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[4] 金玉青,洪远林,李建蕊,等.川芎的化学成分及药理
作用研究进展[J].中药与临床,2013,4(3):44-48.
[5] 徐如英,童树洪.红花的化学成分及药理作用研究进
展[J].中国药业,2010,19(20):86-87.
[6] 田兰,吴桂荣,王岩.红花黄色素研究进展[J].西北药
学杂志,2007,22(4):218-220.
[7] 阮金兰,赵钟祥,曾庆忠,等.赤芍化学成分和药理作用
的研究进展[J].中国药理学通报,2003,19(9):965-970.
[8] 张清华,张玲.菊花化学成分及药理作用的研究进展
[J].食品与药品,2007,9(2):60-63.
[9] 吴士杰,李秋津,肖学风,等.山楂化学成分及药理作
用的研究[J].药物评价研究,2010,33(4):316-319.
[10]刘育辰,陈有根,王丹.甘草化学成分研究[J].药物分
析杂志,2011,31(7):1251-1252.
[11]陶晡,刘晓清,屈振刚.甘草化学成分研究进展[J].河
北农业科学,2009,13(3):77-79.
[12]中国药品食品监督管理局.关于印发《中药注射剂指
纹图谱研究的技术要求(暂行)》的通知)[J].中国药品
标准,2000,1(4):3-4
[13]彭川丛,梁英娇.中药指纹图谱研究进展[J].实用中
医药杂志,2010,26(11):810-812.
(收稿日期:2014-05-07)
蒙古山萝卜有效成分的分离、鉴定及含量测定
白音夫1,周雪梅2,周长凤1,李德良1,冯国庆1,任小伟1(1.内蒙古自治区中蒙医研究所,呼和浩特 010020;2.内蒙古自
治区食品药品检验所,呼和浩特 010070)
摘要:目的 分离和鉴定蒙古山萝卜有效成分并测定含量。方法 制备薄层分离蒙古山萝卜有效成分,根据光谱数据确定结构,
用 HPLC法测定含量。结果 所分离的化合物为绿原酸;HPLC法绿原酸质量浓度在7~140μg·mL
-1范围内呈线性关系(r=
0.999 0),平均回收率为101.2%,RSD 为2.6%。内蒙古不同产地蒙古山萝卜绿原酸含量在0.164%~0.413%之间。
结论 HPLC法测定表明,内蒙古不同地区蒙古山萝卜绿原酸含量有较大差异。
关键词:蒙古山萝卜;有效成分;绿原酸;蒙药;HPLC
doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2014.06.005
中图分类号:R284 文献标志码:A 文章编号:1004-2407(2014)05-564-03
Isolation,identification and determination of the active compounds in Scabiosa
comosa Fisch
BAI Yinfu1,ZHOU Xuemei 2,ZHOU Changfeng1,LI Deliang1,FENG Guoqing1,REN Xiaowei 1(1.Institute of Traditional Chi-
nese-Mongol Medicine of Inner Mongol Autonomy-Region,Huhaoter 010020,China;2.Institute for Food and Drug Control of In-
ner Mongol Autonomy-Region,Huhaoter 010070China)
Abstract:Objective To investigate the chemical constituents of Scabiosa comosa Fisch.Methods The chemical constituents were i-
solated by preparation thin layer chromatography and structures were determined by chemical and spectroscopic methods.HPLC
was used for the content determination.Results A compound was isolated fromScabiosa comosa Fisch.The structure was identi-
fied as chlorogenic acid.Chlorogenic acid in the range of 7to 140μg·mL
-1 showed a good linear relationship.The average recov-
ery of chlorogenic acid was 101.2% with RSD 2.6%.Chlorogenic acid content was from 0.164%to 0.413%in Scabiosa comosa
Fischin Inner Mongolia different origins.Conclusion HPLC results shows that the chlorogenic acid content was quite different in
Inner Mongolia Mongolia Scabiosa comosa Fisch from different areas.
