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金荞麦叶茶抗2型糖尿病的作用及机制研究



全 文 :书收稿日期:2013-07-17; 修订日期:2013-12-03
基金项目:国家燕麦荞麦现代农业产业技术体系专项资金
( CARS - 08 - A4) ;
贵州省科技厅科学技术基金项目 ( 黔科合 J字[2012]2268) ;
贵州省科技厅国际合作项目( 黔科合外 G字[2013]7021 ) ;
贵州省荞麦产业技术科技创新团队( 黔科合人才团队( 2011 )
4007) ;
贵州省贵阳市科技计划项目( 筑科合同[2011102]1 - 12)
作者简介:黄小燕( 1967-) ,女( 汉族) ,贵州贵阳人,贵州师范大学生命科
学学院教授,硕士学位,主要从事资源植物学研究工作.
* 通讯作者简介:陈庆富( 1966-) ,男( 汉族) ,贵州沿河人,贵州师范大学
生命科学学院植物遗传育种研究所教授,博士学位,主要从事植物遗传育
种研究工作.
金荞麦叶茶抗 2 型糖尿病的作用及机制研究
黄小燕1,王建勇1,陈庆富2*
(1.贵州师范大学生命科学学院,贵州 贵阳 550001;
2.贵州师范大学生命科学学院植物遗传育种研究所,贵州 贵阳 550001)
摘要:目的 探讨金荞麦叶茶对实验性 2 型糖尿病小鼠血脂、血糖的影响、体内抗氧化活性以及肝脏、胰腺损伤的保护作
用。方法 采用四氧嘧啶诱导加高脂高热量饲料喂养的方法建立小鼠 2 型糖尿病模型,血糖仪检测各组小鼠的空腹血
糖,氧化酶法测定血清总胆固醇( TC) 、甘油三酯( TG) 、高密度脂蛋白( HDL - C) 和低密度脂蛋白( LDL - C) 的变化及测
定超氧化物歧化酶( SOD) 水平、丙二醛( MDA) 含量,并在光镜下观察小鼠胰腺和肝脏形态学改变。结果 治疗组小鼠血
糖、血脂有下降趋势、MDA的活力明显降低( P < 0. 05) ,而 SOD活力显著提高( P < 0. 05) ,并可改善 2 型糖尿病小鼠的胰
腺、肝脏病变。结论 金荞麦叶茶可以降低 2 型糖尿病小鼠血糖、TC、TG,可能与其清除自由基,抗脂质过氧化作用有关,
对 2 型糖尿病小鼠胰腺、肝脏损伤具有一定保护作用。
关键词:金荞麦叶茶; 2 型糖尿病小鼠; 血糖; 血脂; 体内抗氧化
DOI标识:doi: 10. 3969 / j. issn. 1008-0805. 2014. 06. 020
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2014) 06-1334-04
Golden buckwheat ( Fagopyrum cymosum) leaf tea function and mechanism of resistance
to type II diabetes
HUANG Xiao-Yan1,Wang Jian-Yong1,CHEN Qing-Fu2*
( 1. School of Life Science,Guizhou Normal University,Guiyang 550001,China; 2. Institute of Plant Genetics and
Breeding,Guizhou Normal University,Guiyang 550001,China)
Abstract: Objective To evaluate the effects of golden buckwheat leaf tea on blood lipids,blood glucose,antioxidant activity,and
liver and pancreas damage protection by means of rat model.Methods Experimental mice model was established by feeding high
- fat diet and intraperitoneal injection of small - dose Alloxan,and fasting blood glucose of these mice was tested. The changes of
serum total cholesterol ( TC) ,triglycerides ( TG) ,high density lipoprotein ( HDL - C) and low density lipoprotein ( LDL - C)
were determined by means of oxidase. The T - SOD activity and MDA contentration of all mice serum were determined by Kit,and
the morphological changes of the pancrea and liver tissue in mice were observed under the light microscope. Results There were a
decrease in the treatment group blood lipids,blood glucose in mice golden buckwheat leaf tea could significantly increase the T -
SOD activities of Type 2 diabetes mellitus serum( P < 0. 05) ,and obviously decrease the concentration of MDA( P < 0. 05) ,the
difference between their pathological injuries was significant( P < 0. 05) ,the model group was obviously higher than that of the oth-
er groups. Conclusion the golden buckwheat leaf tea have significant antioxidative effect and some protective effects on injuries of
pancrea and liver of type 2 diabetes mice.
