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海木氯仿提取物活血化瘀作用的研究



全 文 :度的重楼总皂苷作用于人鼻咽癌 CNE-2Z 细胞 24h
后观察到凋亡峰,随着重楼总皂苷浓度的增加,凋亡
峰面积增加,凋亡细胞增加,说明重楼总皂苷通过改
变细胞周期来诱导凋亡。
本研究结果表明,重楼总皂苷对人鼻咽癌 CNE-
2Z细胞增殖有一定的抑制作用,可通过改变细胞周
期来诱导肿瘤细胞的凋亡,但其作用机制还需进一
步的研究。
参考文献:
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海木氯仿提取物活血化瘀作用的研究
李家洲, 卢海啸, 邓远禹, 黎建玲
(玉林师范学院,广西 玉林 537000)
收稿日期:2010-05-01
基金项目:广西教育厅科研项目(200810MS126)
作者简介:李家洲(1958 -),男,副教授,主要从事药理学和生理学的教学和研究工作。Tel:13907750778 E-mail:ljz5810@ 163. com
关键词:海木;氯仿提取物;活血化瘀
摘要:目的:观察海木氯仿提取物的活血化瘀作用。方法:采用肾上腺素联合冰浴制作大鼠血瘀模型,检测血瘀模型大鼠
全血黏度、血浆黏度、血沉、红细胞压积、血小板聚集率和凝血时间等血液流变学指标;采用肠系膜滴加肾上腺素建立大
鼠微循环急性障碍模型,检测肠系膜微动脉管径、血液流态、毛细血管网交点数的改变等指标。结果:不同剂量的海木氯
仿提取物均能明显降低血瘀模型大鼠的全血黏度、血浆黏度以及红细胞压积、血沉和血小板聚集率,延长凝血时间;能显
著拮抗微循环急性障碍模型大鼠肠系膜微动脉的收缩作用,改善血液流态,提高肠系膜毛细血管网交点开放率。其中以
高剂量组作用最强,呈现明显的量效关系。结论:海木氯仿提取物具有显著的活血化瘀作用。
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-1528(2011)01-0029-05
Activating blood and dissolving stasis of chloroform extract of Trichilia con-
naroides
LI Jia-zhou, LU Hai-xiao, DENG Yuan-yu, LI Jian-ling
(Yulin Normal College,Yulin 537000,China)
KEY WORDS:Trichilia connaroides;chloroform extract;activating blood and dissolving stasis
ABSTRACT:AIM:To observe the activating blood and dissolving stasis of the chloroform part of Trichilia con-
naroides. METHODS:The blood stasis model of rats was set up by combining the adrenalin and ice-bath,and the
whole blood viscosity,plasma viscosity,erythrocyte sedimentation rate,red blood cell hematocrit ,platelet aggre-
gation ratio,coagulation time were tested;acute microcirculation disturbance was established by dripping adrenine
on the mesentery,and the arteriole diameter,blood flow pattern,the change in the capillary network cross point
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number on rat mesenteric microcirculation were observed. RESULTS:Different dose of chloroform extract of
Trichilia connaroides decreased the whole blood viscosity,plasma viscosity,erythrocyte sedimentation rate,red
blood cell hematocrit,platelet aggregation ratio,and prolonged coagulation time in the acute blood stasis model;
All dose of chloroform extract could reduce the contraction of mesenteric arteriolar,improve blood flow pattern and
the open-rate of the capillary network cross point on rat mesentery microcirculation in prportion to amount of chloro-
form extract of Trichilia connaroides with dose effect relation. CONCLUSION:Chloroform extract of Trichilia con-
naroides possesses obvious effect of activating blood and dissolving stasis.
