全 文 ：153※生物工程 食品科学 2009, Vol. 30, No. 05
Cr(III)在钝顶螺旋藻中的生物富集及其
对钝顶螺旋藻生长的影响
许文涛，王 颖，罗云波，李元飒，张方方，黄昆仑*
(中国农业大学食品科学与营养工程学院，北京 100083)
摘 要：本实验研究了钝顶螺旋藻对Cr(III)的吸收和生物转化以及Cr(III)对钝顶螺旋藻的生长影响，用ICP-MS-
HPLC对无机Cr(III) 经钝顶螺旋藻吸收后的存在价态进行了分析。结果表明，钝顶螺旋藻对Cr(III)具有良好的富集
和生物转化能力，在本实验中总铬富集量可达到173.17mg/g，有机化程度可高达96.99%。ICP-MS-HPLC分析结果
表明没有有毒的Cr(VI)的产生。此外，干重测定结果显示低浓度的Cr(III) (< 234.38×10-6g/g)促进钝顶螺旋藻的生
长，高浓度的Gr(Ⅲ)(> 234.38×10-6g/g)则抑制共生长，并导致钝顶螺旋藻形态异常。在一定范围内钝顶螺旋藻能
高效富集Cr(III)，可作为安全营养的保健食品；钝顶螺旋藻抗高Cr(III)压，吸附高浓度Cr(III)的能力使其可用于环
境中Cr(III)污染的去除。
关键词：钝顶螺旋藻；Cr(III)； CP-MS-HPLC；生物富集；生物转化
Bioaccumulation of Cr (III) in Spirulina platensis nd I s Effects on Cultivation of Spirulina platensis
XU Wen-tao，WANG Ying，LUO Yun-bo，LI Yuan-sa，ZHANG Fang-fang，HUANG Kun-lun*
(College of Food Science and Nutritional Engineering, China Agricultural University, Beijing 100083, China)
Abstract ：In this study, the bioaccumulation and biotransformation of Cr (III) in Spirulina platensi were a lyzed by ICP-
MS-HPLC, and the effects of Cr (III) on the growth of Spirulina plate si were also investigated. The results showed that
Spirulina platensis may effectively accumulate and transform Cr (III), and the total Cr enrichment amount and organic degree
of Crreach 173.17 mg/g and 96.99%, respectively. The ICP-MS-HPLC analysis also indicated that no toxic Cr (VI) is generated
during the culture process. Moreover, the determination results of dry weight and morphology revealed that the low concentration
(less than 234.38 ×10-6 g/g) of Cr (III) may promote the growth of Spirulina pla ensis, but high concentration (more than
234.38 ×10-6 g/g) of Cr (III) not only inhibits the growth of Spiru ina platensis but lso results in its abnormal modality. In
conclusion, Sp rulina platensis can effectively accumulate Cr (III) in a certain range and be taken as nutritional and safe food for
the supplement of Cr (III). Furthermore, it may be used to eliminate the environmental pollution of Cr (III) due to its abilities
of anti-high-pressure and absorption capacity to high concentration of Cr (III).
