全 文 ：天竺桂多酚提取物降血糖活性研究
陈 亮1， 孙 鹏1，2， 王 婷2， 徐 娜3， 贾 琦1* ， 李医明1， 陈凯先1，4
(1. 上海中医药大学 中药学院，上海 201203;2. 中科院上海药物研究所 第三药理研究室，上海 201203;
3. 河南省南阳市中心医院 内分泌科，河南 南阳 473009;4. 中国科学院上海药物研究所 新药研究国家重
点实验室，上海 201203)
收稿日期:2013-03-07
基金项目:国家自然科学基金面上项目 (81172951) ;上海市中药现代化课题 (08DZ1972102) ;上海市药剂学重点学科建设项目
(J50302) ;新药研究国家重点实验室开放课题 (SIMM1106KF-14)
作者简介:陈 亮 (1986—) ，男，博士生，从事中药化学成分构效关系及新药开发研究。Tel: (021)51322451，E-mail:clcivilian@
hotmail. com
摘要:目的 研究天竺桂提取物中多酚的结构类型及降糖活性。方法 运用 HPLC 及 ESI-MS 方法确定多酚的结构，
利用噻唑蓝法测定细胞活力评价天竺桂提取物对棕榈酸或过氧化氢损伤的 INS-1 细胞的保护作用，利用 db /db 自发 2
型糖尿病小鼠观察天竺桂提取物对糖尿病小鼠糖代谢的影响。结果 天竺桂提取物中多酚主要为 B-型多酚;提取物
能剂量依赖地保护棕榈酸或过氧化氢诱导损伤的 INS-1 细胞，并且显著抑制过氧化氢引起的 INS-1 细胞内活性氧增加;
200 mg /kg剂量给药 4 周后降低了 db /db小鼠空腹血糖，改善了口服糖耐量，显著增加了胰岛素耐量。结论 天竺桂
多酚为 B-型多酚，具有一定的降糖活性，其机制可能为减少胰岛 β细胞活性氧水平，抵抗氧化应激对 β细胞的损伤，
从而保护胰岛 β细胞。
关键词:天竺桂;多酚;INS-1 胰岛 β细胞;db /db 2 型糖尿病小鼠;抗糖尿病
中图分类号:Ｒ285. 5 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2014)02-0229-07
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2014. 02. 003
Hypoglycemic activity of polyphenol-rich extract from Cinnamomun
japonicum Sieb
CHEN Liang1， SUN Peng1，2， WANG Ting2， XU Na3， JIA Qi 1* ， LI Yi-ming1，
CHEN Kai-xian1，4
(1． School of Pharmacy，Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai 201203，China;2． The Third Department of Pharmacology，
Shanghai Institute of Materia Medica，Shanghai 201203，China;3． Department of Endocrinology，Central Hospital of Nanyang，Henan 473009，China;
4． State Key Laboratory of Drug Ｒesearch，Shanghai Institute of Materia Medica，Shanghai 201203，China)
ABSTＲACT:AIM To explore the structure and hypoglycemic activity of the polyphenols-rich extract isolated
from Cinnamomun japonicum Sieb． METHODS HPLC and ESI-MS methods were employed to characterize their
structures． The biological activity of the extract was determined on pancreatic INS-1 β cells and db /db type 2 dia-
betic mice model． The effects of the extract on the vitality of INS-1 cell under palmitate or H2O2 stimulation were
