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金荞麦叶发酵茶的抗炎作用研究



全 文 :〔World Science and Technology/Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica〕 981
世界科学技术—中医药现代化★中药研究
   收稿日期:2014-10-16
   修回日期:2014-12-15
*   贵州省科技厅国际合作项目(黔科合外 G字 [2013]7021):金荞麦叶发酵茶的工艺研究与功能评价,负责人:黄小燕;国家燕麦荞麦现代农业
产业技术体系荞麦育种岗位专项资金(CARS-08-A4):荞麦育种,负责人:陈庆富;国家自然科学基金委面上项目(31171609):荞麦属植物落
粒性相关基因研究,负责人:陈庆富;贵州省科技厅科学技术基金项目(黔科合 J字 [2012]2268):荞麦标准提取物的制备和抗氧化功能研究,
负责人:黄小燕;贵州省科技厅项目(黔科合人才团队 [2011]4007):荞麦产业技术科技创新团队,负责人:陈庆富。
** 通讯作者:陈庆富,博士,教授,主要研究方向:荞麦育种。
金荞麦叶发酵茶的抗炎作用研究*
黄小燕 1,黄 莎 1,陈庆富 2**
(1. 贵州师范大学生命科学学院 贵阳 550001;
2. 贵州师范大学生命科学学院植物遗传育种研究所 贵阳 550001)
摘 要 :目的:观察金荞麦叶发酵茶对小鼠急、慢性炎症反应的影响。方法:以二甲苯致耳廓肿模型、
角叉菜胶致足趾肿胀模型、醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高急性炎症模型、肉芽肿慢性炎症模型评价
金荞麦叶发酵茶的抗炎作用。结果:金荞麦叶发酵茶可使二甲苯致小鼠耳廓肿胀率明显下降,能显著降低
角叉菜胶致炎后大鼠足跖肿胀,对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高急性炎症有拮抗作用;对慢性炎症
肉芽肿的增生也有明显的抑制作用。结论:金荞麦叶发酵茶具有防治急、慢性炎症的功能。
关键词:金荞麦叶发酵茶 抗炎 耳肿胀 足肿胀 腹腔通透性 棉球肉芽肿
doi:10.11842/wst.2015.05.011  中图分类号:R285.5  文献标示码:A
金 荞 复 合 物(Fagopyrum Cymosum Complex)
属于蓼科(Polygonaceae)荞麦属(Fagopyrum Mill)
植物[1],是一种药食同源的天然产物。现代药理研究
发现,金荞麦具有抑制癌细胞、增强人体免疫力、降
血糖、降血脂等功能,在临床上可用于对癌症、糖尿
病、高脂血症及风湿病的辅助治疗,具有较高的药用
价值和应用前景[2-6],已被载入 2005 版中国药典[7]。
包鹏、程友斌等[8,9] 的研究证明,金荞麦的浸膏和提
取物均有明显的抗炎症作用。相关的化学成分研究
也表明,多酚类及黄酮类化合物是金荞麦中最重要
的活性成分[10]。贵州出产的金荞麦叶缩合原花色素
类含量高达 8.9%[11],其中叶的含量达 6.6%,金荞麦
叶的黄酮含量也很高,可达 5% 以上,是其它部位黄
酮含量的 2 倍以上[12,13]。如能合理利用,将会大大
提高金荞麦的利用价值。
金荞麦发酵茶是贵州师范大学荞麦产业技术
研究中心陈庆富教授从大量不同地点的金荞麦收
集系中筛选出了叶黄酮含量达 10%、γ- 氨基丁酸
(γ-Aminobutyric Acid,GABA)含 量 约 0.2% 的 植
株,经扩繁形成金荞麦 1 号新品种的叶为材料,采
用常规发酵茶工艺,开发出了金荞麦叶发酵茶新产
品。为探讨金荞麦叶发酵茶保健功能及潜在药用价
值,开展了金荞麦叶发酵茶抗炎活性的药理研究,
为金荞麦叶发酵茶的潜在保健功能及临床应用提
供更有价值的理论依据,也为进一步扩大金荞麦的
资源利用奠定基础。
1 实验材料和仪器
1.1 实验药材与试剂
本实验所采用的金荞麦是由贵州师范大学生命
科学学院植物遗传育种研究所荞麦产业技术研究
中心培育、栽培于贵阳市永乐乡贵州师范大学柏杨
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实验基地的金荞麦 1 号。选择晴天进行采摘,标准
为植株顶端 2-3 片嫩叶,不含叶柄。严格保持鲜叶
无异杂、无损伤、鲜叶的新鲜度,金荞麦发酵茶的最
佳生产工艺条件为:萎凋叶的含水率 70%、揉捻 90