海木(Trichilia connaroides)为楝科(Meliaceae)
植物,别名老虎楝、鹧鸪花[1]。有清热解毒,祛风湿
腰腿痛,祛心、胃气痛等功效[2]。有研究报道,海木
氯仿提取物有止痛作用和抗炎活性[3]。海木的抗
炎解毒和镇痛作用是否与其对血液循环系统的作用
有关,本实验从探讨药物活血化瘀的角度出发,观察
海木氯仿提取物对大鼠微循环和血液流变性及血小
板聚集状态的影响。
1 实验材料
1. 1 动物 SD 大鼠,♂性,体重(260 ± 50)g,清洁
级。购于广西医科大学实验动物中心,许可证号:
SCXK桂 2003-000。
1. 2 药材 海木枝叶,采于广西桂林市永福县寿
城,经广西植物研究所刘演研究员鉴定为楝科植物
海木。采后粉碎,60℃烘干备用。
1. 3 试剂 硫酸阿托品片(山东省莒南制药厂,批
号:070901);盐酸肾上腺素(广州白云山明兴制药
有限公司,批号:081101);丹参片(合肥神鹤双鹿药
业有限责任公司,批号:0207314)。
1. 4 仪器 BI2000 医学图象分析系统(成都泰盟
科技有限公司生产);RE-2000 旋转蒸发器(上海亚
荣生化仪器厂);L BY-NJ 2 型血液凝聚仪(北京普
利生仪器中心);FASCO-3010A 型全自动血流快测
仪(重庆大学维多生物工程研究所)。
2 方法
2. 1 海木氯仿提取物的制备 称取海木干枝叶适
量,加入适量的无水乙醇,加热回流 2h,重复提取 3
次,合并提取液,减压回收溶剂,得膏状物,将此膏状
物用乙醇:水 = 1:3 的比例除去叶绿素,回收溶剂至
无乙醇味,然后依次用石油醚、氯仿进行液-液萃取,
即得到石油醚部分和氯仿部分。再分别减压回收溶
剂至干,最后得到的膏状物即是石油醚提取物和氯
仿提取物。本研究选用氯仿提取物,使用时用生理
盐水配置成悬浮液。
2. 2 对血瘀模型大鼠血液流变学指标及血小板聚
集功能的影响 按文献[4]的方法,将 SD 大鼠随机
分为 6 组:空白对照组,模型组,丹参片阳性对照组
(1 000 mg /kg),海木高、中、低剂量组(100 mg /kg、
50 mg /kg、25 mg /kg,1 mg海木提取物相当于 0. 07 g
生药),每组 10 只。造模前 7 d开始灌胃给药,1 次 /
d。给药 6 d后,除空白对照组外的其余 5 组均皮下
注射盐酸肾上腺素,再放入 4℃冰水中 5 min。造模
后禁食,次日灌胃给药后 2 h,先用毛细玻管法[5]检
测凝血时间,然后自颈动脉放血,检测血瘀模型大鼠
血液流变学指标。
2. 3 对肠系膜急性微循环障碍模型大鼠微血管及
血液流态的影响 将 SD 大鼠随机分为 5 组:空白
对照组(灌胃等容生理盐水);阳性对照组(按 0. 3
mg /kg灌胃硫酸阿托品溶液);海木高、中、低剂量组
(同 2. 2 项)。各组连续灌胃给药 7 d,1 次 /d。第 7
天起禁食,自由饮水,24 h 后完成末次给药[6]。末
次给药 30 min 后腹腔注射 20 % 氨基甲酸乙酯
(1 000 mg /kg)麻醉,然后开腹,将盲肠附近的一段
回肠轻轻拉出,选取一段肠系膜平铺于注满台氏液
的恒温台(37 ℃)上,利用图象分析系统录像未滴加
盐酸肾上腺素状态下肠系膜微循环情况,作为组内
对照。然后向选定区域滴加 1 ∶ 100 000 的盐酸肾
上腺素(Ad),监测各组 1、5、10、15、20、25、30 min的
大鼠肠系膜微动脉直径,计算血管口径变化率[血
管口径变化率 =(给药后血管口径 /给药前血管口
径)× 100%];记录肠系膜微血管血液流态[7](线流
为 1 级,线粒流为 2 级,粒线流为 3 级,粒流为 4 级,
粒缓流为 5 级,粒摆流为 6 级,停滞为 7 级);计算毛
细血管开放率[毛细血管开放率 =(用药后毛细血
管开放数 /用药前毛细血管开放数)× 100%][5,6]。
2. 4 统计学处理 数据用(x ± s)表示,采用