Key words: Golden buckwheat leaf tea; Type 2 diabetes mice; MDA; Blood lipids; Blood glucose
金荞麦为蓼科植物[1],是我国民间常用的一种中药。药用
其根茎,中医认为其味微辛、涩,性凉,具有清热解毒、排脓祛痰、
祛风化湿之功效。现代药理研究发现,金荞麦具有较强的抗癌活
性及加强机体自我防疫能力等功能,在临床上可用于治疗癌症及
糖尿病、高脂血症、风湿病等多种疾病。金养麦具有较高的药用
价值和良好的应用前景,且金荞麦的籽粒、根、茎、叶及花都含有
黄酮类物质[2 ~ 4]。其中,叶和花的黄酮含量最高,可达 5%以上,
是其它部位黄酮含量 2 倍以上[5,6],贵州师范大学荞麦产业技术
研究中心以高黄酮含量品种金荞麦 1 号的叶为材料(黄酮含量
可达 8%以上)[5,6],采用常规制茶工艺,开发出了金荞麦叶茶新
产品,初步探讨其对四氧嘧啶诱导加高脂高热量饲料喂养的方法
建立小鼠 2 型糖尿病模型的治疗保健作用,并进一步研究其作用
机制。大量动物实验和临床研究证明,患糖尿病时存在着明显的
氧化应激效应[7],糖尿病活性氧增多的确切机制尚未完全阐明,
可能的原因:升高的血糖和糖化血红蛋白自氧化使自由基的产生
增加,机体抗氧化系统清除自由基的能力减弱,葡萄糖自氧化产
生的醛基进一步氧化修饰蛋白质,导致蛋白质结构和功能改变而
参与氧化应激[8]。而糖尿病患者心血管、肾脏、肝脏、胰腺以及
外周神经病变的症状明显,一直受到研究者重视,研究认为氧化
应激在糖尿病并发症的发生中起到了关键的作用。研究同时发
现,2 型糖尿病发生中,常同时存在脂代谢紊乱,超过一半的 2 型
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糖尿病患者合并脂代谢紊乱,造成脂肪酸在胰岛内沉积,导致胰
岛细胞的“脂毒性”和“脂凋亡”,继而引起胰岛功能衰竭[9]。肝
脏有大量胰岛素受体,肝脏得不到滋养时,必然会使代谢产生的
有害物质积聚,进一步损伤肝细胞线粒体,使其能量供应受损,核
糖体合成蛋白质的活性下降,肝脏合成蛋白质的能力减弱。研究
发现,糖尿病时,肝脏中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天冬氨酸氨基
转移酶(AST),一氧化氮(NO)等指标的异常与胰岛素代谢异常
密切相关[10]。而肝脏、胰腺的损伤又进一步加剧了血糖及脂肪
代谢的紊乱。
对目前该新产品的保健功能研究尚未有报道。本研究开展
金荞麦叶茶对 2 型糖尿病模型动物小鼠血糖、血脂的综合研究,
同时也研究金荞麦茶影响动物体内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二
醛(MDA)含量的变化,并在光镜下观察小鼠胰腺和肝脏形态学
改变,进一步探究金荞麦茶的药用机制,为荞麦属药用植物资源
的进一步利用及综合开发奠定基础。
1 材料与仪器
1. 1 动物 KM种小鼠,由重庆腾鑫生物有限公司提供,体质量
18 ~ 20g,雌雄各半。分笼饲养于贵州省贵阳中医学院药理教研
室实验室。动物适应性喂养 1 周后开始实验。室温 18 ~ 28℃,
相对湿度 62% ~80%。
1. 2 金荞麦茶样品制备 金荞麦茶由贵州师范大学植物遗传育