min、发酵温度 30℃,发酵时间 29 h,金荞发酵茶条
索紧卷、色泽乌润、汤色橙黄鲜丽、滋味鲜爽,综合
品质好。
金荞麦叶发酵茶供试品:取金荞麦叶发酵茶 10 g,
水煎煮,每次 10 min,过滤,取滤液,共 3 次,合并 3
次滤液,于水浴锅浓缩,定容至 20 mL,得 0.5 g·mL-1
浓度药液备用。
阿司匹林(金陵药业股份有限公司金陵制药厂,
批号:20120301);伊文思蓝(上海化学试剂采购供
应站,批号:881012);角叉菜胶(sigms 公司,批号:
09JK1394)。
1.2 实验动物
清洁级昆明种小鼠,6-8 周龄,体质量 18-22 g ,
雄性,由贵阳医学院实验动物中心提供,动物合格
证号:SCXK(黔)2002-0001。
1.3 主要仪器
电子天平(上海上天公司,型号:FA2004); 旋
转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂,型号:RE-52A);
真空干燥箱(上海博迅实业有限公司,型号:DZF-
6050);721 型分光光度仪(海精密仪器仪表公司,型
号:721B)。
2 方法
2.1 对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响
取昆明种小鼠 50 只,随机分为 5 组,分别作为
空白对照(生理盐水)组,阿司匹林组,金荞麦茶高、
中、低剂量组,每组 10 只。灌胃给药,连续 5 天,给
药 体 积 0.1 mL/10 g,末 次 给 药 后 1 h,于 小 鼠 右 耳
双面均匀涂抹二甲苯 0.03 mL/ 只,左耳不涂作为对
照,20 min 后脱颈处死小鼠,用 8 mm 打孔器分别在
双耳相同位置打下耳片,于分析天平上称取耳片重
量,以重量差值为肿胀度,并计算肿胀抑制率[14]。肿
胀抑制率 =[(空白对照组耳片重差 - 给药组耳片
重差)/ 空白对照组耳片重差 ]×100%。
2.2 对角叉菜胶所致小鼠足肿胀的影响
取昆明种小鼠 50 只,分组同上。灌胃给药,连
续 5 天,给 药 体 积 0.1 mL/10 g,末 次 给 药 前,千 分
尺测量小鼠正常足掌厚度,末次给药后 20 min,分
别在小鼠右后肢足爪皮下注射 0.1% 角叉菜胶 0.05
mL/ 只致炎。随后第 1、2、4、6 h 各测量一次,记录
结果,计算肿胀度[15]。肿胀度 = 致炎后足掌厚度 -
致炎前足掌厚度。
2.3 对小鼠棉球肉芽肿的影响
取 昆 明 种 小 鼠 50 只,分 组 同“2.1”,用 戊 巴 比
妥钠麻醉(20 mg·kg-1),将 10 mg 棉球种植于小鼠
左右腋下皮下,自手术后第一天开始灌胃给药,给药
体积 0.1 mL/10 g,连续 7 天。末次给药后 24 h 处死
小鼠,取出棉球,置于 80℃烘箱 6 h 烘干,称重,计算
肉芽重量[15]。肉芽重量 = 肉芽肿干重 - 棉球重量。
2.4 对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响
取 昆 明 种 小 鼠 50 只,随 机 分 为 5 组,分 组 同
“2.1”,每组 10 只。灌胃给药,连续 5 天,给药体积
0.1 mL/10 g, 末次给药后 1 h,尾静脉注射 0.5% 伊
文思蓝 0.1 mL/ 只,同时腹腔注射 0.6% 冰醋酸 0.2
mL/ 只,20 min 后,脱 颈 处 死 小 鼠,剪 开 腹 腔,用 5
mL 蒸馏水冲洗腹腔数次,用吸管吸取冲洗液,2 000
r·min-1 离 心 10 min,取 上 清 液 于 590 nm 处 测 定
OD 值[16]。
2.5 统计学处理
数 据 均 采 用 SPSS 10.0 for Windows 统 计 分 析
软件分析处理,数据用 x±s 表示,两组之间的比较
用 Dunnett t 检验,P<0.05 为差别具有统计学意义。
3 结果
3.1 对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响
小鼠耳廓肿胀度上金荞麦叶发酵茶高、中剂量
组与空白组作比较,P<0.01 表示差异具有显著性,
P<0.05 表示差异具有统计学意义,低、中、高剂量组
抑制率分别为 26.2%、33.3%、36.1%,显示金荞麦叶发
酵茶能明显抑制二甲苯致小鼠耳肿胀。结果见表 1。
3.2 对角叉菜胶所致小鼠足肿胀的影响
组别
剂量 /g·kg-1
(生药)
