全 文 ：　　表 2 　ADS-Ⅰ对 H22荷瘤小鼠 60Co-y放疗的增效作用( x±s)
组别 剂量(mg/kg)
动物数 平均体质量
始 /终 始 终
瘤重(g) 抑瘤率(%) 增效率(%)
对照 - 10/10 19±1 20±2 1.79±0.36# - -
放疗 - 10/10 19±2 20±3 1.37±0.51 23.5 -
放疗 +甘氨双 300 10/10 19±2 21±2 0.83±0.53＊＊# 53.6 39.4
放疗 +ADS-Ⅰ 12.5 10/10 19±2 19±2 1.13±0.45＊ 36.9 17.5
放疗 +ADS-Ⅰ 25 10/10 19±2 19±2 0.91±0.38＊＊# 49.2 33.6
放疗 +ADS-Ⅰ 50 10/10 19±2 19±3 0.89±0.47＊＊# 50.3 35.0
放疗 +ADS-Ⅰ 100 10/10 19±2 19±3 0.80±0.25＊＊## 55.3 41.6
　　注:t检验 ,与放疗组比较 , #P<0.05, ##P<0.01;与对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01
试验批准 ,可在临床试验设计时考虑对进行 5-Fu治
疗 、放疗的敏感肿瘤患者 ,给予九节龙皂苷 ,进一步
确认是否有放化疗增效作用。
参 考 文 献
[ 1] 张清华 ,王晓娟 , 缪振春 ,等 .川产九节龙皂甙的化学研
究.药学学报 , 1993, 28(9):673-678.
[ 2] 中国人民解放军第四军医大学 .川产九节龙皂甙作为
制备抗肿瘤药物的应用 .中国专利 .A61K31/70,
99115731.2000-09-20.
[ 3] 王四旺 ,谢艳华 , 刘佳 ,等.川产九节龙皂甙在小鼠体内
的抗肿瘤作用.第四军医大学学报 , 2000, 21(12):236-
237.
[ 4] 梁克明 ,王四旺 , 王晓娟 .九节龙皂甙对 8株人癌细胞
的抑制作用 .第四军医大学学报 , 2001, 22(7):671-
672.
[ 5] 陶小军 , 王佩肾 , 杨孝江 , 等 .九节龙皂苷 Ⅰ 对小鼠
Lewis肺癌和裸鼠肝癌 SMMC-7721的抑制作用 .中药
材 , 2005, 28(7):574-577.
[ 6] 王玉璞 ,王志涛.癌化液对荷瘤动物化疗增效和减毒作
用的实验研究 .中药药理与临床 , 2000, 16(2):21-22.
[ 7] 王艳 , 吴玉波 ,张永恒 .猪苓多糖对顺铂增效作用及其
毒性作用 .中医药研究 , 1996, 5:60-61.
[ 8] 王佾先 , 亢寿海 ,张琴芬 , 等.扶正抑瘤冲剂对放化疗的
增效减毒作用研究 .现代中西医结合杂志 , 2001, 10
(15):1417-1419.
(2005-10-20收稿)
三叶青提取物对烫伤大鼠肠道局部和全身免疫功能的影响
钟晓明 1 ,毛庆秋 1 ,黄　真1 ,梁泽华 2 ,陈孔荣 1
(1.浙江中医学院药学系 ,浙江杭州 310053;2.浙江中医学院生物工程系 ,浙江杭州 310053)
　　摘要　目的:探讨三叶青提取物对烫伤大鼠肠道局部和全身免疫功能的影响。方法:复制大鼠 40%Ⅲ度烫伤
模型 , 采用免疫透射比浊法测定大鼠血清中免疫球蛋白 A(IgA)含量;采用双抗体夹心 ELISA法 ,测定大鼠血清中
白细胞介素-6(IL-6)含量;用放射免疫分析法测定大鼠回肠粘液提取液中 S-IgA含量;比色法测定大鼠肠粘膜丙二
醛(MDA)含量;检测大鼠脾淋巴细胞增殖情况及自然杀伤细胞(NK)活性。结果:三叶青提取物能拮抗烫伤致大鼠
血清 IgA含量降低 、回肠粘液中 S-IgA含量降低及肠粘膜中 MDA含量升高作用;能拮抗烫伤致大鼠脾脏淋巴细胞
增殖能力下降 、NK细胞活性降低及烫伤引起的血清 IL-6水平增加作用。结论:三叶青提取物对烫伤引起的肠道局
部和全身免疫紊乱有纠正作用。
关键词　三叶青提取物;烫伤;免疫功能