种研究所提供,采摘金荞麦的鲜叶,经杀青、脱水、初揉、烘二青、
复揉、烘培等工艺制成干茶,取 80 g干茶用 1 500ml水煮,90℃水
浴加热浓缩至浓稠状,蒸馏水稀释至 75ml,0. 1ml /10g灌胃,分别
采用低剂量为 5. 3g /kg和高剂量为 8g /kg给药,按要求配制相应
浓度药液,冰箱保存备用。
1. 3 主要试剂 高糖高脂饲料(蛋黄 2. 5%,蔗糖 20%,猪油
10%,基础饲料 67. 5%);生理盐水(重庆大新药业股份有限公
司,批号:09082210);95%医用酒精(贵州宏泰工贸保健品厂,批
号:09082305);四氧嘧啶(Sigma公司);盐酸比格列酮片(江苏德
源药业有限公司,生产批号:11110351);高密度脂蛋白胆固醇
(HDL - C)测定试剂盒 (批号:LA05110816)、低密度脂蛋白胆固
醇(LDL - C)测定试剂盒 (批号:LA05110815,北京世纪沃德生物
科技有限公司);胆固醇测定试剂盒(批号:BD1315)、甘油三酯测
定试剂盒(批号:BA1293,Siemens Healthcare Diagonstics inc.);
总超氧化物歧化酶(T - SOD 生产批号:20120903)测定试剂盒、
丙二醛(MDA生产批号:20120905)测定试剂盒:购自南京建成生
物工程研究所;其他试剂均为分析纯。
1. 4 主要仪器设备 RE - 52A 旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器
厂);循环水式真空泵(上海科兴仪器有限公司) ;数显恒温水浴
锅(国立常州实验设备研究所);METTLER AB104 - N 电子天
平;稳豪血糖仪(强生公司);RXL -全自动生化仪 仪器型号:Di-
mension RXL Max。
2 方法[14 ~ 17]
2. 1 阳性对照药液的制备 取盐酸吡格列酮片,研碎溶于纯净
水配制成浓度为 0. 001g·ml -1的盐酸吡格列酮水溶液。用前摇
匀。
2. 2 模型[11 ~ 13] 模型的建立:KM 种小鼠,随机检测血糖后,符
合正常小鼠血糖标准。随机取 10 只作为正常对照组。其余动物
给以高糖高脂饲料喂养,连续 8 周。随机抽取样本,禁食不禁水
12 h,进行血糖、血脂检测,判断血脂、血糖情况,建立高糖高脂胰
岛素抵抗模型,动物禁食不禁水 12 h后,给予腹腔注射小剂量四
氧嘧啶(180mg /kg)继续造模。2 d 后,禁食不禁水 12 h,检测动
物空腹血糖,以血糖值≥10mmol /L为建立 2 型糖尿病模型标准,
筛选造模成功动物。
2. 3 动物分组及处理 正常小鼠 10 只为正常对照组。取空腹血
糖高于 10mmol /L的小鼠 40 只造模成功的大鼠,随机分为 4 组,
分别为模型组,阳性对照组,中药高剂量组、低剂量组。实验期间
正常对照组小鼠均给予普通饲料喂养,另外四组继续高糖高脂饲
料喂养,给药高、低剂量组每日金荞麦叶茶分别为:8g /kg 和
5. 3g /kg,阳性对照组每日盐酸吡格列酮 4mg /kg,模型组和空白
对照组每日灌胃相应体积的蒸馏水,连续给药 2 周。
2. 4 金荞麦叶茶对四氧嘧啶诱导的 2 型糖尿病小鼠血糖水平的
影响 末次给药后,动物禁食不禁水 12h,次日 8 时,尾静脉取血,
用血糖仪检测各组大鼠的空腹血糖。