耳廓肿胀度 /
mg
抑制率 /%
空白对照组 - 18.3±6.29 -
阿司匹林组 0.2 11.7±4.42** 36.0
低剂量组 1.25 13.5±5.30 26.2
中剂量组 2.5 12.2±4.16* 33.3
高剂量组 5 11.7±3.86** 36.1
注:与空白对照组比较,*P<0.05,**P<0.01。
表1 金荞麦叶发酵茶对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响(n=10)
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世界科学技术—中医药现代化★中药研究
金荞麦叶发酵茶高、中剂量在角叉菜胶致炎后
均能降低大鼠右足跖肿胀率,减轻肿胀程度,与对
照组比较,其差异具有显著统计学意义, 同时 2、4、
6 h 的大鼠右足跖肿胀减轻的趋势是随时间的延长
作用更加明显。结果见表 2。
3.3 对小鼠棉球肉芽肿的影响
金荞麦叶发酵茶高、中剂量对肉芽组织湿重及
干重,均具有抑制作用(P<0.05)。结果见表 3。
3.4 对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响
金 荞 麦 叶 发 酵 茶 高 剂 量 组 与 空 白 组 比 较
P<0.01,中剂量组与空白组比较 P<0.05,差异具有
统计学意义,提示金荞麦叶发酵茶能降低冰醋酸所
致小鼠腹腔通透性增加,且具有明显的量效关系。
结果见表 4。
4 讨论
炎症是活体组织对致炎因子及局部损伤所产
生的以血管渗出为中心的防御反应,是机体对抗有
害因子的侵袭而产生的一种维持内环境稳定的保
护措施。炎症的早期反应往往以渗出为主,后期以
慢性增生为主。非特异性炎症模型一般分为以毛
细血管通透性为特征的急性炎症模型和以肉芽组
织 增 生 为 主 的 慢 性 炎 症 模 型。 本 研 究 表 明,金 荞
麦叶发酵茶可以降低腹腔毛细血管通透性,减少渗
组别
剂量 /g·kg-1
(生药)
肉芽肿湿重
/mg
肉芽肿干重
/mg
空白对照组 - 26.5±4.41 4.82±1.08
阿司匹林组 0.2 22.7±2.98* 3.95±0.60*
低剂量组 1.25 25.8±5.32 4.80±1.27
中剂量组 2.5 23.1±2.44* 3.60±0.97*
高剂量组 5 22.3±3.39* 3.72±0.95*
注:与空白对照组比较,*P<0.05。
表3 金荞麦叶发酵茶对小鼠棉球肉芽肿的影响(n=10)
组别
剂量 /g·kg-1
(生药)
不同时间足掌肿胀度 /mm
0 h 1 h 2 h 4 h 6 h
空白对照组 - 3.08±0.16 3.82±0.25 4.28±0.32 4.66±0.36 3.81±1.12
阿司匹林组 0.2 3.07±0.11 3.61±0.15* 3.98±0.19* 4.04±0.25** 3.60±029**
低剂量组 1.25 3.03±0.12 3.96±0.29 4.44±0.45 4.42±0.37 3.98±0.25
中剂量组 2.5 3.06±0.16 3.53±0.34* 3.79±0.39** 3.72±0.39** 3.49±0.40**
高剂量组 5 3.04±0.08 3.67±0.20 4.14±0.20 4.18±0.17** 3.72±0.24**
注:与空白对照组比较,*P<0.05,**P<0.01。
表2 金荞麦叶发酵茶对角叉菜胶所致小鼠足肿胀的影响(n=10)
组别
剂量 /g·kg-1
(生药)
腹腔通透性 /OD
空白对照组 - 0.42±0.08
阿司匹林组 0.2 0.26±0.08**
低剂量组 1.25 0.39±0.09
中剂量组 2.5 0.34±0.07*
高剂量组 5 0.29±0.07**
注:与空白对照组比较,*P<0.05,**P<0.01。
表4 金荞麦叶发酵茶对腹腔毛细血管通透性的影响(n=10)
出,表明金荞麦发酵茶对急性渗出性炎症具有抑制
作用。荞麦茶可以减轻棉球肉芽肿重量,表明金荞
麦发酵茶具有抑制慢性炎症时纤维组织增生。因
此,金荞麦发酵茶能抑制急、慢性炎症,具有良好的
抗炎作用。
炎症通常是有利的,但炎症反应过强或剧烈时,也
可导致机体损害。炎症的进展往往会导致各种疾病的
发生与机体的衰老等,因此,抗炎抗衰老也成为近年研
究的热点之一。常用的认为具有保健作用的中药如枸
杞、何首乌、咖啡等均具有一定的抗炎作用[16-18],并且