Key words：Spirulina platensis；Cr (III)； CP-MS-HPLC；bioaccumulation；bio ra sformation
中图分类号：Q949.22 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2009)05-0153-05
收稿日期：2008-04-01
基金项目：国家“863”计划项目(2006AA10Z440)；农业部“948”计划项目(2007-Z8)
作者简介：许文涛(1979-)，男，讲师，博士，研究方向为食品安全。E-mail：xuwentao1111@sina.com
*通讯作者：黄昆仑(1968-)，男，教授，博士，研究方向为食品安全。E-mail： hkl009@163.com
Cr(Ⅲ)是人体必需的微量元素，是正常糖脂代谢所
不可缺少的。 Schwarz和Mertz于1959年首次从啤酒酵
母中提取出含有铬的葡萄糖耐量因子(GTF)，并证实Cr
(Ⅲ)是GTF的重要活性成分；Cr(Ⅲ)通过GTF协同和增
强胰岛素的作用来影响糖类、脂类、蛋白质及核酸代
谢[1-2]。Cr(Ⅲ)能增加胆固醇的分解和排泄，它的缺乏可
使脂肪代谢紊乱，出现高血脂症，特别是高胆固醇血
症，诱发动脉硬化和冠心病[3-4]。而Cr(VI)具有较大毒
性，研究发现它具有免疫毒性、神经毒性、生殖毒性、
遗传毒性及致癌性[5]。
螺旋藻含有丰富的蛋白质及多种生理活性成分如R-
胡萝卜素、Y-亚麻酸、藻蓝蛋白、多糖等，具有极
强的保健功能；但螺旋藻中的某些微量元素如Cr(Ⅲ)的
含量却极微(只有6.32mg/kg)。人体对无机铬的吸收率低
2009, Vol. 30, No. 05 食品科学 ※生物工程154
于1%，有机铬吸收率高达10%～25%。藻类生物富集
是一种新兴的生物技术手段，富铬螺旋藻作为补铬制
剂，其铬的吸收率和生物利用度远高于无机铬[6]。
无机Cr(III)经螺旋藻富集后，铬的营养作用和安全
性主要依赖于它的存在形态和补充量[7]。Cr形态影响其
营养价值和吸收利用，同时对螺旋藻自身的生长和营养
成分，生物活性成分的含量也有影响。因此，研究Cr
(Ⅲ)在螺旋藻中的生物转化对开发富Cr(Ⅲ)功能性食品的
安全性和营养性很有必要，用ICP-MS-HPLC快速准确地
分离检测螺旋藻中Cr(Ⅲ)和Cr(VI)是关系到食品安全的新
技术；而探讨不同浓度Cr(Ⅲ)对螺旋藻的生长影响有利
于活性螺旋藻用于Cr(Ⅲ)富集和Cr(Ⅲ)污染处理。
1 材料与方法
1.1材料与试剂
钝顶螺旋藻( Spirulina platensis ) (FACHB-794)由中
科院武汉水生所提供。
Milli-Q 水(18MΩ) 美国Millipore公司；四丁基氢
氧化铵(TBAH)和乙二胺四乙酸(EDTA) 美国Aldrich
Chemical公司；甲醇、稀硝酸和氢氧化铵 美国Fisher
Scientific公司；Cr(III) (1000mg/L) PerkinElmer公司；
Cr(VI) (1000 mg/L) 美国Spex Certiprep公司。
1.2仪器与设备
Universal 32R冷冻高速离心机 Hettich Zentrifugen
公司；ELAN DRC III ICP-MS(等离子体耦联质谱)、Se-
ries 200 Binary HPLC Pump二元泵和Part No. 02580191 C8
packing PerkinElmer公司；电热板 苏州威尔公司；
Model JY 98-3超声波破碎仪 宁波海曙科生超声设备有限
公司；Modelu-LH100HG显微镜 Olympus公司。
1.3钝顶螺旋藻及其富铬培养
采用Zarrouk 培养基[8]培养钝顶螺旋藻。
在250ml三角瓶中加入标准培养基100ml，接种对数
生长期的藻种(OD600nm=0.10)。培养温度为30℃，pH8.5～
9.5，光照度4000lx，光照时间24 h/d。 从接种时起，
连续6d在每天的同一时间，于培养瓶中等量加入含
CrCl3·6H2O 100mg/ml的溶液，使Cr(Ⅲ)总加入量分别
达58.59、117.18、234.38、468.75×10-6g/g，每组设
3个重复，以不加Cr(Ⅲ)为对照，继续培养至采收。
1.4钝顶螺旋藻对铬的富集总量和有机化程度
6d富集结束后收集细胞，5000r/min离心10min。藻
