全 文 ：第 12卷　第 2期 华　夏　医　学 V ol. 12 No. 2
1999年 4月 ACTA　 MEDICINAE　 SIN ICA Apr. 1999
采用木菠萝凝集素检测胃液中胃蛋白酶的临床研究
罗　志 1　谢翠英 2　周素芳 3
(广西柳州卫校生理教研室 1 广西柳州市 545005 柳州铁路中心医院 2　广西医科大学生化教研室 3 )
摘要　目的: 探讨胃蛋白酶在胃部疾病中的作用。方法: 采用 HRP标记 jacalin,通过 ELISA法检测各种胃病患者胃液
中的胃蛋白酶。 结果: 胃蛋白酶在正常组 ( 15例 )、胃炎组 ( 30例 )、十二指肠溃疡组 ( 30例 )、胃溃疡组 ( 30例 )及胃癌组
( 10例 )中含量无显著性差异 ,但胃液 pH < 3的胃蛋白酶含量明显高于 pH> 4的酶含量 ,表明胃酸增加 ,胃蛋白酶的
分泌亦增加 ,但胃蛋白酶与胃部疾病的发生关系不密切。 结论: 胃粘膜屏障的局部缺陷使之对胃蛋白酶抵抗力下降 ,
可能与消化性溃疡的发生关系更为密切。
关键词　木菠萝凝集素 ;酶联免疫测定 ;胃液 ;胃蛋白酶
中图分类号　 Q55
Clinic Study of the Gastric Juice Pepsin Assay by Enzyme-labeled Jacalin /Luo Zhi∥ Liuzhou Health School. Guangxi
(Liuzhou545005) /Xie Cuiying∥ Liuzhou Railway Center Hospital /Zhou Sufang∥ GuangxiMedical University
Abstract　 Objectiv e: T o study th e effects o f Gastrie Juice pepsin on ga st ric disease. Me thods: Th e pepsin contents o f
ga stric juice w ere dete rmined by Jaca lin-HRP ELISA assay. Result: The re were no significant differences in the pepsin
contents among the normal contro ls and patients wi th va rious gastric diseases including ga stritis, duodenal ulcer , pep-
tic ulcer and ca rcinoma o f stomach. But the pepsin contents of the gastric secre tions w ith p H < 3 we re significantly
high er than tho se with pH> 4. Conclusion: The resistance to the ga stric juice pepsin is decr eased by th e local defec t o f
the ga stric mucus ba rrier. it may be cor relativ e with ga stric ulce r.
Key words　 jaca lin; EL IS A; ga stric juice; pepsin
　　凝集素的特性之一是可以和糖蛋白特异结合 ,而研究表
明木菠萝凝集素 ( ja ca lin)可以和胃蛋白酶结合且亲和力强 [1 ]。
由于胃蛋白酶、胃酸等被认为是产生消化性溃疡的攻击因子 ,
因此笔者采用 HRP标记 jaca lin,通过夹心酶联法检测各种胃
液中胃蛋白酶的含量 ,以便验证胃蛋白酶在各种胃部疾病中
的地位及作用。
1　材料与方法
1. 1　材料
1. 1. 1　 Jacalin　从木菠萝种子中分离、纯化木菠萝凝集素 ,广
西医科大学生化教研室提供电泳纯 [2 ]。
1. 1. 2　胃液　收集胃镜确诊患者的空腹胃液 , - 20℃保存。
1. 1. 3　试剂和仪器　 HRP为上海丽珠东风生物技术有限公
司产品 ;底物 TM B, A、 B液 ,终止液为华美公司产品 ;电泳纯
胃蛋白酶为 sigma产品 ;酶标仪为美国 Bio-TEK公司产品 ;酶
标板为深圳南园生化试剂厂产品。
1. 2　方法
1. 2. 1　 Ja ca lin-HRP的制备　按郭春祥的 HRP标记抗体的
过碘酸钠法 [3]稍加改进 ,标记物过 sephardexG200柱 ,收集含
jaca lin-HRP的洗脱峰混合 ,加甘油至 50% ,分装后于 - 20℃
贮存备用。
1. 2. 2　制作胃蛋白酶标准曲线　 Jacalin-HRP测定胃蛋白酶
的作用模式为: jaca lin-胃蛋白酶 -Jacalin-HRP,以 5ug /ml Ja-
calin包被酶标板 0. 1ml /孔 , 4℃过夜 , PBS吐温洗板 3次 ,加
入稀释成不同浓度的标准胃蛋白酶 , 37℃ 30min,洗板 ,加入 1 /
1000的 Jacalin-HRP,洗板 ,加含有底物 TMB的 A、 B液各 1