认为其抗炎作用与抗衰老保健等作用具有密切相
关性。阿司匹林为西药,具有抗炎、解热、镇痛,小
剂量预防血栓形成的作用, 金荞麦发酵茶也具有明
显的非特异性抗炎作用,但金荞麦是天然产物,前
期的研究表明其具有降血糖、降血脂[19]、增强免疫
力、抗癌等功能,也是金荞麦发酵茶具有保健功能
原因之一。
本研究提示,金荞麦叶发酵茶不仅是适合大众
消费的绿色饮品,也具有一定的抗炎活性,而这种
抗炎活性可能就是其具有保健功能的主要原因之
一。前期研究也表明,金荞麦发酵茶没有明显的毒
性,且资源丰富,具有巨大的经济价值和医疗保健
价值,具有广阔的开发前景,值得进一步深入研究。
2015 第十七卷 第五期 ★Vol.17 No.5
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参考文献
Study on Anti-inflammatory Function of Gold Buckwheat Fermented Tea
Huang Xiaoyan1, Huang Sha1, Chen Qingfu2
(1. School of Life Science, Guizhou Normal University, Guiyang 550001, China;
2. Institute of Plant Genetics and Breeding, School of Life Science, Guizhou Normal University,
Guiyang 550001, China)
Abstract: This study was aimed to observe the effect of gold buckwheat fermented tea on both acute and chronic
inflammation in mice. Ear swelling was induced by xylene. Toe swelling was induced by carrageenan. The acute
inflammation model was induced by the increasing of capillary permeability in the abdomen of mice by acetic
acid. The chronic inflammation model of granuloma was used in the evaluation of anti-inflammatory function of
gold buckwheat fermented tea. The results showed that the gold buckwheat fermented tea can obviously decrease
the rate of xylene-induced ear swelling and the degree of carrageenan-induced toe swelling in mice. And the gold
buckwheat fermented tea had antagonism effect on acute inflammation caused by acetic acid through the increasing
of capillary permeability in abdomen of mice. Furthermore, the gold buckwheat fermented tea had obvious inhibition
effects on proliferation of granuloma in chronic inflammation. It was concluded that the gold buckwheat fermented
tea had the prevention and treatment effect on both acute and chronic inflammation.
Keywords: Gold buckwheat fermented tea, anti-inflammation, ear swelling, toe swelling, capillary permeability of
abdomen, granuloma
(责任编辑:曹新伟 张志华,责任译审:王 晶)