examined． ＲESULTS The main polyphenols found in C． japonicum extracts were identified as B-type polyphe-
nols，and that the extract could protect INS-1 cells from palmitate or H2O2 damage． The reaction oxygen level was
also significantly reduced in the extract-treated INS-1 cells under H2O2 induction in a dose dependent manner． Af-
ter the administration of the extract once daily for 4 weeks at the dosage of 200 mg /kg，the fasting blood glucose of
db /db mice was reduced，and the oral glucose and insulin tolerances were also improved． CONCLUSION B-
type polyphenols from C． japonicum have anti-diabetic activity． It could protect pancreatic beta cells from palmitate
or H2O2 induced damage via reducing the intracellular reaction oxygen level，which could be one possible reason for
922
2014 年 2 月
第 36 卷 第 2 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
February 2014
Vol． 36 No． 2
the improvement in the symptoms of diabetes in db /db mice．
KEY WOＲDS:Cinnamomun japonicum Sieb．;polyphenol;pancreatic INS-1 beta cells;type 2 diabetic db /db
mice;anti-diabetic activity
桂皮 Cinnamon 为樟科 Lauraceae 植物天竺桂
Cinnamomun japonicum Sieb．、阴香 C． burmannii
(Nees)Blume、细叶香桂 C． chingii M． et Calf 以
及肉桂 C． cassia Presl 等树皮的通称［1］，为药食两
用植物。近年来国内外研究表明，桂皮具有明显的
降血糖作用［2-6］，其多酚类成分被认为是其降血糖
作用的主要物质基础［5］。天竺桂分布于我国广东、
广西、江西等省，具有暖脾胃，散风寒，通血脉作
用。作为桂皮的一种资源，其中的多酚成分和降血
糖作用还未见深入研究。
本研究的目的是确定天竺桂提取物中含有的主
要多酚类成分的类型，并利用大鼠胰岛瘤细胞
INS-1 及自发 2 型糖尿病 db /db 小鼠模型，研究富
含天竺桂多酚的提取物对胰岛 β 细胞的保护作用
及在体降糖效果，评价该类提取物的降糖活性并初
步探讨其抗糖尿病机制。
1 材料与仪器
1. 1 实验材料 天竺桂 Cinnamomun japonicum
Sieb． 2011 年购买于江西，由复旦大学顾关云教授
鉴定，样品保存在上海中医药大学中药学院中药化
学教研室。
1. 2 实验主要试剂 ＲPMI1640细胞培养基、胎牛血
清和胰蛋白酶购自 Hyclone;活性氧检测试剂盒购自
碧云天生物有限公司;Beta 巯基乙醇、噻唑蓝购自
sigma;二甲亚砜购自国药集团化学试剂有限公司。
1. 3 对照品 compound 1 ～ 3 为作者实验室自己分
离和鉴定的多酚，经 HPLC 检测它们的纯度均在
95%以上。结构分别是 compound 1 为 procyanidin
B2;compound 2 为 (-)-epicatechin;compound 3
为 procyanidin C1 (图 1)。
图 1 对照品 compounds 1 ～ 3 结构
Fig. 1 Structure of reference compounds 1 ～ 3
1. 4 主要仪器和设备 Agilent 1200 高效液相色谱