滴 , 37℃ 30min,加终止液 1滴 ,混匀测 A450 ,每次同时作空白
及阴性对照 ,并进行重复性实验。
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作者简介:罗志 ,男 , 1963年 10月出生 , 1986年 7月毕业于广西医学院 ,现任广西柳州卫校生理学讲师 ,广西生理科学会会员。
1. 2. 3　 Jacalin-HRP对胃液中胃蛋白酶的检测
各种胃液经解冻后 3000rpm离心 15min,取上清液进行
检测并测定其 p H值。 测定胃蛋白酶的作用模式为 Jacalin-胃
液 -Jacalin-HRP,条件及方法和标准曲线制作保持一致 ,每次
同时作空白及阴性对照。
2　结果
2. 1　各组胃病患者胃液中胃蛋白酶含量比较
将胃蛋白酶稀释成 0. 1ug /ml至 5ug /ml,据其吸光度 A450
与浓度关系制作标准曲线 ,将酶联法测定的各种胃液胃蛋白
酶的 A450代入标准曲线 ,求出酶的含量。各组数据 x-± s按组间
进行多个样本均数间的两两比较 ,采用 PEM S统计软件包。统
计分析表明 ,正常组 15例、胃炎组 30例、十二指肠溃疡组 30
例、胃溃疡组 30例及胃癌组 10例中 ,各组胃蛋白酶含量无明
显差异 ,见表 1。
表 1　胃病患者胃液中胃蛋白酶含量 ( x-± s　ρB /g· L- 1 )
组　　别 例　　数 含　　量
正常 15 1. 275± 0. 775
胃炎 30 0. 954± 0. 48
十二指肠溃疡 30 1. 125± 0. 856
胃溃疡 30 1. 004± 0. 783
胃癌 10 1. 319± 0. 985
　　　　　各组间 P值均 > 0. 05
2. 2　 p H对胃液胃蛋白酶含量的影响
将胃液 pH值 1. 5～ 3的作一组 ,而 pH> 4的作另一组采
用 t检测 ,结果 pH值在 1. 5～ 3的胃蛋白酶含量明显高于 pH
> 4的一组 ,见表 2。
表 2　胃液 pH值对胃蛋白酶含量影响 ( x-± s　ρB /g· L- 1 )
组　别 pH值 例　数 含量
1 1. 5～ 3 83 1. 236± 0. 704
2 > 4 32 0. 723± 0. 455
　　　　 t= 2. 078　　 P < 0. 05
3　讨论
目前国内外对胃液中胃蛋白酶的检测大多数是采用变性
血红蛋白法测定其活性 ,而对胃蛋白酶含量的检测未见报道。
我们采用 Jacalin标记上 HRP,测定胃液中胃蛋白酶 ,该方法
简单易行 ,重现性好 ,因此用 Jacalin-HRP来检测胃液中的胃
蛋白酶含量是一种可行的方法。
胃蛋白酶长期以来一直被认为和慢性消化性溃疡有关 ,
胃液提供一个合适的 pH值环境给胃蛋白酶进行消化作用 ,胃
蛋白酶在 p H值等于 2时活性大 , p H值在 5以上无活性 [4]。临
床上对胃病患者胃液中胃蛋白酶活性测定后认为十二指肠溃
疡患者胃液中胃蛋白酶活性升高 ,而慢性胃炎患者酶活性减
弱 [5 ]。笔者实验表明胃液 pH值降低 ,胃蛋白酶含量增加 ,但正
常组与疾病各组间胃蛋白酶含量均无明显差别 ,即酶的活性
与含量表现不一致。 可能的原因是消化性溃疡是一种多因素
疾病 ,胃蛋白酶、胃酸、胆汁等是溃疡的攻击因子 ,而胃粘液、
血流、细胞更新等是防御因子 ,只有攻击因子与防御因子两者
发生失调才会引起溃疡 [6 ]。 虽然我们测定各种胃病患者胃粘
膜细胞分泌的胃蛋白酶原在胃液中含量基本一致 ,但不同胃
部疾病其胃内 pH值、胃粘膜屏障等因素不同 ,可以导致对酶
原激活程度不一 ,导致酶活性不一样 ,从而表现出酶含量与酶
活性的不一致。 因此认为胃蛋白酶虽然是消化性溃疡的攻击
因子之一 ,但胃酸增加或胃粘膜屏障等保护性因素的减弱与
溃疡发生密切相关 ,如果粘膜的保护性屏障在某个地方有缺
陷 ,即使胃蛋白酶含量正常亦可发生消化作用引起溃疡。我们
将进一步测定胃液中胃蛋白酶活性 ,并对胃内不同 pH情况
下 ,胃蛋白酶的含量及活性作进一步比较。
参 考 文 献
1　周素芳 ,吴耀生 ,曾麒燕 ,等 .采用酶标凝集素检测特异的糖蛋白 .
广西医科大学学报 , 1997, 14( 4): 58～ 60
2　周素芳 ,周德义 ,张成禄 ,等 .木菠萝凝集素的纯化与性质研究 .广
西科学 , 1996, 3( 1): 35～ 38
3　郭春祥 ,郭锡琼。 介绍一种简单、快速高效的辣根过氧化物酶标记
抗体的过碘酸钠法 .上海免疫学杂志 , 1983, 3( 2): 97～ 100
4　 Douglas. W.消化性溃疡的病因与治疗 .临床消化病杂志 , 1993, 5
( 1): 21～ 23
5　叶应妩 ,李健斋 ,王玉琛主编 .临床实验诊断学 .北京: 人民卫生出
版社 , 1989. 1495～ 1496
6　王苑本 .消化性溃疡研究现状 .新消化病学杂志 , 1996, 4( 3): 123～
124
(收稿　 1999- 01- 13)
[责任编辑　王慧瑾 ]
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