度;醋炙蓬莪术水提物和醇提物具有降低模型大鼠血液流变学
指标的趋势,结果见表 2。
表 2 对大鼠急性血瘀模型血液流变学的影响(珋x ± s)
组 别
鼠数
(只)
剂量
(g /kg)
全血粘度切变率(1 /s)
1. 00 5. 00 30. 00 200. 00
空白对照 10 30. 09 ± 4. 16** 12. 72 ± 1. 38** 7. 18 ± 0. 54** 5. 29 ± 0. 34**
模型对照 10 40. 92 ± 7. 94 17. 31 ± 2. 73 9. 56 ± 1. 25 6. 97 ± 0. 84
复方丹参片 10 0. 75 30. 12 ± 4. 55** 12. 91 ± 1. 78** 7. 55 ± 1. 12** 5. 23 ± 0. 68**
水提物组 10 5. 0 43. 67 ± 5. 97 18. 21 ± 1. 81 9. 90 ± 0. 75 7. 10 ± 0. 56
醇提物组 10 5. 0 37. 82 ± 6. 03 16. 20 ± 1. 82 9. 07 ± 0. 80 6. 74 ± 0. 63
挥发油组 10 5. 0 34. 63 ± 0. 83* 15. 53 ± 0. 55* 9. 20 ± 0. 36 6. 98 ± 0. 37
油水混合 10 5. 0 35. 10 ± 5. 76* 15. 25 ± 2. 03* 8. 91 ± 1. 18 6. 81 ± 0. 94
与模型对照组比较 * P < 0. 05,** P < 0. 01(下同)
表 2 对大鼠急性血瘀模型血液流变学的影响(珋x ± s)
组别 剂量(g /kg) 血浆粘度(比) 红细胞压积(%) 全血高切相对指数 全血低切相对指数 红细胞聚集指数
空白对照 1. 71 ± 0. 02* 0. 52 ± 0. 01* 3. 01 ± 0. 34** 17. 68 ± 2. 18** 5. 44 ± 0. 84
模型对照 1. 75 ± 0. 03 0. 55 ± 0. 02 3. 99 ± 0. 44 23. 37 ± 4. 22 5. 85 ± 0. 73
复方丹参片 0. 75 1. 72 ± 0. 05 0. 54 ± 0. 03 3. 34 ± 0. 48** 16. 46 ± 2. 73** 5. 05 ± 0. 68*
水提物组 5. 0 1. 75 ± 0. 02 0. 56 ± 0. 02 4. 10 ± 0. 30 25. 08 ± 3. 13 6. 11 ± 0. 78
醇提物组 5. 0 1. 75 ± 0. 02 0. 54 ± 0. 01 3. 86 ± 0. 35 21. 66 ± 3. 32 5. 61 ± 0. 93
挥发油组 5. 0 1. 75 ± 0. 02 0. 56 ± 0. 02 4. 02 ± 0. 34 19. 59 ± 0. 66** 4. 90 ± 0. 40**
油水混合 5. 0 1. 75 ± 0. 03 0. 55 ± 0. 03 4. 03 ± 0. 61 20. 01 ± 3. 12* 4. 97 ± 0. 29**
表 2 对大鼠急性血瘀模型血液流变学的影响(珋x ± s)
组别
剂量
(g /kg)
全血低切
还原粘度
全血高切
还原粘度
红细胞
刚性指数
红细胞变形
指数 TK
纤维
蛋白原
卡松
粘度
空白对照 54. 68 ± 6. 28** 6. 84 ± 0. 64** 3. 94 ± 0. 42** 0. 66 ± 0. 04** 4. 17 ± 0. 11 4. 13 ± 0. 30**