仪 (DAD 为检测器) ;赛默飞世尔科技 Thermo-
LCQ FleeT ESI-MS分析仪;罗氏 ACCU-CHEK血糖
仪及血糖试纸;Thermo Fisher 恒温细胞培养箱;
MD公司 (MolecularDevice)Flexstation 3 酶标仪。
2 实验方法
2. 1 药学部分
2. 1. 1 样品制备 天竺桂药材粗粉 1. 12 kg，用
10 倍量的 50%丙酮-水溶液 40 ℃搅拌提取 2 次，
每次 2 h。滤液合并浓缩至无丙酮味后，浓缩液依
次用乙醚和乙酸乙酯萃取 3 次，回收乙酸乙酯层得
到富含天竺桂多酚样品 (TZG)27. 1 g。
2. 1. 2 HPLC 测定条件 Agilent Extend-C18色谱柱
(250 mm × 4. 6 mm，5 μm) ;流动相乙腈 (A)-
0. 02%三氟乙酸 (体积分数，B) ，梯度洗脱:0 ～
20 min，10% ～35% A (体积分数) ;20 ～ 35 min，
35% ～50% A (体积分数)。体积流量 1 mL /min;
柱温 30 ℃;检测波长 280 nm。
2. 1. 3 多酚的含量测定方法 参照 2010 年版《中
国药典》鞣质含量测定法对样品中多酚含量进行
测试［7］。
2. 2 药理学部分
2. 2. 1 细胞培养 大鼠胰岛瘤细胞株 INS-1 细胞
来自 ATCC，培养基使用 ＲPMI1640 及 10%胎牛血
032
2014 年 2 月
第 36 卷 第 2 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
February 2014
Vol． 36 No． 2
清培养，培养基中添加 50 μmol /L beta 巯基乙醇，
于 37 ℃ 5% CO2 恒温细胞培养箱常规培养。实验
前细胞使用胰蛋白酶消化，均匀铺板于 96 孔细胞
培养板 (NUNC)中，每孔细胞数为 2. 5 万，24 h
后开始实验。
2. 2. 2 细胞活力实验 接种于 96 孔板的 INS-1 细
胞分为空白对照组、棕榈酸刺激组和棕榈酸刺激加
药组 (浓度梯度:100、50、25、12. 5 μg /mL)。
每孔细胞加入 0. 4 mmol /L 棕榈酸于 37 ℃ 5% CO2
恒温细胞培养箱孵育 48 h，空白对照组以等体积溶
剂代替。加药组加入上述浓度梯度天竺桂多酚，与
棕榈酸同时孵育 48 h。孵育结束后，每孔细胞加入
0. 5 mg /mL的噻唑蓝试剂，于 37 ℃ 5% CO2 恒温
细胞培养箱孵育 4 h后，吸去培养基，每孔细胞加
入 100 μL 二甲亚砜溶解，于 492 nm 下读取吸收
值，评价天竺桂多酚对棕榈酸损伤的 INS-1 细胞活
力影响。
在过氧化氢刺激的 INS-1 细胞模型中，以 50
μmol /L过氧化氢代替棕榈酸，孵育时间为 20 min，
加药组 浓 度 梯 度 为 400、200、100、50、25、
12. 5、6. 25、3. 125 μg /mL，其余步骤与棕榈酸刺
激模型相同，评价天竺桂多酚对过氧化氢损伤的
INS-1 细胞活力影响。
2. 2. 3 胞内活性氧检测 接种于 96 孔板的 INS-1
细胞预先用不同浓度 (400、200、100、50、25、
12. 5、6. 25、3. 125 μg /mL)天竺桂多酚孵育 2 h，
用无血清培养基洗 1 遍后，加入活性氧检测试剂孵
育 1 h，吸去培养上清，加入 50 μmol /L 过氧化氢
损伤 20 min，使用 488 nm激发波长，在 525 nm下
读取荧光吸收值，评价天竺桂多酚对过氧化氢刺激
下 INS-1 细胞胞内活性氧水平的抑制情况。
2. 2. 4 自发 2 型糖尿病 db /db 小鼠体内降糖活性
评价 C57BL /KsJ db /db 小鼠 (美国 Jackson 实验
室) ，雄性，8 周龄，体质量 (35 ± 2) g，用于本
次实验。小鼠按照 SPF 级动物饲养标准操作规程
饲养。所有动物实验经中国科学院上海药物研究所
实验动物管理与使用委员会批准 (许可证号:
SIMM-2011-01-WHY-04)。
db /db小鼠随机分为 4 组:对照组 (Control，
灌胃给予 0. 5%质量分数的羧甲基纤维素钠) ，天
竺桂提取物 100 mg /kg 给药组 (TZG-100) ，天竺
桂提取物 200 mg /kg 给药组 (TZG-200) ，每组 6
只，阳性对照组 (罗格列酮 15 mg /kg剂量组，Ｒo-