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2006)09-0953-03
　　三叶青 RadixTetrastigmae为葡萄科植物三叶崖
爬藤 TetrastigmahemsleyanumDielsetGilg的干燥块
根 ,分布于我国浙江 、广西 、江西 、福建等省区 〔1〕。
具有清热解毒 ,祛风化痰 ,活血止痛的功能 ,中医临
床用于治疗高热惊厥 、腹痛 、肺炎 、哮喘 、肝炎等
症〔2〕。我们前期的药理实验表明三叶青提取物有
消炎 、镇痛 、解热作用 〔3〕以及免疫调节功能且已有
研究证明烧伤可引起肠道局部及全身免疫功能紊
·953·中药材第 29卷第 9期 2006年 9月
乱 ,烧伤感染及一些并发症与烧伤后肠道局部及全
身免疫紊乱有关 〔4〕。本实验利用大鼠烫伤实验模
型探讨三叶青提取物对烫伤大鼠肠道局部和全身免
疫功能的纠正作用 ,以期为三叶青临床防治烧伤并
发症提供实验依据。
1 　材料
1.1 　药物和试剂　三叶青干品 ,购于浙江省中医
院中药房 ,经浙江中医学院资源鉴定教研室陈孔荣
副教授鉴定为三叶青(RadixTetrastigmae)。三叶青
提取物(ExtractofRadixTetrastigmae, ERT)的制备:
将 1000g药材常规加工粉碎后过 20目筛 ,用水回
流提取 2次 ,用旋转蒸发仪浓缩至相当于含生药
0.16g/ml,置冰箱备用;MDA试剂盒(南京建成生
物工程研究所);IL-6放免药盒(中国人民解放军总
医院科技开发中心放免研究所产品);IgA试剂盒
(上海太阳生物技术公司提供);S-IgA试剂盒(北京
邦定泰克生物技术有限公司);刀豆蛋白 A(Coneav-
alinA)(Sigma公司);3H-TDR(中国科学院上海原
子核研究所 );YAC-1细胞 (中科院上海细胞生物
所)。
1.2 　动物　SD雄性大鼠 ,体重(200±20 g),由浙
江中医学院实验动物中心提供 ,动物合格证:SYXK
(浙)2003-0003。
1.3 　仪器　GL-21M高速冷冻离心机(湘仪离心机
仪器有限公司);37℃、5%二氧化碳孵箱(美国西门
SIM公司);超净工作台(北京半导体设备一厂),倒
置显微镜(Olympus公司);微孔板闪烁发光计数仪
和细胞收集器(均为 Packard公司);奥林巴斯 AU-
600全自动生化分析仪(Olympus公司)。
2 　方法
2.1 　实验分组　50只 SD大鼠饲养 1周以适应环
境后 ,随机分为 5组 ,即正常组 ,模型组 ,三叶青提取
物高 、中 、低剂量组(4.8、2.4、1.2 g/kg)。各组分别
自烫伤后第 1天开始 ig给药 ,每天一次 ,连续 7 d。
正常组及模型组 ig相同剂量的生理盐水。大鼠于
伤后第 8天杀死 ,采集血液 ,回肠粘液 ,脾脏 (无菌
条件下)及肠粘膜进行以下有关指标的检测。
2.2 　大鼠烫伤模型的制备　用 8%硫化钠使大鼠
背部脱毛。实验当天 ,在非麻醉状态下 ,将大鼠背部
浸入 100℃恒温沸水中 12s,致 40%Ⅲ度烫伤模型 ,
伤后立即腹腔内注射生理盐水 6ml,以抗休克 ,然后
分笼饲养 ,自由进食 、水。
2.3 　相关指标含量的测定　分离血清 ,采用免疫
透射比浊法检测 IgA含量;取血清 ,采用双抗体夹心
ELISA法 ,检测血清中 IL-6含量 。取回肠粘液 ,稀
释离心(3000rpm/min, 10min),取上清液用放射免
疫分析法检测提取液中 S-IgA含量;取肠粘膜配成
10%匀浆 ,采用比色法按试剂盒步骤进行检测 MDA
含量 。
2.4　淋巴细胞增殖试验　取大鼠脾脏 ,用淋巴细
胞分离液常规分离细胞 ,洗涤后悬浮于 RPMI1640
完全培养液中 ,调细胞浓度至 1×107 /ml,加入 96孔
平底细胞培养板 ,每孔 0.1ml, 每只每孔加 ConA5
μg,每孔总反应体积为 0.2 ml,每只动物设 3个复
孔 ,置 37℃, 5%CO2培养箱 20 h后 , 每孔加入 3H-