模型对照 71. 38 ± 12. 79 9. 54 ± 1. 41 5. 46 ± 0. 77 0. 77 ± 0. 05 4. 45 ± 0. 25 5. 55 ± 0. 66
复方丹参片 0. 75 52. 40 ± 7. 54** 7. 20 ± 1. 21** 4. 16 ± 0. 73** 0. 64 ± 0. 04** 4. 27 ± 0. 16 4. 26 ± 0. 51**
水提物组 5. 0 74. 79 ± 9. 56 9. 67 ± 1. 01 5. 54 ± 0. 59 0. 77 ± 0. 04 4. 52 ± 0. 17 5. 59 ± 0. 50
醇提物组 5. 0 66. 23 ± 9. 68 9. 05 ± 1. 15 5. 22 ± 0. 64 0. 74 ± 0. 09 4. 41 ± 0. 09 5. 35 ± 0. 56
挥发油组 5. 0 59. 25 ± 2. 04** 9. 55 ± 0. 98 5. 44 ± 0. 56 0. 72 ± 0. 07* 4. 05 ± 0. 94* 5. 59 ± 0. 45
油水混合 5. 0 60. 72 ± 8. 58** 9. 66 ± 1. 75 5. 51 ± 0. 96 0. 77 ± 0. 05 4. 35 ± 0. 16 5. 50 ± 0. 78
501中药药理与临床 2012;28(2)
3 讨论
3. 1 通过毛细血管法试验和急性血瘀模型血液流变学试验表
明,醋炙蓬莪术不同提取物(水提物、挥发油、油水混合物、醇提
物)具有较好的活血化瘀作用,尤其是挥发油及油水混合物的
活血化瘀作用效果更好,提示醋炙蓬莪术活血化瘀作用的物质
基础是挥发油及油水混合物。
3. 2 《中国药典》2010 年版莪术项下收载姜科植物蓬莪术、广
西莪术或温郁金,其中蓬莪术是川产道地中药材,用于癓瘕痞
块,瘀血经闭,食积胀痛;早期宫颈癌等。笔者前期对醋炙蓬莪
术和醋炙温莪术 CO2 超临界萃取物进行了化学成分比较研究,
结合本次实验研究结果,为蓬莪术的临床应用提供了一定的科
学依据。
参考文献
1 苏敬.新修本草.上海卫生出版社. 1998∶ 195
2 胡世林.中国道地药材原色图说. 山东科学技术出版社. 第 1 版,
1998∶ 250
3 余成浩,彭成,余葱葱.川产道地中药材蓬莪术的研究进展. 时珍国
医国药,2008;19(2)∶ 388 ~ 389
4 万德光,彭成,赵军宁.四川道地中药材志.四川科学技术出版社.第
1 版. 2005∶ 356
5 余葱葱,林琪宇,曾莹,等. 醋炙蓬莪术和醋炙温莪术 CO2 超临界萃
取物的化学成分比较研究.成都中医药大学学报,2010;33(3)∶ 72 ~ 75
玉竹对 STZ诱导的 1 型糖尿病小鼠的降糖作用
张立新1,庞 维2,付京晶3,潘兴瑜2
(1 中国医科大学附属第四医院检验科,沈阳 110005;2中国医科大学免疫学教研室,沈阳 110001;
3辽宁医学院生物化学教研室,锦州 121001)
摘 要 目的:探讨玉竹对链脲佐菌素(STZ)诱导的 1 型糖尿病小鼠的降糖作用及其可能的作用机制。方法:采用多次小剂
量 STZ(mlD-STZ)腹腔注射的方法建立 1 型糖尿病小鼠模型。玉竹提取物 8,4,2g /kg剂量组分别按相应剂量用玉竹提取物灌胃,糖