体用Milli-Q 水反复洗涤3次，除去未被吸附的残余铬及
培养基，收集藻体。沥干后，真空冷冻干燥得螺旋藻
干粉。
藻粉中总铬及无机铬含量用ICP-MS测定。
总铬测定：取各组收集的干燥藻粉4mg加混酸
HNO3:HClO4(4:1)5ml，电热板上180℃加热消化6h，冷
却后过滤，用Milli-Q水定容，稀释后上机检测。
有机Cr测定：取收集的各组干燥藻粉称取2mg，加
Milli-Q水5ml，超声破碎仪上破碎30×5s(间歇为4s，
功率为150W)，破碎离心收集上清液，稀释10倍上ICP-
MS检测。有机铬的含量用总铬和无机铬之差表示，转
化为Cr的有机化百分比含量。
1.5铬在钝顶螺旋藻中的价态分布
采用ICP-MS-HPLC分析螺旋藻中铬的存在价态。传
统的原子吸收、发射光谱、等离子体质谱等虽然对金
属元素能达到快速灵敏的检测，但无法实现不同金属价
态、化合状态的分离。 ICP-MS-HPLC兼具HPLC的快速
良好的选择分离性质和ICP-MS检测的高度灵敏度，能
同时准确定性定量测量多种元素不同同位素等优点[9-10]，
已投入于金属元素的形态分离和检测研究中。本实验探
索了螺旋藻中的Cr(Ⅲ)和Cr(VI)的分离。
HPLC及ICP-MS条件：使用HPLC Pump二元泵，
分离所使用的是3cm长的3μm C8 packing。流动相由
1mmol/L四丁基氢氧化铵(TBAH)和0.5mmol/L乙二铵四乙
酸(EDTA)及5%甲醇组成。使用稀硝酸和氢氧化铵调
pH7.2。
1.6富铬钝顶螺旋藻的干重及形态变化
收集洗涤螺旋藻，放入烘箱内干燥至恒重后称量得
干重。在螺旋藻富集Cr(Ⅲ)期间，每日取新鲜藻液在显
微镜下观察藻细胞的形态变化。
2 结果与分析
2.1钝顶螺旋藻中总富铬量及有机化程度
Cr(Ⅲ)总加入量
(×10-6g/g)
CK 58.59 117.18234.38 468.75
总铬量
0.104±0.2111.46±0.3052.26±0.40122.13± .66173.17＋4.21
(mg/g)
有机Cr
69.23 93.60 94.60 96.99 95.51
含量(%)
表1 螺旋藻中总Cr和Cr有机化程度
Table 1 Contents of total Cr and organic Cr in Spirulina platensis
OR
经过6d的Cr(Ⅲ)富集后发现螺旋藻对Cr(Ⅲ)具有
高度的富集能力。从表1可以看出，随着螺旋藻中Cr
(Ⅲ)添加浓度的增加，藻粉的富铬浓度也提高。在实
验组中最大的铬富集效果达到173.17mg/g，与对照组
的0.104mg/g相比表明螺旋藻对Cr(Ⅲ)具有很高的富集能
力及耐Cr(Ⅲ)高压能力。 Cr(Ⅲ)在螺旋藻中的有机化程度
也随着富Cr(Ⅲ)浓度的增加而提高，且均达到90%以
上，比对照组高出将近20%，表明Cr(Ⅲ)经螺旋藻吸附
后不仅经过了物理吸附，更多的是生物吸附和参与生物
转化的主动运输。据报道金属元素在藻类富集过程中，
155※生物工程 食品科学 2009, Vol. 30, No. 05
生物吸附与主动运输是主要途径，约占了总富集量的
80%，而物理吸附、被动扩散、表面沉积等只占了极
少一部分[11]。因此上述结果表明螺旋藻对Cr(Ⅲ)具有高
度的富集和生物转化水平。
当Cr(Ⅲ)浓度达到468.75×10-6g/g时，富集效果最
好，而有机化程度不是最大。在收集藻细胞时，发现
这个组的藻细胞表面附着蓝灰色的物质，结合HPLC-IP-
MS图谱分析结果推测应是Cr与细胞表面分子结合形成
的新化合物，沉积下来，使得细胞干重变大；这种现
象也许是防止过度Cr(Ⅲ)进入细胞内的一种方式，耐高
浓度Cr(Ⅲ)的一种机制。此外此组藻丝在收集时发现不
少细胞死亡，导致Cr有机化程度降低，同时使得Cr(Ⅲ)
的富集量增大。有文献表明，死藻比活藻更容易富集
Cr(Ⅲ)：Pirszel等[12]证实死藻比活藻拥有更高的吸附能
力。新鲜的藻细胞膜具有选择透过性，只允许适度大
小的分子和离子通过。对于死细胞而言，大量的胞内
功能基团释放，表面积也增大，使得离子更容易通过。
2.2Cr(Ⅲ)在钝顶螺旋藻中的存在价态
按上述方法收集取各组藻细胞后，留取上清培养
基和细胞。细胞经超声波破碎后用Milli-Q水洗涤并稀
释，将相应的上清培养基也稀释，并用流动相平衡后
分别上ICP-MS-HPLC检测，并与标准Cr(Ⅲ)、Cr(VI)
混合液结果比较。图1显示标准试剂中Cr(Ⅲ)和Cr(VI)