SPSS17. 0 统计软件进行分析,实验结果采用单因素
方差分析法进行分析,组间比较用 t检验。
3 结果与分析
3. 1 海木对血瘀模型大鼠血液流变学指标及血小
板聚集功能的影响 表 1、表 2 结果显示:模型组与
空白组比较,各指标均有显著性差异(P < 0. 05、
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0. 01),说明模型复制成功。此外,不同剂量的海木
提取物均能明显降低血瘀模型大鼠的全血黏度、血
浆黏度以及红细胞压积和血沉等指标,抑制血小板
聚集和抗凝血的作用,与模型组比较差异均有显著
性(P < 0. 05、0. 01),其中高剂量组的作用最明显。
表 1 海木对血瘀模型大鼠血液流变学指标的影响(x ± s,n =10)
Tab. 1 Effect of hemorheologic index of blood stasis model rat from Trichilia connaroides extract (x ± s,n =10)
组别 剂量 /(mg /kg)
全血黏度 /(mpa·s)
低切 中切 高切
血浆黏度 /(mpa. s)
空白对照组 等容 11. 81 ± 1. 81 7. 12 ± 0. 63 5. 81 ± 0. 53* 1. 30 ± 0. 21
模型组 等容 18. 18 ± 5. 24 10. 11 ± 0. 72 8. 23 ± 0. 61 3. 11 ± 0. 22
丹参片组 1 000 12. 23 ± 2. 17 7. 55 ± 0. 82* 6. 01 ± 0. 65* 1. 35 ± 0. 24
海木高剂量组 100 13. 01 ± 2. 94 7. 50 ± 1. 47* 6. 06 ± 0. 52* 1. 32 ± 0. 08
海木中剂量组 50 14. 95 ± 3. 66* 8. 53 ± 1. 01* 6. 62 ± 0. 59* 1. 64 ± 0. 25*
海木低剂量组 25 15. 01 ± 3. 69* 8. 54 ± 1. 28* 6. 89 ± 0. 72 1. 73 ± 0. 30*
与模型组比较,* P < 0. 05,P < 0. 01。
表 2 海木对血瘀模型大鼠血流及血小板聚集功能的影响(x ± s,n =10)
Tab. 2 Effect of blood flow and platelet aggregation action of blood stasis model rat from
Trichilia connaroides extract(x ± s,n =10)
组别 剂量 /(mg /kg) 血沉 /(mm/h) 红细胞压积 /% 血小板最大聚集率 /% 凝血时间 / s
空白对照组 等容 0. 82 ± 0. 61 39. 12 ± 4. 54 68. 51 ± 4. 82 67. 30 ± 13. 21
模型组 等容 13. 41 ± 7. 24 49. 92 ± 6. 72 79. 45 ± 7. 83 42. 41 ± 9. 22
丹参片组 1 000 4. 53 ± 2. 17 41. 10 ± 3. 12 64. 31 ± 4. 32 108. 35 ± 20. 24
海木高剂量组 100 5. 65 ± 2. 44 40. 41 ± 5. 47 53. 28 ± 6. 10 107. 37 ± 18. 31
海木中剂量组 50 6. 44 ± 3. 16 42. 11 ± 6. 01* 54. 55 ± 6. 92 98. 63 ± 16. 25
海木低剂量组 25 7. 52 ± 3. 69* 43. 84 ± 6. 71* 55. 47 ± 7. 21 91. 56 ± 17. 20
与模型组比较,* P < 0. 05,P < 0. 01。
3. 2 海木对 Ad 所致大鼠肠系膜微动脉管径改变
的影响 由表 3 可见,滴加 Ad 1 min 后,各组大鼠