尿病模型组和正常对照组用蒸馏水灌胃 0. 2ml /只,1 次 /d,共 4 周。每周剪尾取血 1 次,用快速血糖仪监测血糖变化。四周后将小
鼠处死取胰腺做 HE染色,光镜下观察胰腺病理学改变;采用酶联免疫分析(ELISA)法检测小鼠脾细胞上清液中 IFN-γ 和 IL-4 水
平。结果:与糖尿病模型组相比,玉竹提取物 8g /kg和 4g /kg剂量组小鼠血糖明显降低(P < 0. 01)、胰岛炎程度明显缓解、脾细胞上
清液中 IFN-γ水平和 IFN-γ / IL-4 比值明显降低(P < 0. 05 ~ 0. 01) ,而 2g /kg剂量组小鼠上述指标变化不明显;各组小鼠脾细胞上清
液中 IL-4 水平差异无统计学意义。结论:玉竹提取物能明显降低 STZ诱导的 1 型糖尿病小鼠的血糖,其降糖机制可能与抑制 1 型
糖尿病小鼠 Th1 细胞的极化程度,减轻细胞免疫功能对胰岛 β细胞的破坏有关。
关键词 玉竹;链脲佐菌素;1 型糖尿病;血糖;γ干扰素
1 型糖尿病是一种在遗传基础上由环境因素触发的 T细胞
介导的慢性自身免疫性疾病,免疫系统选择性攻击胰岛 β 细
胞,导致 β细胞的损伤以及胰岛素的绝对缺乏。1 型糖尿病发
病机制还不完全清楚,一般认为与 Th1 / Th2 细胞失衡有关[1]。
玉竹(Polygonatum Odoratum (Mill.)Druce)为百合科黄精属中
草药,含有多糖、甾族化合物、糖苷等成分。玉竹具有滋阴润肺、
养胃生津等功效,有降血糖、降血脂、抗肿瘤和免疫调节等作用。
本实验以 mlD-STZ方法诱导的 1 型糖尿病小鼠模型为研究对
象,观察玉竹提取物灌胃治疗对 1 型糖尿病小鼠血糖、胰岛炎程
度及脾细胞分泌的 IFN-γ和 IL-4 水平的影响,探讨玉竹提取物
对 STZ诱导的 1 型糖尿病小鼠的降糖作用及其可能的作用机
制。
1 材料与方法
1. 1 试验药物 玉竹提取物由中国医科大学免疫学教研室潘
兴瑜教授提供∶ 玉竹产自辽阳,将玉竹干燥根茎洗净、去须根、
切碎,30%乙醇浸提,G4 过滤分离,旋转蒸发仪蒸发回收乙醇,
得黄棕色沉淀烘箱干燥后成浸膏备用,使用前分别配制成所需
浓度的溶液。
1. 2 动物 清洁级、6 周龄雄性 BALB /c小鼠,由长春生物制品
研究所提供,许可证编号∶ SCXK-2006-0001。标准饲料,饲养时
自由进食进水,适应性喂养 1 周。
1. 3 试剂 STZ(美国 Sigma 公司) ;血糖试纸(德国罗氏公
司) ;小鼠 IFN-γ、IL-4 ELISA 试剂盒(R&D Systems,美国)。0.
1mol / l pH4. 4 枸橼酸钠缓冲液;0. 4% STZ-枸橼酸钠缓冲液(注
∶ 因 STZ 易升华,整个配制过程应在冰盒上操作,通常现用现
配,配好后 10min 内用完)。
1. 4 仪器 罗氏血糖仪(ACCU-CHCK Active,德国) ;酶标仪
(InterMed NJ-2100) ;CO2恒温培养箱(TopIncu 150,香港)。
1. 5 方法 小鼠 34 只,随机抽取 6 只小鼠为正常对照组(只注
射等体积的枸橼酸钠缓冲液) ,其余小鼠采用 mlD-STZ 方法诱
导 1 型糖尿病模型,用 0. 4% STZ-枸橼酸钠溶液按 40mg /kg 的
剂量给小鼠腹腔注射,1 次 /d,连续 5d,从 STZ 末次注射开始以
后每周测空腹血糖 1 次,以连续 2 周血糖 > 12 mmol /L 为造模
成功[2],低于此值弃去。从造模成功的小鼠中随机抽取一只处
601 中药药理与临床 2012;28(2)