si-15)。每天 14 ∶ 00 ～ 16 ∶ 00 pm. 之间灌胃给药 1
次，持续 4 周。
2. 2. 5 体质量、血糖变化及口服葡萄糖耐量及胰
岛素耐量检测 小鼠定期记录体质量、饮食量和饮
水量。每周各组小鼠禁食 6 h 后，尾静脉采血，利
用罗氏 ACCU-CHEK血糖仪及血糖试纸测量空腹血
糖水平。给药 4 周后，各组小鼠禁食 12 h 检测血
糖后，行口服葡萄糖耐量实验 (Oral Glucose Toler-
ance Test，OGTT)。小鼠灌胃给予 1 g /kg 葡萄糖溶
液，在给葡萄糖后 0、15、30、60、120 min 尾静
脉采血测血糖浓度。以时间-血糖浓度绘制 OGTT
曲线，并计算曲线下面积。间隔 1 d 后，各组小鼠
禁食 6 h，行胰岛素耐量实验 (Isulin Tolerance
Test，ITT)。小鼠腹腔注射 1 U /kg胰岛素，给胰岛
素后 0、30、60、90、120 min 测血糖。以时间-血
糖浓度绘制 ITT曲线，并计算曲线下面积。
2. 2. 6 统计分析处理 所有统计均利用 PASW
Statistics 18 (SPSS 18. 0)进行。统计数据使用平
均数 ±标准差表示，采用单因素方差分析 (One
Way ANOVA) ，P ＜ 0. 05 时认为有显著性差异。
3 结果
3. 1 药学部分
3. 1. 1 多酚定量测定 根据 2010 年版 《中国药
典》的方法测定天竺桂提取物中多酚的含有量。
标准曲线为 Y = 10. 564 X － 0. 646 5，Ｒ2 = 0. 999 2，
测得总多酚为 39. 37%。
3. 1. 2 天竺桂多酚的结构判断 用自制的 com-
pound 1 － 3 作为对照品，在同样测试条件下对天竺
桂样品进行了 HPLC比对，推测了 T1、T2 和 T3 峰
结构，比对显示 T1 峰为 procyanidin B2;T2 峰为
(-)-epicatechin;T3 峰为 procyanidin C1 (图 2)。
对 T4 峰进行了 ESI-MS 正负离子扫描 (图 3) ，发
现它是分子质量为 866 和 1154 的二个多酚混合物。
图 2 提取物与对照品的比对 (HPLC图谱)
Fig. 2 Compare extract with reference sub-
stances by HPLC
132
2014 年 2 月
第 36 卷 第 2 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
February 2014
Vol． 36 No． 2
图 3 T4 峰的 ESI-MS图 (A. 负离子图 B. 正离子图)
Fig. 3 ESI-MS spectra of T4 peak． A. nagetive ion ESI-MS
spectra;B. positive ion ESI-MS spectra
3. 2 药理学部分
3. 2. 1 天竺桂提取物对棕榈酸或过氧化氢损伤的
INS-1 细胞活力的影响 0. 4 mmol /L 棕榈酸刺激
48 h后，INS-1 细胞活力较空白组显著下降，而天
竺桂提取物剂量依赖地拮抗了棕榈酸引起的 INS-1
细胞活力下降 (与棕榈酸单独刺激组比较，＊＊P ＜
0. 01，＊＊＊P ＜ 0. 001，图 4)。提示天竺桂多酚能够保
护棕榈酸引起的 INS-1 细胞损伤。
50 μmol /L过氧化氢刺激 20 min 后，INS-1 细
胞活力较空白组显著下降，而天竺桂提取物剂量依
赖地拮抗了过氧化氢引起的 INS-1 细胞活力下降
(与过氧化氢单独刺激组比较，＊＊P ＜ 0. 01，＊＊＊P ＜
0. 001，图 4)。提示天竺桂多酚能够保护过氧化氢
引起的 INS-1 细胞损伤。
图 4 提取物对损伤的 INS-1 细胞活力的影响
Fig. 4 Effects of TZG on cell viability of INS-1
3. 2. 2 天竺桂提取物对过氧化氢刺激的 INS-1 细
胞胞内活性氧的影响 50 μmol /L 过氧化氢刺激
20 min后，INS-1 细胞胞内活性氧水平显著升高，
而天竺桂提取物剂量依赖地拮抗了过氧化氢引起的
INS-1 细胞胞内活性氧水平 (图 5)。提示天竺桂多
酚能够抑制过氧化氢引起的 INS-1 细胞胞内活性氧
升高。
3. 2. 3 天竺桂提取物对 db /db 小鼠体质量及血糖
的影响 给药 4 周时，天竺桂提取物对 db /db 小鼠
摄食、摄水 (数据未显示)及体质量与对照组相
比均无明显影响 (图 6)。同时，天竺桂提取物在