Key words:Scabiosa comosa Fisch;active compounds;chlorogenic acid;HPLC;Monglia drug
基金项目:国家自然科学基金项目(编号:81260659)
基金项目:内蒙古自治区自然科学基金(编号:2014MS0860)
蒙古山萝卜Scabiosa comosa Fisch的花卉,为蒙
医药治疗肝病的药材。蒙医认为,该药微甘、性凉,入
肝、肺经,有清肝明目、祛火消积功效,用于肝热症、肝
中毒、肝性消瘦、黄疸性肝炎,该药与其他药材配伍,
可治疗多种肝脏疾病[1]。实验发现,该药可以提高小
鼠血清溶菌酶、巨噬细胞溶菌酶、巨噬细胞酸性磷酸
酶和巨噬细胞杀伤李斯特杆菌的活性;降低大肠杆菌
内毒素的毒性;有解热、消炎作用;抗氧化、防治肝损
伤与肝纤维化作用[2-5]。由于主要成分不明确,在蒙
药药材标准中暂无测定方法[6]。本文对其主要成分
分离、鉴定,在此基础上建立含量测定方法[7]。
1 仪器与试药
1.1 仪器 1100型高效液相色谱仪(美国安捷伦公
司);TJ-912型色谱分析平台(太极计算机公司);
IN-180型柱温箱(上海英泰科技研究所);SH6150D
超声波清洗器(上海昆山仪器有限公司);电子天平
(梅特勒托利多仪器有限公司)。
1.2 试药 绿原酸对照品由中国药品生物制品检定
所提供;乙腈、甲醇为色谱纯;其余试剂为分析纯。研
465 西北药学杂志 2014年11月 第29卷 第6期
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究用蒙古山萝卜由呼和浩特市药材站提供;测定样品
于2007年9月~2011年9月中旬采集于内蒙不同
山区,采集的样品及时干燥,避光保存。
2 方法与结果
2.1 结构分析
2.1.1 提取 取蒙古山萝卜粉碎过60目筛,称取
100g,加800mL石油醚(60~90℃沸程)回流提取
1h;药渣晾干,加水1 000mL回流1h,提取液趁热
滤过,滤液放冷,加乙醇至体积分数为80%,搅拌,静
置24h;取上清液,滤过,减压回收乙醇并浓缩成清
膏,低温干燥,粉碎成细粉;加200mL乙酸乙酯超声
处理,滤过,取滤液,蒸干,残渣加甲醇10mL使其溶
解,备用。
2.1.2 薄层的制备与样品的分离 取硅胶G,加质
量分数1%羧甲基纤维素钠,照薄层色谱法(《中国药
典》2010年版一部附录ⅥB)制成(1.5mm×200mm
×200mm)的薄层板,备用。展开剂:乙酸乙酯-甲
酸-水(7∶2∶3)上层液。线性点样,展距140mm,晾
干,置于紫外灯(356nm)下切割产生荧光区域的硅
胶,用甲醇提取,过滤,蒸干甲醇,得白色结晶。
2.1.3 鉴 定 UVλmxaMeOH nm 330,244,220。
IRvmaxKBr cm-1 3 400(-OH),1 708(C=O),1 660,
1 640,1 620,985,835。MS:m/z 354(M+),180,
163,130。HNMRδ6.25(1H,d,J=15.9Hz,H-α),
6.82(1H,d,J=8.2Hz,H-5),6.97(1H,dd,J1=
8.2Hz,J2=2.1 Hz,H=67),7.21(1H,d,J=
2.1Hz,H-2),7.52(1H,d,J=15.9Hz,H-β)。Rf、
HPLC-tR值与绿原酸相同,UV、IRv图谱与绿原酸一
致,确定结晶为绿原酸。
2.2 含量测定
2.2.1 色谱条件 色谱柱Kromasil C18(200mm×
4.6mm,5μm);流动相:乙腈-3mL·L
-1磷酸溶液
(12∶88);流速:1mL·min-1;温度:30℃;检测波
长328nm;进样量10μL,在此条件下待测组分可达
到基线分离[1]。样品中绿原酸与其他组分有较好的
分离,见图1。