分别在1.1min和1.7min左右出现，两者实现了快速较好
的分离(Cr(Ⅲ)和Cr(VI)的判别根据单标图对比，未显
示)。样品分析(以富Cr(Ⅲ) 468.75×10-6g/g为例)结果如
图2、3所示，在富Cr(Ⅲ)螺旋藻培养基上清液和藻细
胞破碎液中，都没有Cr(VI)出现，仍然主要以Cr(Ⅲ)形
式存在。此外在上清液和细胞破碎液的HPLC-ICP-MS图
谱中均出现一个未知的小峰，估计是细胞表面附着的蓝
灰色Cr物质，在对照组中和低浓度组均没有此现象。这
种新的灰兰色化合物可能是螺旋藻防御高浓度Cr(Ⅲ)压力
的一种机制，类似外排，阻止过度的Cr(Ⅲ)吸收进入细
胞内干扰其正常生长和代谢。 藻类细胞结构和生理上的
特征为其免受重金属毒害提供了第一道防御屏障——外
排作用(即胞壁上的生物大分子与重金属结合的结果，
形成的有机一金属化合物具有较高的稳定系数，可束缚
有毒重金属离子，阻止其进入细胞)。有人指出小球藻
(Chlorella sp)对金属的耐受，外排起到主要作用[13]。
在HPLC-ICP-MS图谱中没有发现Cr(VI)出现，表明
Cr(III)在螺旋藻内并没有转化成有毒的Cr(VI)。Cr(Ⅲ)在
自然界氧化成Cr(VI)是不容易的。 Eary等[14-18]研究发现 Cr
(VI)/Cr(Ⅲ)的氧化还原电位较高，在自然条件下只有少
数的氧化剂能将Cr(III)氧化。在自然界中Cr(Ⅲ)向Cr(VI)
的转换需要腐植酸等游离分子的协调，在如Mn(Ⅲ、IV)
高氧化剂存在才时能实现。Cr(Ⅲ)未向Cr(VI)转化说明Cr
(III)经螺旋藻富集后不会产生Cr(VI)的毒性，作为食品不
会给人体带来Cr(VI)毒性危害。
A.Cr(Ⅲ)；B.Cr(Ⅵ)。
图1 混标Cr(Ⅲ)和Cr(VI)的HPLC-ICP-MS图谱
Fig.1 HPLC-ICP-MS chromatogram of mixed standard Cr(Ⅲ)
and Cr(VI)
12440.57
9796.96
7153.34
4509.73
1866.11
－777.50
A
强
度
(
c
p
s
)
时间(min)
0.00.501.001.502.002.503.00
B
2.3Cr(III)对钝顶螺旋藻生长的影响
2.3.1钝顶螺旋藻干重情况
从图4可以看出，当Cr(Ⅲ)浓度在0～117.18× 0-6g/g
范围内时，螺旋藻的干重随着富Cr(Ⅲ)浓度的提高而增
A.未知Cr化合物；B.Cr(Ⅲ)。
图2 富Cr(III) (468.75×10-6g/g) 螺旋藻细胞培养基上清HPLC-ICP-
MS图谱
Fig.2 HPLC-ICP-MS chromatogram of chromium speciation in
supernatant of Spirulina platensis medium with Cr(III) of 468.75×
10-6 g/g (final concentration)
28359.03
22228.33
16097.64
9966.94
3836.24
－2294.45
A
时间(min)
0.00.501.001.502.002.503.00
B
强
度
(
c
p
s
)
A.未知Cr化合物；B.Cr(Ⅲ)。
图3 富 Cr(Ⅲ) (468.75×10-6g/g)螺旋藻细胞水提物 HPLC-ICP-
MS 图谱
Fig.3 HPLC-ICP-MS chromatogram of chromium speciation in
water extract of Spirulina platensis with Cr(Ⅲ) of 468.75×10-6 g/g
70713.31
55337.31
39961.32
24585.33
9209.33
－6166.66
A
时间(min)
0.00.501.001.502.002.503.00
B
强
度
(
c
p
s
)
2009, Vol. 30, No. 05 食品科学 ※生物工程156
加。当Cr(Ⅲ)浓度为234.38×10-6g/g时螺旋藻的干重下
降。这表明，在低浓度范围内Cr(Ⅲ)促进螺旋藻的生
长，高浓度时抑制。当Cr(Ⅲ)浓度高达468.75×10-6g/g
时亦发现藻细胞表面富集大量蓝灰色状物质，估计是Cr
(III)与细胞表面的分子官能团结合形成的复合物或Cr
(Ⅲ)价态转换后形成的新物质，导致藻细胞干重突然增
高。而且前已叙及这组富Cr(Ⅲ)螺旋藻在收集时，发