db /db小鼠上 100 mg /kg剂量组 (TZG-100)与 200
mg /kg剂量组 (TZG-200)给药 2 周时，空腹 6 h
血糖无明显变化，此时罗格列酮 15 mg /kg 剂量组
已有显著下降。给药 4 周后，虽然 100 mg /kg 剂量
组 db /db小鼠空腹 6 h血糖有下降趋势但无统计学
差异，200 mg /kg 剂量组空腹 6 h 血糖较对照组显
著下降，降糖效果接近罗格列酮 15 mg /kg 剂量组
图 5 提取物对 INS-1 细胞胞内活性氧的影响
Fig. 5 Effect of TZG on reactive oxygen level in
INS-1 cells
(* P ＜ 0. 05，图 6)。
3. 2. 4 天竺桂提取物对 db /db 小鼠口服糖耐量及
胰岛素耐量的影响 结果显示，天竺桂提取物在
200 mg /kg剂量给药 4 周后，db /db 小鼠口服糖耐
量得到有效改善，曲线下面积 (AUC)统计结果
232
2014 年 2 月
第 36 卷 第 2 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
February 2014
Vol． 36 No． 2
图 6 提取物对小鼠体质量及血糖的影响
Fig. 6 Effect of TZG on blood glucose and body weight change in mice
显示 200 mg /kg剂量给药组与对照组具有显著性差
异 (* P ＜ 0. 05，图 7)。同时，ITT 结果显示，给
药 4 周后，天竺桂提取物剂量依赖地改善了 db /db
小鼠胰岛素耐量，在 200 mg /kg 剂量时 ITT曲线下
面积与对照组相比，显著降低 (＊＊P ＜ 0. 01，图
7)。天竺桂提取物在 200 mg /kg的改善糖耐量及胰
岛素耐量效果均接近于 15 mg /kg 剂量组的阳性对
照罗格列酮。
图 7 提取物对小鼠 OGTT 和 ITT的影响
Fig. 7 Effect of TZG on OGTT and ITT in mice
4 讨论
文献记载，桂皮中的原花青素类多酚成分主要
有两种结构类型，一种是原花青素各单元间通过
C4 ～ C8 或 C4 ～ C6 方式由一根键连接而成的 B-型
多酚，其三聚体和四聚体的分子量分别是 866 Da
和 1154 Da;另一种是原花青素间通过 C2-O-C7 和
C4-C8 两个键同时相连而成的 A-型多酚，其三聚
体和四聚体的分子量分别是 864 Da 和 1152 Da［8］。
天竺桂中含有的多酚经 HPLC 比对分析和 ESI-MS
扫描，可知主要属于 B-型多酚。参照 《中国药典》
鞣质含量测定法测得样品中多酚含量为 39. 37%。
样品中的其它成分根据多酚样品的提取方法推断，
应该是一些极性比较大的成分，该类成分与 α-萘
酚-浓 H2SO4 没有显色反应，说明样品中不含糖类。
HPLC在相同条件下比对也不含有桂皮醛，苯甲
酸。因样品呈浅褐色，我们推测 39. 37%以外的部
分应该是一些水溶性的色素和大分子量的鞣质等。
原青花素类多酚低聚物的抗氧化作用多有报
道［9］，该类化合物能够有效减少应激条件下的细
胞活性氧水平增加［10］。INS-1 细胞是来自于大鼠胰
岛瘤的细胞，具有胰岛素分泌功能，在体外与胰岛
β细胞功能类似［11］。在 2 型糖尿病的发病过程中，
332
2014 年 2 月
第 36 卷 第 2 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
February 2014
Vol． 36 No． 2
胰岛 β 细胞在长期高糖高脂环境下逐渐受到损伤，
发生凋亡［12］。该过程中，氧化应激具有非常重要
的作用［13］。本实验中所使用的 0. 4 mmol /L质量浓
度的棕榈酸为一类不饱和脂肪酸，能够有效模拟体
内高脂对胰岛 β 细胞的损伤［12］。结果显示，天竺
桂提取物能够剂量依赖的保护 48 h 的棕榈酸长期
作用引起的 INS-1 细胞损伤，提示化合物对胰岛 β
细胞具有保护作用。为研究其保护机制，我们使用
过氧化氢增加细胞活性氧水平损伤 INS-1 细胞，结
果发现，天竺桂提取物能够剂量依赖地抑制过氧化
氢对 INS-1 细胞的损伤，提示在 INS-1 细胞中，天
竺桂提取物能够有效对抗过氧化氢引起的细胞活性
氧升高，该机制可能是天竺桂多酚保护棕榈酸引起
的细胞活力下降的主要原因之一。为确证天竺桂提
取物的抗氧化作用，我们检测了细胞内活性氧水