TdR10 μl,继续培养 8 h, 多头细胞收集仪收集细
胞 ,微孔板闪烁发光计数仪测 cpm值 。
2.5　NK细胞活性的测定　脾细胞制备同上。以
YAC-1细胞为靶细胞 。靶细胞的标记:取生长良好
的传代 YAC-1细胞 ,调细胞浓度至 1 ×107 /ml,加
3HTdR混匀后 ,置 37℃, 5%CO2孵育箱标记 2 h,用
RPMI1640培养液离心洗涤 2次 ,再配制成细胞悬液
计数细胞及闪烁仪计数标记 cpm值。效靶细胞的
种入:将标记好的靶细胞配成 2×105 /ml浓度 ,加入
96孔平底培养板中 ,每孔 1×104标记细胞 ,同时每
孔加入不同组别 1×106个脾细胞 ,加 3H-TdR混匀
后使效靶比为 100∶1,每份样品设 3个复孔 ,总反应
体积为 0.2 ml,并设立自然释放组 、最大释放组 ,置
37℃, 5%CO2培养箱共同孵育 14 h, 每孔加胰酶
300 mg、DNA酶 5 mg, 30 min后多头细胞收集仪收
集细胞测 cpm值 ,按下列公式计算释放率 (%):
NKCC%=(实验组 cpm-自然释放组 cpm)/(最大释
放组 cpm-自然释放组 cpm)。
2.6　数据处理 　实验数据以 x±s表示 , 采用
SPSS11.5分析应用软件处理 、分析数据 ,组间样本
比较采用 t检验 , P<0.05表示具有显著性差异。
3　结果
3.1　三叶青提取物对肠道免疫功能的影响　实验
结果见表 1。与正常组比较 ,烫伤组(模型组)大鼠
后血清中 IgA含量明显降低(P<0.01);回肠粘液
中 S-IgA含量明显降低(P<0.01);肠粘膜中 MDA
含量明显升高(P<0.01)。提示烫伤后大鼠肠道免
疫功能紊乱。与模型组比较 ,三叶青高 、中剂量组能
明显增加烫伤大鼠血清中 IgA含量(P<0.01 , P<
0.05);及回肠粘液中 S-IgA含量 (P<0.05, P<
0.05)。三叶青高 、中 、低剂量组能明显降低肠粘膜
中 MDA含量(P<0.01 , P<0.01, P<0.05)。
3.2　三叶青提取物对机体免疫功能的影响　实验
结果见表 2。与正常组比较 ,烫伤组(模型组)大鼠
体外培养的脾脏淋巴细胞对 ConA刺激的细胞增殖
·954· 中药材第 29卷第 9期 2006年 9月
明显减少(P<0.01), NK细胞杀伤活性明显下降(P
<0.01),血清中 IL-6含量明显升高(P<0.01)。提
示烫伤后大鼠机体免疫功能紊乱。与模型组比较 ,
三叶青高 、中 、低剂量组能明显增加烫伤大鼠脾淋巴
细胞增殖(P<0.01, P<0.01, P<0.05);三叶青高 、
中剂量组能明显增加烫伤大鼠脾 NK细胞杀伤活性
(P<0.01, P<0.01);三叶青高 、中剂量组能明显降
低烫伤大鼠血清 IL-6浓度(P<0.01, P<0.05)。
　表 1　　　　三叶青提取物对烫伤大鼠肠道
免疫功能的影响( x±s, n=10)
组别 剂量(g/kg) IgA(mg/L) S-IgA(μg/L) MDA(μmol/g)
正常组 - 243.5±24.8 60.8±12.8 56.6±7.2
模型组 - 198.6±23.3## 40.1±14.2## 126.5±15.6##
高剂量组 4.8 233.8±18.12＊＊ 56.6±7.2＊ 74.8±24.2＊＊
中剂量组 2.4 228.1±27.2＊ 53.4±7.9＊ 92.5±23.7＊＊
低剂量组 1.2 213.8±22.8 49.7±7.1 106.9±15.8＊
　　注:与模型组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01;与正常组比较 , #P<
0.05, ##P<0.01(下同)
　表 2　　　　三叶青提取物对烫伤大鼠机体
免疫功能的影响( x±s, n=10)
组别 剂量(g/kg) 淋巴细胞增殖(cpm) NK细胞活性(%) IL-6(pg/ml)