现不少细胞死亡，细胞死后由于细胞壁的破碎和相应
官能团的暴露使其富集Cr(Ⅲ)的能力也随着加大，干重
随之加大。
A.对照组；B.富Cr(Ⅲ)58.59×10-6g/g藻粉；C.富Cr(Ⅲ)117.18×10-6g/g藻
粉；D.富Cr(Ⅲ)234.38×10-6g/g藻粉；E.富Cr(Ⅲ)468.75×10-6g/g藻粉。
图4 Cr(Ⅲ)对螺旋藻干重的影响
Fig.4 Effects of Cr (Ⅲ) on dry weight of Spirulina platensis
140
120
100
80
60
40
20
0
干
重
(
m
g
)
A B C D E
2.3.2Cr(III)对钝顶螺旋藻生长曲线的影响
从图5可以看出，在接种后的前3d，添加Cr(III)的
各组螺旋藻相对于对照组，相应的OD560nm大的多。当
对照组还处于对数生长期时，其他组(234.38×10-6g/g)已
经进入稳定期。以富Cr(III) 234.38×10-6g/g螺旋藻细胞生
长曲线为例，在第4、5d时曲线已经趋于水平，表明螺
旋藻细胞生长进入稳定。至于富Cr(III) 468.75×10-6g/g
组，生长曲线在第3d时已达到最高点，形成一个高峰，
接着突然曲线下降，最后又有一点回升(最后的曲线回
升估计是蓝灰色化合物影响OD560mm所致，该组的藻细
胞表面粘有不少蓝灰色化合物)。比较各组藻细胞的生
长曲线趋势可知，高浓度的Cr(III)对螺旋藻的生长有抑
制作用，缩短其生长对数期，然而低浓度的Cr(III)促进
螺旋藻的快速生长。
通过各组螺旋藻细胞的生长曲线和干重结果比较可
知，Cr(III)对钝顶螺旋藻的生长有双重影响。即低浓度
的Cr(III)促进藻细胞的快速分裂和生长，而高浓度的Cr
(III)则对其生长产生抑制作用。
2.4高浓度Cr(III)对螺旋藻自身生长的抑制
在各组螺旋藻富集Cr(III)的过程中，每日取藻细胞液
在显微镜下观察，发现当Cr(III)浓度逐渐升高(≥234.38×
10-6g/g)时开始表现出对螺旋藻细胞形态的不良影响，如
发生细胞膨胀、收缩、异常断裂、内容物释放，分
别如图6B～D所示。这些结果表明过高浓度的有益Cr
(III)也会对螺旋藻产生累积毒性效果，导致螺旋藻异样
的死亡，破坏其营养价值和生理功能，进而对食品产
生安全影响。因此，上述结果也说明在用活的钝顶螺
旋藻富集补充Cr(III)时应该在一定范围内，本实验发现
在117.18× 0-6g/g以内均对螺旋藻生长和Cr(III)富集产
生促进作用。
图6 高浓度Cr (III)(≥234.38×10-6g/g)对螺旋藻细胞的不良影响
(X20倍)
Fig.6 Harmful effect of Cr (III) (more than or equal to 234.38× 10-6 g/g)
on morphology of Sprirulian platensis(× 20)
A.对照组细胞 B.细胞异常膨胀收缩
D.内容物大量释放C.细胞异常断裂
3 结 论
本实验结果表明，钝顶螺旋藻对Cr(III)具有良好的富
集能力和生物转化效果，而且本实验开发了ICP-MS-HPLC
联用技术快速准确分离Cr(III)、Cr(VI)的方法，将其用于
钝顶螺旋藻中富集Cr(III)的价态检测，未发现有毒物质Cr
(VI)被转化。同时也证明低浓度的Cr(III)对钝顶螺旋藻生长
具有促进作用，而高浓度Cr(III)则产生抑制作用。
A.富Cr(III) 468.75 ×10-6g/g (终浓度)的螺旋藻；B.富Cr(III) 234.38
×10-6g/g螺旋藻；C.富Cr(III) 117.18×10-6g/g螺旋藻；D.对照组。
图5 Cr(III)对螺旋藻生长曲线的影响
Fig.5 Effects of Cr (III) on growth curve of Spirulina platensis
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0
O
D5
6
0
n
m
1 2 3 4 5 6 7 8
时间(d)
A B C D
157※生物工程 食品科学 2009, Vol. 30, No. 05
参考文献：
[1]MERTZ W. Chromium in human nutrition[J]. Journal of Nutrition,
1993, 123: 626.