平，结果证实了这一推测，天竺桂提取物剂量依赖
的减少了过氧化氢引起的 INS-1 细胞胞内活性氧水
平升高，证实该提取物可以有效对抗胰岛 β 细胞
活性氧水平升高引起的细胞损伤，从而保护长期高
脂高糖作用下胰岛 β 细胞。这可能是多酚类化合
物对抗糖尿病的主要作用机制之一。
为了验证天竺桂提取物在体降糖效果，我们利
用 db /db自发 2 型糖尿病小鼠进行在体降糖药效评
价。临床上应用桂皮开展降糖治疗时，1 到 10 g每
天每人剂量均能够有效改善糖尿病患者空腹血
糖［3］。因此，根据临床剂量换算，本实验中选择
100 及 200 mg /kg 剂量在 db /db 小鼠模型上评价其
体内降糖活性。实验结果表明，天竺桂提取物连续
给药 4 周后，对小鼠体质量无显著影响，提示提取
物无明显毒性。同时 200 mg /kg 剂量给药组 db /db
小鼠空腹血糖与对照组相比显著降低;口服糖耐量
实验表明天竺桂提取物能够有效改善 db /db 小鼠糖
耐量;给药 4 周后胰岛素耐量实验表明，天竺桂提
取物在 200 mg /kg剂量能够显著改善 db /db 小鼠胰
岛素耐量。罗格列酮为一类过氧化物酶体增殖物激
活受体 γ (PPAＲγ)激动剂，能够有效增加胰岛素
敏感性，降低血糖［14］。利用罗格列酮在 15 mg /kg
剂量做阳性对照，发现天竺桂提取物在 200 mg /kg
剂量对改善空腹血糖、口服糖耐量及胰岛素耐量与
罗格列酮接近，均能够显著改善 db /db 小鼠糖尿病
症状。以上结果表明，天竺桂提取物长期给药能够
有效降低 db /db小鼠血糖，改善小鼠糖耐量，提高
小鼠胰岛素耐受，有效改善了 db /db 自发 2 型糖尿
病小鼠的糖尿病症状。
综上所述，天竺桂多酚提取物具有一定的降糖
活性，其主要机制可能是通过减少胰岛 β 细胞在
高脂高糖环境下的氧化应激，保护 β细胞，维持 β
细胞的胰岛素分泌功能，增加外周组织对胰岛素的
敏感性，从而改善了 db /db小鼠糖尿病症状。提取
物中聚合多酚成分主要为原花青素单位间通过单键
相连的 B-型多酚，该类型多酚可能在该过程中发
挥重要作用。
参考文献:
［1］ 李家实． 中药鉴定学［M］． 上海:上海科技出版社，
1996:301．
［2］ Verspohl E J ，Bauer K，Neddermann E． Antidiabetic effect of
Cinnamomum cassia and Cinnamomum zeylanicum in vivo and
in vitro［J］． Phytother Ｒes，2005，19(3) :203-206．
［3］ Khan A，Safdar M，Mohammad M A，et al． Cinnamon im-
proves glucose and lipids of people with Type 2 diabetes［J］．
Diabetes Care，2003，26(12) :3215-3218．
［4］ Akilen Ｒ，Tsiami A，Devendra D，et al． Glycated haemoglobin
and blood pressure-lowering effect of cinnamon in multi-ethnic
Type 2 diabetic patients in the UK:a randomized，placebo-
controlled，double-blind clinical trial［J］． Diabet Med，2010，
27(10) :1159-1167．
［5］ Anderson Ｒ A，Broadhurst C L，Polansky M M，et al． Isolation
and characterization of polyphenol type-A oligomers from Cinna-
mon with insulin-like biological activity［J］． J Agric Food
Chem，2004，52(1) :65-70．
［6］ Jia Q，Lu X，Wu X，et al． Hypoglycemic activity of a polyphe-
nolic oligomer-rich extract of Cinnamomum parthenoxylon bark
in normal and streptozotocin-induced diabetic rats［J］． Phyto-
medicine，2009，16(8) :744-750．