肠系膜微动脉显著收缩,但海木高、中剂量组和阳性
对照组一样,相对于空白对照组其血管收缩程度较
小,在 5 min时有显著性差异(P < 0. 05),在 10 ~ 20
min时有非常显著性差异(P < 0. 01);低剂量组在
10 ~ 15 min时有显著性差异(P < 0. 05)。而且高剂
量组和阳性对照组的血管口径在 20 min 时,中剂量
组在 25 min时已基本完全恢复,而空白对照组在 30
min后才基本完全恢复。
表 3 海木对大鼠肠系膜微动脉管径的影响(%,x ± s,n =10)
Tab. 3 Effect of the diameter of mesenteric arteriole of rat from Trichilia connaroides extract(%,x ± s,n =10)
组别
给肾上腺素后
1 min 5 min 10 min 15 min 20 min 25 min 30 min
空白对照组等 64. 4 ± 18. 3 37. 1 ± 3. 5 39. 8 ± 3. 9 64. 6 ± 11. 6 80. 4 ± 15. 0 93. 4 ± 13. 8 98. 7 ± 11. 3
硫酸阿托品组(0. 3 mg /kg) 68. 8 ± 16. 7 48. 5 ± 4. 2* 61. 5 ± 10. 9 86. 9 ± 12. 4 98. 9 ± 11. 9 99. 5 ± 11. 3 99. 8 ± 12. 4
海木高剂量组(100 mg /kg) 67. 9 ± 17. 5 49. 0 ± 3. 4* 59. 3 ± 10. 4 87. 3 ± 11. 4 99. 5 ± 12. 3 99. 2 ± 13. 7 99. 6 ± 13. 5
海木中剂量组(50 mg /kg) 66. 8 ± 15. 7 47. 1 ± 4. 1* 56. 8 ± 9. 1 82. 9 ± 11. 5 94. 2 ± 12. 2* 98. 8 ± 13. 2 99. 3 ± 16. 2
海木低剂量组(25 mg /kg) 64. 9 ± 14. 3 41. 6 ± 5. 2 51. 5 ± 8. 4* 75. 7 ± 9. 5* 85. 6 ± 105 96. 7 ± 9. 8 99. 4 ± 11. 7
与空白组相比:* P < 0. 05,P < 0. 01。
3. 3 海木对 Ad 所致大鼠肠系膜急性微循环障碍
毛细血管网交点开放数的影响 结果见表 4。滴加
Ad后,肠系膜血管收缩,1 min时毛细血管网交点完
全不开放,5 min 时除空白对照组外其余各给药组
的毛细血管开始逐渐开放,10 min 时空白对照组的
才逐渐开放,而且其毛细血管网交点开放数显著低
于各给药组。高、中剂量组的毛细血管网交点开放
率在 25 min 时和阳性对照组一样,已差不多达到
100%,而空白对照组在 30 min 后才基本达到
100%。
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表 4 海木对大鼠肠系膜毛细血管开放数的影响(%,x ± s,n =10)
Tab. 4 Effect of the open rate of mesenteric capillary of rat from Trichilia connaroides extract(%,x ± s,n =10)
组别
给肾上腺素后
1 min 5 min 10 min 15 min 20 min 25 min 30 min
空白对照组等容 0 0 12. 3 ± 4. 9 51. 3 ± 6. 4 66. 7 ± 7. 7 87. 7 ± 9. 6 97. 7 ± 12. 5
硫酸阿托品组(0. 3 mg /kg) 0 8. 3 ± 3. 5 45. 8 ± 11. 7 79. 8 ± 14. 4 91. 7 ± 7. 8 100 100