[2]SUN Y, RAMIREZ J, WOSKI S A, et al. The binding of trivalent
chromium to low-molecular weight chromium-binding substance
(LMWCr) and the transfer of chromium from transferring and chromium
picolinate to LMWCr[J]. Journal of Biological Inorganic Chemistry,
2000(5): 129-136.
[3]陈巧珠. 微量元素铬与人体健康[J]. 宁德师专学报: 自然科学版, 2003,
15(3): 244-246.
[4]李静萍, 杜亚利. 铬对人体的作用[J]. 甘肃科技, 2003, 19 (12): 118-
119.
[5]金念组, 王心如. 铬化学物的毒性及其生物学监测指标研究进展[J].
工业卫生与职业病, 1999, 25(6): 382-384.
[6]曾文辉, 何燕宇, 万云鹏, 等. 钝顶螺旋藻生物富集铬及藻体中铬的
存在形态研究[J]. 广东化工, 2006, 33(7): 37-39.
[7]ANDERSON R. Chromium as an essential nutrient for humans[J].
Regulatory Toxicology and Pharmacology, 1997, 26(10): 35-41．
[8]WATANABE Y, NOUE J, HALL D O. Photosynethetic performance of
a helical tubular photobioreactor incorporating the cyanobacterium
Spirulina platensis[J]. Biotechnology and Bioengineering, 1995, 47:
261-269.
[9]CAEMARA C, CORNELIS R, QUEVAUVILLER P. Speciation of
chromium in waste water using ion chromatography inductively coupled
plasma mass spectrometry[J]. Trends in Analytical Chemistry, 2000,
19: 189.
[10]PPNCE DE LEON C A, MNTES-BONTES M, CARUSO J A. Induc-
tively coupled plasma-mass spectrometry for the determination of ele-
me ts and elemental species in food: a review[J]. Chromatogr A, 2002,
974(1/2): 1-12.
[11]李志勇, 郭祀远, 李琳, 等. 藻类富集微量元素的机理研究[J]. 华南
理工大学报, 1998, 26 (2): 34-35.
[12]PIRSZEL J, PAWLIK B, SKOWRONSKI T. Cation-exchange capacity
of algae and cyanobacteria: parameter of their metal sorption abilities[J].
Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology, 1995, 14: 319-
322.
[13]FOSTER P L. Copper exclusion as a mechanism of heavy metal toler-
ance in a green algae[J]. Nature, 1977, 269: 322-323.
[14]EARY L E, RAI D. Kinetics of chromium(III) oxidation to chromium
(VI) by reaction with manganese dioxide[J]. Environmental Science and
Technology, 1987, 21: 1187-1193.
[15]JAMES B R, BARTLETT R J. Mobility and bioavailability of
chromium in soil[M]// NRIAGU J O, NIEBOER E. Chromium in
n tural and hum e vironments. New York: Wiley Interscience,
1988: 265-305.
[16]RCHARD F C, BOURG A C M. Aqueous geochemistry of chromium:
a review[J]. Wa er Research, 1991, 25: 807-816.
[17]JAMES B R. The challenge of remediating chromium contaminated soil
[J]. Environmental Science and Technology, 1996, 30: 248-251.
[18]MAKINO T, KAMEWADA K, HATTA T, et al. Determination of
optimal chromium oxidation conditions and evaluation of soil oxidative
activity in soils[J]. Geochemistry Exploration Environment Analysis,
1998, 64 (1/3): 435-441.