［7］ 国家药典委员会． 中华人民共和国药典:2010 年版一部
［S］． 北京:中国医药科技出版社，2010:附录 62．
［8］ Porter L J，Harbone J B． Flavans and proanthocyanidins［M］．
New York :Chapman and Hall Ltd，1988:21-63．
［9］ Thomas O I，Abiodun O O，Abiola O S，et al． Doubly linked，
A-type proanthocyanidin trimer and other constituents of Ixora
coccinea leaves and their antioxidant and antibacterial properties
［J］． Phytochemistry，2010，71(17 /18) :2092-2098．
［10］ Jose J L，Isaac J，Gines M S，et al． Cinnamtannin B-1 as an
antioxidant and platelet aggregation inhibitor［J］． Life Sci，
2008，82(19 /20) :977-982．
［11］ Asfari M，Janjic D，Meda P，et al． Establishment of 2-mercap-
toethanol-dependent differentiated insulin- secreting cell lines
［J］． Endocrinology，1992，130(1) :167-178．
［12］ Abaravicience S M，Lundquist I，Galvanovskis J，et al． Palmi-
tate-Induced β-Cell Dysfunction Is Associated with Excessive
NO Production and Is Ｒeversed by Thiazolidinedione-Mediated
Inhibition of GPＲ40 Transduction Mechanisms［J］． PLoS One，
2008，3(5) :2182．
432
2014 年 2 月
第 36 卷 第 2 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
February 2014
Vol． 36 No． 2
［13］ Kajimoto Y，Kaneto H． Ｒole of oxidative stress in pancreatic
beta-cell dysfunction［J］． Ann N Y Acad Sci，2004，1011:
168-176．
［14］ Fei Y，Ｒongya T，Weina C，et al． Utilization of fluorescence
tracer in hyperinsulinemic-euglycemic clamp test in mice［J］． J
Biochem Biophys Methods，2008，70(6):978-984．
薏苡仁脂肪酸类成分对人肝癌细胞株 SMMC-7721 细胞周期及细胞凋亡
的影响
包永睿1，2，3， 王 帅1，2，3， 孟宪生1，2，3* ， 巩晓杰1， 杨欣欣1，2，3
(1. 辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116600;2. 辽宁省组分中药工程技术研究中心，辽宁 大连
116600;3. 辽宁省现代中药研究工程实验室，辽宁 大连 116600)
收稿日期:2013-02-20
基金项目:国家“重大新药创制”科技重大专项 (2010ZX09401-304-105C)
作者简介:包永睿 (1978—)，男，硕士，主要从事中药质量分析及作用机制研究工作。Tel:(0411)87406496，E-mail:byr1026
@ 163. com
* 通信作者:孟宪生 (1964—)，男，教授，博士，主要从事从事中药组分配伍、代谢组学及药品质量分析工作。Tel:(0411)
87406496，Email:mxsvvv@ 126. com
摘要:目的 研究薏苡仁脂肪酸类成分对人肝癌细胞株 SMMC-7721 增值的影响及作用机制初探。方法 采用 MTT法
考察不同给药剂量，不同给药时间下薏苡仁脂肪酸类成分对 SMMC-7721 细胞的增值抑制作用及其与时间、剂量的关