正常组 - 8263±891 82.3±7.9 16.3±4.1
模型组 - 6350±838## 63.0±7.7## 30.6±8.6##
高剂量组 4.8 8025±554＊＊ 79.6±5.1＊＊ 19.8±4.7＊＊
中剂量组 2.4 7512±553＊＊ 73.3±7.4＊＊ 22.6±5.2＊
低剂量组 1.2 7112±530＊ 68.6±7.2 25.6±6.2
4 　讨论
肠道免疫功能是肠道三大屏障之一。严重烫伤
后 ,造成人体内最大细菌和毒素的 “贮库”肠道受
损 ,是引起肠道细菌易位及创伤后脓毒症的原因之
一 。肠粘膜粘液中所含的 S-IgA能有效阻止细菌在
肠粘膜细胞上的附着 ,是肠粘膜屏障的第一道防
线 〔5〕 ,它可抑制肠腔内细菌粘附粘膜并可预防细菌
穿越粘膜层 。 S-IgA的前体是 IgA, IgA是机体内分
泌量最大的免疫球蛋白 ,能够中和病毒 ,毒素和酶等
生物活性抗原 ,其最主要的保护作用是阻止细菌对
肠上皮细胞表面的吸附。同时烧伤后氧自由基的大
量产生 ,烧伤后血管收缩 ,引起肠道缺血再灌注损
伤 ,产生大量氧自由基 、过氧化物及 MDA,对肠粘膜
也产生明显的损伤作用 ,因此测定 MDA含量可以
间接估计细胞膜脂质化氧化程度 ,从而推测组织损
失程度 。本实验结果表明:大鼠烫伤后与正常组比
较血清中 IgA含量明显降低(P<0.01);回肠粘液
中 S-IgA含量明显降低(P<0.01);肠粘膜中 MDA
含量明显升高(P<0.01)。提示烫伤后大鼠肠道免
疫功能紊乱。而经中药三叶青提取物治疗后 ,大鼠
血清中 IgA含量明显升高;回肠粘液中 S-IgA含量
明显升高;肠粘膜中 MDA含量明显降低 。结果提
示三叶青可有效改善大鼠肠道免疫功能及保护肠道
损失 ,这对防治肠道细菌和毒素的移位有重要意义。
机体大面积烫伤后全身免疫功能亦低下 ,一方
面表现为以淋巴细胞功能 , IL-2合成水平及 NK细
胞活性降低为代表的免疫防御机能下降;另一方面
表现为以 IL-6等炎性细胞因子合成 、分泌增强为代
表的过度炎症反应 〔6〕 ,从而使机体易于并发感染 ,
导致烧伤病人病死率增高。本实验结果亦支持上述
结论 。与正常组比较 ,烫伤组(模型组)大鼠体外培
养的脾脏淋巴细胞对 ConA刺激的细胞增殖明显减
少(P<0.01), NK细胞杀伤活性明显下降 (P<
0.01);血清中 IL-6含量明显升高(P<0.01)。而经
中药三叶青提取物治疗后 ,大鼠机体免疫功能明显
改善 ,提示三叶青能增强机体烫伤后免疫防御能力
及预防伤后过度炎症反应。
总之 ,实验结果表明:三叶青提取物能拮抗烫伤
致大鼠血清 IgA含量明显降低 、回肠粘液中 S-IgA
含量降低及肠粘膜中 MDA含量升高作用;能拮抗
烫伤致大鼠拮抗烫伤抑制大鼠脾脏淋巴细胞转化增
殖 、NK细胞活性 ,并且拮抗烫伤引起的血清 IL-6水
平增加作用。提示三叶青提取物对烫伤引起的全身
和肠道局部免疫紊乱有纠正作用 。
参 考 文 献
[ 1] 中国医学科学院药物研究所.中药志(第二册).北京:
人民卫生出版社 , 1984:21.
[ 2] 江苏新医学院 .中药大辞典 .上海:上海人民出版社 ,
1977:2123.
[ 3] 黄真 , 毛庆秋 ,魏佳平 .三叶青提取物抗炎 、镇痛及解热
作用研究 .中国新药杂志 , 2005, 14(7):861-864.
[ 4] 李磊 .创伤后免疫功能的双向性改变及其研究新进
展 .国外医学免疫学分册 , 1998, 21(3):157.
[ 5] 余斌 , 尤忠义 ,汪仕良 , 等.谷氨酰胺对严重烧伤小型香
猪肠道免疫功能的影响 .中华整形烧伤外科杂志 ,
1996, 12(2):98-100.
[ 6] 徐瑶 , 卞国武 ,吴敏毓 .黄芪注射液对大鼠烫伤后免疫
功能的影响 .中成药 , 2000, 22(7):494-496.
(2005-12-01收稿)
·955·中药材第 29卷第 9期 2006年 9月