2. 5 金荞麦叶茶对四氧嘧啶诱导的 2 型糖尿病小鼠血脂的影响
将上述实验动物处死,眼球取血,4 000r /min 离心,分离血清,采
用氧化酶法测定血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白和低密
度脂蛋白的变化。
2. 6 血清超氧化物歧化酶(SOD )及丙二醛(MDA )测定 建立
高脂动物模型同前,给药 15 d后,小鼠眼球取血,分离血清后,严
格按照试剂盒说明书进行操作,测定吸光度(OD 值),参考同样
的标准值及参照值进行换算后,按活性单位进行统计结果。
2. 7 金荞麦茶对四氧嘧啶诱导诱导 2 型糖尿病小鼠胰腺、肝脏
病变的影响 上述小鼠手术前行乙醚吸入浅麻醉,固定后立即剪
开腹腔取出胰腺、肝脏后用 10 % 中性福 尔马林 固定,常规脱水
石蜡包埋,制作切片,切片厚 5μm,HE 染色 ,光镜下观察 2 型糖
尿病小鼠肝细胞及胰腺外分泌部腺泡细胞变性及坏死,炎症细胞
浸润,间质水肿,血管反应,纤维增生等。上述病变占组织块的
30 ﹪以下 1 分,占 30% ~50 ﹪ 2 分,占 50 ﹪以上 3 分,将所有评
分累加即损伤的评分。
3 结果
3. 1 金荞麦叶茶提取物对四氧嘧啶诱导的 2 型糖尿病小鼠血糖
水平的影响 结果见表 1。模型组与正常对照组比较,空腹血糖
值显著升高(P﹤ 0. 05),金荞麦叶茶低剂量组与模型对照组大
鼠空腹血糖比较有显著性降低(P ﹤ 0. 01),说明低剂量组可以
降低高糖高脂四氧嘧啶诱导的糖尿病大鼠空腹血糖,但高剂量组
与模型组比较无显著作用(P﹥ 0. 05)。
表 1 金荞麦叶茶提取物对四氧嘧啶
诱导的 2 型糖尿病小鼠血糖水平的影响 (珋x ± s)
组别
剂量
/ g·kg -1
给药前血糖值
/mmol·L﹣1
给药后血糖值
/mmol·L﹣1
正常对照组 - 5. 05 ± 0. 66 5. 12 ± 1. 50
模型对照组 - 21. 36 ± 5. 80▲ 25. 00 ± 6. 06▲
阳性对照组 0. 004 22. 77 ± 3. 13 13. 89 ± 1. 51﹡﹡☆
金荞麦茶高剂量组 8 22. 46 ± 6. 80 26. 53 ± 7. 72
金荞麦茶低剂量组 5. 3 20. 35 ± 6. 08 15. 93 ± 8. 95**
与给药前比较,﹡ P﹤ 0. 05,﹡﹡P﹤ 0. 01;模型组与正常组比较,▲P﹤
0. 05;给药后动物与同时期模型组比较,☆P﹤ 0. 05;n = 10
3. 2 金荞麦叶茶提取物对四氧嘧啶诱导的 2 型糖尿病小鼠血脂
的影响 结果见表 2。模型组与正常对照组相比,模型组小鼠血
清 TC、TG、均显著升高(P ﹤ 0. 01);与模型组相比,金荞麦茶低
剂量组与阳性对照组均能显著降低 TC、TG(P ﹤ 0. 01)。因此,
金荞麦茶取物对高糖高脂喂养加四氧嘧啶诱导的糖尿病大鼠
TC、TG升高具有明显调节作用。对于模型动物的 LDL、HDL 紊
乱,金荞茶也有一定的调节作用,但与模型组比较没有统计学意
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2014 VOL. 25 NO. 6 时珍国医国药 2014 年第 25 卷第 6 期
义。
表 2 金荞麦叶茶对四氧嘧啶