系;碘化丙啶 PI单染色法检测薏苡仁脂肪酸作用后，SMMC-7721 细胞周期 DNA 水平变化;Annexin V-EGFP /PI 双染
法研究薏苡仁脂肪酸对 SMMC-7721 细胞凋亡率的影响。结果 不同质量浓度的薏苡仁脂肪酸作用 SMMC-7721 细胞
24、48、72 h后，均呈现出较好的细胞增殖抑制作用，且具有明显的时间-剂量-效应关系，差异有统计学意义 (P ＜
0. 05);不同质量浓度的薏苡仁脂肪酸处理 SMMC-7721 细胞 22 h 后可显著增加肝癌细胞凋亡率，(P ＜ 0. 001) ;作用
36 h后，可显著降低 G2 /M期细胞比例，(P ＜ 0. 001)。结论 薏苡仁脂肪酸对人肝癌 SMMC-7721 细胞具有明显的抑制
作用并可诱导其凋亡，其作用是通过抑制 G2 /M细胞周期实现的。
关键词:薏苡仁脂肪酸类;人肝癌 SMMC-7721 细胞株;细胞周期;细胞凋亡
中图分类号:Ｒ285. 5 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2014)02-0235-05
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2014. 02. 004
Effect of Semen coicis fatty acid on cell cycle and apoptosis induction of human
hepatoma cell line SMMC-7721
BAO Yong-rui1，2，3， WANG Shuai1，2，3， MENG Xian-sheng1，2，3* ， GONG Xiao-jie1， YANG Xin-xin1，2，3
(1. College of Pharmacy，Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian 116600，China;2. Liaoning Provincial Multi-component Chinese
Medicine Engineering Technology Ｒesearch Center，Dalian 116600，China;3. Liaoning Provincial Modern Traditional Chinese Medicine Ｒesearch and En-
gineering Laboratory，Dalian 116600，China)
ABSTＲACT:AIM To investigate the inhibitory effect of fatty acid from coicis semen on human hepatoma cell
line SMMC-7721． METHOD MTT method was used to evaluate the inhibitory rate and time-doses relationship of
fatty acid on SMMC-7721 with different doses and delivery times． Flow cytometry PI staining method was used to
measure the changes of DNA content and Annexin V-EGFP /PI double staining method was used for the apoptotic
rate in SMMC-7721． ＲESULTS Experiment data showed significant cell proliferous inhibition with obvious time-
dose-effect relationship with significant difference (P ＜ 0. 05)，after 24，48，72 h of incabation of SMMC-7721
with different concentrations of fatty acid from coicis semen． Incubation of SMMC-7721 with different concentrations
532
2014 年 2 月
第 36 卷 第 2 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
February 2014
Vol． 36 No． 2