2.2.2 标准曲线制备 精密称取干燥至恒质量的绿
原酸对照品适量,置于棕色量瓶中,用甲醇溶解,配制
成1mL含0.28mg绿原酸溶液,作为对照品溶液。
分别精密量取绿原酸对照品溶液0.25,0.5,1,2,3,4和
5mL,置于10mL量瓶内,用甲醇稀释至刻度,按上述色
谱条件进行测定。结果,在质量浓度7~140μg·mL
-1
范围内以峰面积(A)与对照品质量浓度(C)进行回
归,其线性关系良好。回归方程:A=5 452.5+
7 008.4 C,r=0.999 0。
2.2.3 供试品溶液制备 精密称取蒙古山萝卜药材
0.2g,置于50mL具塞磨口瓶内,加甲醇10mL,称
质量,超声处理30min,放冷,称质量,用甲醇补足减
失的质量,摇匀,滤过,取续滤液备用,即得。
图1 HPLC图
A.绿原酸对照品;B.供试品;1.绿原酸
Fig.1HPLC chromatograms
A.chlorogenic acid reference;B.sample;1.chlorogenic acid
2.2.4 精密度实验 精密抽取对照品溶液10μL,
按上述色谱条件,连续进样6次,测得绿原酸峰面积
的RSD为0.41%。
2.2.5 稳定性实验 取同一供试品溶液,分别于0,
1,2,4,8和12h进样,以绿原酸峰面积值计算RSD
为0.71%。结果表明,供试品溶液在12h内稳定。
2.2.6 重复性实验 精密称取样品6份,每份约
0.2g,按2.2.3项下方法制备供试品溶液,在上述色
谱条件进行分析,并计算含量,绿原酸含量的平均值
(n=6)为3.20mg·g-1,RSD为1.33%。
2.2.7 回收率实验 取上述含量的同批样品6份,
每份约0.12g,置于50mL量瓶中,依次分别加入
0.1mL(1mL含绿原酸4.20mg)对照品溶液,挥去
溶剂,按供试品溶液的制备操作,测定含量,计算回收
率。绿原酸平均回收率为101.2%,RSD为2.6%。
2.2.8 样品测定 精密称蒙古山萝卜药材,按以上
确定的方法制成供试品溶液,测定样品中的含量,不
同产地样品中绿原酸含量分别为:呼和浩特蛮汉山
0.242%,呼和浩特大青山0.278%,呼和浩特圣水梁
0.360%,乌兰察布辉腾梁0.431%,呼伦贝尔红花尔
基林场0.164%。
3 讨论
本文通过制备薄层分离蒙古山萝卜成分,经鉴定
为绿原酸,在此基础上建立 HPLC法测定药材中绿
原酸含量的方法。对内蒙古不同产地的蒙古山萝卜
中的绿原酸含量进行了分析,发现不同产地药材含量
差别较大,可见气候条件对药材成分的影响。由于蒙
古山萝卜是蒙医药治疗肝性疾病的特色药材,长期以
来无含量测定方法,本实验研究为蒙古山萝卜建立含
量测定标准,填补了空白,可为深入研究开发蒙古山
萝卜提供参考数据。
蒙古山萝卜成分已有研究报道,但成分中未见绿
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原酸报道[8]。绿原酸具有多种活性,是药品、保健品
原料。根据药材中绿原酸含量高低可基本确定药材
品质和疗效。
用本法测定蒙古山萝卜中的绿原酸含量,其特点
是样品预处理简单,回收率稳定,重复性好,可作为药
材的质量评价方法。
参考文献:
[1] 内蒙古卫生局.内蒙古中草药[M].呼和浩特:内蒙古
人民出版社,1972:158-159.
[2] 田国才,刘朝,沈敬华,等.蒙古山萝卜总黄酮激活小
鼠腹腔巨噬细胞的动态研究[J].中华微生物学和免疫
学杂志,1986,6(2):107-111.
[3] 于洁,李希贤.蒙药兰盆花总黄酮对家兔外周血白细胞
的影响[J].内蒙古药学,1986,4(1):27-29.
[4] 白音夫,李锐峰,顾维章.蒙古山萝卜总黄酮解热、消
炎、镇痛作用研究[J].内蒙古药学,1987,5(1):43-45.