诱导的 2 型糖尿病小鼠血脂的影响 (珋x ± s) mmol·L -1
组别 TC TG HDL LDL
正常对照组 1. 31 ± 0. 30 2. 29 ± 0. 52 2. 32 ± 0. 38 0. 3 ± 0. 35
模型对照组 1. 96 ± 0. 28▲▲ 4. 35 ± 0. 65▲▲ 2. 01 ± 0. 74 2. 1 ± 0. 79▲▲
阳性对照组 0. 92 ± 0. 15﹡﹡ 1. 17 ± 0. 22﹡﹡ 1. 23 ± 0. 01 1. 93 ± 0. 36
金荞茶高剂量 1. 13 ± 0. 21* 3. 80 ± 1. 16 2. 24 ± 0. 79 1. 2 ± 0. 37
金荞茶低剂量 1. 11 ± 0. 54** 3. 07 ± 0. 50** 1. 94 ± 0. 92 1. 2 ± 0. 70
与空白组比较:* P ﹤ 0. 05,**P ﹤ 0. 01 与模型组比较:▲P ﹤ 0. 05 ,▲▲P ﹤
0. 01;n =10
金荞麦茶具有一定的降低 2 型糖尿病实验动物血糖的作用,
可能对于临床常见的以肥胖为特征的胰岛素抵抗的 2 型糖尿病
病人具有一定治疗作用,且相对安全。金荞麦茶还具有一定改善
高脂实验动物模型脂代谢的作用,其中以水煮茶的低剂量型作用
显著,但对于脂代谢的影响中,以改善高脂实验动物的甘油三酯
代谢为主,但对于总胆固醇的代谢影响不明显。因此荞麦可能对
于临床高脂血症病人,特别是以甘油三酯升高为主的病人具有一
定的改善代谢的作用,而对于以胆固醇升高为主的高脂血症患
者,其作用比较局限。
3. 3 血清超氧化物歧化酶(SOD )及丙二醛(MDA )测定结果
建立高脂动物模型同前,给药 15 天后,小鼠眼球取血,分离血清
后,严格按照试剂盒说明书进行操作,测定吸光度(OD值),参考
同样的标准值及参照值进行换算后,按活性单位进行统计。结果
见表 3。
表 3 金荞麦叶茶对四氧嘧啶诱导的 2 型糖尿病
小鼠 SOD及 MDA的影响 (珋x ± s)
组别
剂量
/g·kg - 1
MDA含量
/nmol·ml﹣1
SOD活力
/U·ml﹣1
正常组 - 6. 71 ± 1. 77** 133. 07 ± 15. 83**
模型组 - 14. 31 ± 4. 88 84. 73 ± 12. 62
阳性组 0. 004 9. 89 ± 2. 76 118. 16 ± 20. 25*
金荞麦茶(高) 8 9. 25 ± 1. 67* 105. 25 ± 21. 80
金荞麦茶(低) 5. 3 12. 73 ± 4. 07 112. 31 ± 22. 11*
与模型组比较,* P <0. 05,与模型组比较,**P <0. 01
由以上结果可以看出,高脂饲料喂养后,动物血清中 MDA 和
SOD的含量上升,而在给以药物干预后,水煮茶的低剂量具有降
低血清中 MDA含量,升高模型动物血清 SOD 含量的作用,提示
具有一定的抗氧化作用。
3. 4 金荞麦叶茶对 2 型糖尿病小鼠胰腺、肝脏病变的影响
3. 4. 1 金荞麦叶茶对 2 型糖尿病小鼠胰腺病变的影响 空白组
大鼠胰腺组织中见个别腺泡细胞变性,其余腺泡细胞无变性坏
死,偶见间质血管充血及炎症细胞浸润,未见间质水肿。
模型组大鼠胰腺组织中见明显腺泡细胞变性,伴部分腺泡细
胞萎缩及腺泡细胞坏死,间质血管充血明显,并伴有间质水肿及