海木高剂量组(100 mg /kg) 0 12. ± 3. 1 52. 1 ± 11. 1 75. 8 ± 14. 7 92. 2 ± 10. 0 99. 8 ± 14. 4 100
海木中剂量组(50 mg /kg) 0 6. 3 ± 2. 7 43. 6 ± 9. 0△ 71. 9 ± 8. 3* 85. 3 ± 10. 8* 97. 9 ± 15. 1 100
海木低剂量组(25 mg /kg) 0 2. 1 ± 1. 8 35. 9 ± 10. 2* 66. 5 ± 14. 3 77. 6 ± 16. 5 94. 4 ± 12. 5 99. 5 ± 11. 6
与空白组相比,* P < 0. 05,P < 0. 01。
3. 4 海木对 Ad 所致大鼠肠系膜微动脉血液流态
改变的影响 表 5 结果显示,滴加 Ad后 1 min,大鼠
肠系膜微动脉血液流态级数增高,此时各组间无显
著差异(P > 0. 05),5 min时各给药组血液流速开始
逐渐加快,与空白组比较,高剂量组此时已有非常显
著性差异(P < 0. 01),到 20 min 时基本恢复到给予
Ad前的流态;中剂量组有显著性差异(P < 0. 05),
10 min时有非常显著性差异(P < 0. 01),25 min 时
基本恢复到给予 Ad 前的流态,而空白对照组在 30
min时尚未完全恢复到给予 Ad前的流态。
表 5 海木对大鼠肠系膜微动脉血液流态改变的影响 (级,x ± s,n =10)
Tab. 5 Effect of blood flow states of mesenteric capillary of rat from Trichilia connaroides extract (level,x ± s,n =10)
组别
给肾上
腺素前
给肾上腺素后
1 min 5 min 10 min 15 min 20 min 25 min 30 min
空白对照组等容 1. 4 ± 0. 5 6. 7 ± 0. 5 6. 9 ± 0. 4 6. 8 ± 0. 4 5. 6 ± 0. 5 3. 8 ± 0. 5 2. 4 ± 0. 4 1. 6 ± 0. 3
硫酸阿托品组(0. 3 mg /kg) 1. 3 ± 0. 5 6. 1 ± 0. 6 5. 5 ± 0. 3* 4. 5 ± 0. 9 3. 0 ± 0. 9 1. 5 ± 0. 7 1. 3 ± 0. 5* 1. 3 ± 0. 5
海木高剂量组(100 mg /kg) 1. 1 ± 0. 4 6. 2 ± 0. 5 5. 0 ± 0. 9 3. 3 ± 0. 7 2. 3 ± 0. 46 1. 2 ± 0. 5 1. 1 ± 0. 3 1. 1 ± 0. 4
海木中剂量组(50 mg /kg) 1. 2 ± 0. 6 6. 4 ± 0. 4 6. 0 ± 0. 5* 5. 0 ± 0. 5 3. 8 ± 0. 6 2. 0 ± 0. 5 1. 3 ± 0. 5* 1. 2 ± 0. 5
海木低剂量组(25 mg /kg) 1. 4 ± 0. 3 6. 5 ± 0. 7 6. 4 ± 0. 4 5. 5 ± 0. 6* 4. 3 ± 0. 3* 2. 5 ± 0. 4* 1. 5 ± 0. 2 1. 5 ± 0. 4
与空白组相比,* P < 0. 05,P < 0. 01。
4 讨论
本实验表明,大鼠经给予肾上腺素和冰水处理
后,造成全血黏度和血浆黏度升高,红细胞压积值增
加,血沉加快,血小板聚集率和体外血栓形成均明显
增加。而海木氯仿提取物能降低血液黏度、抑制血
小板聚集和体外血栓形成。大鼠肠系膜微循环试验
表明,该药能显著拮抗肾上腺素所致肠系膜急性微
循环障碍的微血管收缩,改善血液流态。综上所述,
海木提取物具有显著的活血化瘀作用,通过调节微
循环来消散瘀血,可能是其活血化瘀作用的主要途
径;海木的活血化瘀作用,可能是其清热解毒、抗炎
镇痛的药理学基础。
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