[5] 武桂枝,白音夫,常亮.蒙古山萝卜酸对免疫性肝炎的
保护及免疫调节[J].中国民族医药杂志,2007,13(4):
55-56.
[6] 国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准:蒙
药分册[S].1998:52.
[7] 刘放,陈冰冰,吴小平.HPLC法测定菊花中绿原酸的
含量[J].西北药学杂志,2010,25(5):350-352.
[8] 王乃利,白玉霞,樊峥嵘,等.蒙古山萝卜活性成分的研
究[J].中草药,1989,20(6):7-9.
(收稿日期:2014-05-23)
新疆紫草中紫草素提取方法研究
张继业1,杜 蕊2,刘婷婷1,杨范莉1,童 华3*(1.西安交通大学药学院,西安 710061,2.陕西省眼科研究所,西安市眼
科医院,西安市第一医院,西安 710002;3.西安交通大学第一附属医院,西安 710061)
摘要:目的 采用石油醚、乙醇、氯仿、碱液4种溶剂提取紫草素,选出最优提取方法。方法 紫草质量与提取溶剂体积比为
1∶9,室温下搅拌浸提2次,用高效液相色谱梯度洗脱测定提取物中紫草素的含量,以紫草素提取率对提取方法进行评价。
结果 新疆紫草4种溶剂中紫草素含量高低顺序依次为碱液、乙醇、氯仿、石油醚提取物。结论 碱液提取可提高提取物中紫草
素的含量,并可减少有机溶剂的用量,经济、环保、实用。
关键词:新疆紫草;紫草素;提取方法
doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2014.06.006
中图分类号:R282 文献标志码:A 文章编号:1004-2407(2014)06-0566-03
Study on shikonin extraction fromArnebia euchroma
ZHANG Jiye1,DU Rui 2,LIU Tingting1,YANG Fanli 1,TONG Hua3*(1.School of Pharmacy,Xi′an Jiaotong University,Xi′an
710061,China;2.Shaanxi Institute of Ophthalmology,Xi′an Hospital of Ophthalmology,the First Hospital of Xi′an,Xi′an
710002,China;3.the First Affiliated Hospital of Xi′an Jiaotong University,Xi′an 710061,China)
Abstract:Objective To optimize the extraction of shikonin fromArnebia euchroma with solvent extraction in four solvents.Meth-
ods The extractions were carried out in petroleum ether,ethanol,chloroform,and 10g·L-1 NaOH solution with stirring at
25℃,solvent extraction time of 30min,and solid to liquid ratio 1∶9.The extraction process was conducted in duplicate.The
shikonin content in extracts were measured by HPLC with gradient elution.Extraction methods were evaluated by extraction
yield.Results The yield of shikonin extraction differed in four solvents(10g·L-1 NaOH solution>ethanol>chloroform>petro-
leum ether).Conclusion The shikonin extraction in NaOH solution provides higher extraction yield and significantly reduces the
amount of organic solvent.This economic and environmental method is suitable for shikonin extraction fromArnebia enchroma.
Key words:Arnebia euchroma;shikonin;extraction methods
基金项目:陕西省自然科学基金项目(编号:2012JQ4025)
作者简介:张继业,男,讲师
*通信作者:童华,男,主治医师
新疆紫草(Arnebia euchroma (Royle)Johnst)
是紫草科软紫草属植物,也称新疆软紫草。作为传统
中药,新疆紫草具有多种生物学活性,如抑菌、伤口愈
合、抗病毒、抗炎、抗癌、抗肿瘤等[1-2],在临床上应用
广泛。从紫草中分离提取出以紫草素为代表的萘醌
类成分为其主要活性成分。同时紫草素也是良好的
天然色素,已广泛用于食品和化妆品中。
目前报道的紫草素提取方法有溶剂萃取法、减压
蒸馏法、超声提取法、微波提取法、超临界萃取法
等[3-5]。但受成本和设备限制,可应用于大量生产的
最优提取方法仍是传统的溶剂萃取法。而有研究发
现,采用不同的溶剂提取紫草素会使得紫草提取物中
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