少量炎症细胞浸润。
金荞麦叶茶低剂量组大鼠胰腺组织中见较多腺泡细胞变性
及坏死,胰腺组织中见间质血管充血,并伴有间质水肿及少量炎
症细胞浸润。
金荞麦叶茶高剂量组大鼠胰腺组织中见少部分外分泌部腺
泡细胞变性及坏死,少量胰腺组织中见间质血管充血,伴有间质
水肿及少量炎症细胞浸润。
阳性组大鼠胰腺组织中见少部分腺泡细胞变性及坏死,少量
胰腺组织中见间质血管充血,并伴有间质水肿及少量炎症细胞浸
润。
各组病理损伤有显著性差异(P < 0. 05),其中模型组损伤明
显高于其余各组。各组间病理损伤差异见图 1。
a -空白组;b -模型组;c -金荞麦茶叶
低剂量组;d -金荞麦叶茶高剂量组;e -阳性组
图 1 胰腺组织病理切片(400 ×)
3. 4. 2 金荞麦叶茶对 2 型糖尿病小鼠肝脏病变的影响 空白组
大鼠肝脏组织中见个别肝细胞变性,其余肝细胞无变性坏死,偶
见间质血管充血及炎症细胞浸润,未见间质水肿。
模型组大鼠肝脏组织中见明显肝细胞变性,坏死,间质血管
充血明显,并伴有间质水肿及少量炎症细胞浸润。
金荞麦叶茶低剂量组大鼠肝脏组织中见较多肝细胞变性及
坏死,间质血管充血,并伴有间质水肿及少量炎症细胞浸润。
金荞麦叶茶高剂量组大鼠肝脏组织中见部分肝细胞变性及
坏死,少量间质血管充血,伴有间质水肿及少量炎症细胞浸润。
肝阳性组大鼠肝脏组织中见部分腺泡细胞变性及坏死,少量
组织中见间质血管充血,并伴有间质水肿及少量炎症细胞浸润。
各组病理损伤有显著性差异(P < 0. 05),其中模型组损伤明
显高于其余各组。各组间病理损伤差异见图 2。
金荞麦叶茶对四氧嘧啶诱导的高血脂症糖尿病小鼠病理切片
表明金荞麦茶还具有保护动物胰腺、肝组织的功能,提示金荞麦叶
茶可能对糖尿病大鼠 B细胞有一定的修复作用,使胰岛素分泌增
多从而改善糖代谢 ,提高机体对胰岛素的敏感性和周围组织对葡
萄糖的利用,从而改善机体的胰岛素抵抗 ,进而稳定血糖。
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a -空白组;b -模型组;
c -金荞麦叶茶低剂量组;d -金荞麦叶茶高剂量组;e -阳性组
图 2 肝脏组织病理切片(400 ×)
4 讨论
本研究结果发现,金荞麦叶低剂量组在调节四氧嘧啶诱导的
高血脂症糖尿病小鼠血糖、血脂水平以及体内抗氧化降低血清中
MDA含量,升高模型动物血清 SOD 活力的作用效果优于高剂量
组,可能的原因是样品金荞麦茶水提物是初提物,其中可能含有
与生物黄酮类化合物功能有拮抗作用的物质存在,剂量越高,这
种物质的浓度越高,拮抗作用也就越强,从而导致降糖、降血脂作
用及体内抗氧化作用不如低剂量组。也就提示下一步的研究工
作重点将确定金荞麦叶茶有效成分,并将其分离提纯。
金荞麦叶茶作为药食同源的保健食品,也蕴含着许多新的待
开发的用途,具有广泛的药理作用,目前大多数的文献报道是关于
金荞麦种子、根茎的药理活性研究,贵州师范大学荞麦产业技术研
究中心以高黄酮含量品种金荞麦 1 号的叶为原料研制的茶叶,为
金荞麦的产业开发拓宽路径,本研究的结果证实了产品对实验性
2型糖尿病小鼠血脂、血糖的影响、体内抗氧化活性以及肝脏、胰
腺损伤的保护作用,为该产品的进一步利用及综合开发奠定基础。
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