全 文 ：龙牙 木组织培养与不定芽再生植株
李建民1 ,李喜文2 ,李福安3 ,张德炎4 ,邢　苗5
(1.青海师范大学生物系 ,青海 西宁　810008;2.东北师范大学 遗传与细胞研究所 ,吉林 长春　130024;
3.青海医学院 中医系 ,青海 西宁　810001;4.咸宁教育学院 ,湖北咸宁　437100;5.深圳大学 ,广东 深圳　518060)
摘　要:以龙牙 木 Aralia elate(Miq.)Seem 的幼嫩茎 、叶为外植体 ,在含有 0.5mg LNAA+0.5mg LBA培养基上分别添加0.5mg
L2 , 4-D 、2mg L2 , 4-D 时 ,茎 、叶外植体出愈率最高.愈伤组织转入 MA+(1-3)mg LBA+(0-0.5)mg LNAA后 ,形成了密布白
色霜块状 、绿色瘤状和黄褐色颗粒状三种类型的愈伤组织.其中 ,白色霜状愈伤组织在适宜的条件下可产生不定芽.生根培养
基为 1 2MA 无激素培养基.
关键词:龙牙 木;愈伤组织类型;不定芽;再生植株
中图分类号:Q943.1　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1001-7542(2004)04-0069-04
龙牙 木(Aralia elate(Miq.)Seem)系五加科(Araliaceae)多年生乔本药用植物 ,又称刺老鸦 、鹊不
踏(《本草纲目》);以根及树皮入药 ,能补气 、活血 、祛风 、利湿 、止痛 ,主治慢性病气虚无力 、神经衰弱 、糖
尿病 、风湿症肢节作痛等病症[ 1] .其幼嫩茎叶作为有名的山菜 ,广受我国及东南亚国家人们的喜爱.本文
在龙牙 木体细胞胚胎发生再生植株[ 2] 基础上 ,作进一步报道.
1　材料和方法
供试材料为野生龙牙 木 ,采自吉林地区山区.秋末取落叶枝条 ,在 23-25℃室内水浸 ,待其休眠
芽萌发出幼嫩枝叶后剪下 ,用 70%酒精浸泡 30s ,然后用 0.1%HgCl2 溶液灭菌 5min ,无菌水冲洗 3 -4
次 ,在无菌条件下将幼枝 、叶切成 4mm 左右的段或片 ,分别接入备好的愈伤组织诱导培养基上.基本培
养基为MA(MA大量元素[ 3] +MS 微量元素 +MS 有机物质)培养基 ,附加2%蔗糖 、300mg L 水解酪蛋
白 、0.7%琼脂 , pH5.8-6.0 ,添加激素为 2 ,4-D 、BA 、NAA ,其浓度组合见下文图表.培养温度为 25℃,
每日 16h光照下培养 ,光照强度为 1500-2000lx .
2　结果与讨论
2.1　愈伤组织的诱导
外植体培养 7天后 ,茎切段两端切口开始膨大 ,(图版 Ⅰ-1);9天后 ,叶脉切口及叶片切口先后肿胀
(图版 Ⅰ-2),开始形成愈伤组织.
2.1.1　不同外植体对愈伤组织发生的影响
在表1MA +0.5-3mg L2 ,4-D +0.5mg LNAA +0.5mg LBA的同一培养基上 ,茎愈伤组织诱导率
分别为 85%、80%、65%;叶愈伤组织诱导率分别为 73.5%、78%、50%.说明相同浓度 2 ,4-D 对不同外
植体诱导愈伤组织的作用不同 ,总的看来 ,茎较叶易于诱导愈伤组织.
2.1.2　2 ,4 -D 浓度对愈伤组织诱导的影响
试验中 ,在含有 0.5mg LNAA+0.5mg LBA的MA培养基上附加不同浓度的 2 ,4-D 均诱导出了愈
伤组织.表1结果表明:不同外植体在愈伤组织诱导中 ,所需2 , 4-D浓度有差异 ,茎外植体在2 ,4-D为
基金资助:吉林省自然科学基金资助项目
收稿日期:2004-04-16
作者简介:李建民(1964-),男(汉族),甘肃天水人 ,青海师范大学副教授.
2004年
第 4期 　　　 　　　　　
青海师范大学学报(自然科学版)
Journal of Qinghai Normal University(Natural Science)　　 　　　　　　
2004
No.4
DOI :10.16229/j.cnki.issn1001-7542.2004.04.020
0.5mg/L 时出愈率最高 ,而叶外植体则在 2mg/ L 时诱导率最高.随着 2 ,4-D 浓度的增高 ,愈伤组织诱
导率均呈下降趋势;从愈伤组织生长状况看 ,2 ,4-D浓度越高 ,愈伤组织生长越慢 ,绿色越浅 ,质地越致
密 ,越易于发生褐化现象;反之愈伤组织生长越旺盛 ,绿色越深 ,质地越紧实 ,且不易褐化.说明在龙牙
木愈伤组织诱导中 ,2 ,4-D 浓度起着重要作用 ,以低浓度诱导为好.
2.2　愈伤组织继代培养
诱导形成的愈伤组织在MA +0.5mg/L2 ,4 -D +0.5mg/LNAA +0.5mg/LBA培养基上培养 ,每月
继代一次 ,愈伤组织在此培养基上生长旺盛 ,愈伤组织由浅绿色逐渐转为黄色 ,质地由紧实 、坚硬转为致
密 、变软.若向培养基中再加入 500mg L 的水解酪蛋白 ,可进一步改善培养物的生长状况.
2.3　愈伤组织的分化与不定芽的形成
2.3.1　愈伤组织的分化
表 1　不同外植体在不同 2 , 4-D 浓度下愈伤组织诱导率及生长状况
外植体 茎 叶
2 , 4-D 接种数 成愈数 诱导率 接种数 成愈数 诱导率 愈伤组织生长状况
0.5(mg L) 40 34 85.0 98 72 73.5 生长旺盛 、浅绿色 、紧实 、不褐化
2.0(mg L) 20 16 80.0 18 13 78.0 生长快 、黄绿色 、致密 、渐褐化
3.0(mg L) 20 13 65.0 20 10 50.0 生长慢、黄褐色 、致密 、后褐化死亡
　　将继代培养三次的愈伤组织 ,转移到添加不同浓度BA+NAA组合MA培养基中 ,进行分化培养(表
2),一周后愈伤组织生长速度显著加快 ,其颜色和表面形态均发生了显著变化;三周后愈伤组织生长缓
慢 ,形态相对稳定 ,形成了表面密布白色霜块状(图版 Ⅰ-3)、绿色瘤状 、(图版 Ⅰ-4)和黄褐色颗粒状(图
版 Ⅰ-5)三种类型的愈伤组织.
表 2　愈伤组织的分化与不定芽的形成
激素组合 愈伤类型 不定芽发生 胚状体发生 激素组合 愈伤类型 不定芽发生 胚状体发生
BA+NAA 茎 叶 茎 叶 茎 叶 BA+NAA 茎 叶 茎 叶 茎 叶
1+0 ABC AB - - + - 3+0 C C - - + +
1+0.05 ABC AB - - + - 3+0.05 C C - - + ++
1+0.1 ABC ABC - - ++ - 3+0 , 1 BC A - - ++ +
C
1+0.5 ABC AB - - + - 3+0.5 BC A - 6.7% ++ ++
C
2+0 BC AC - - + + 4+0 BC C - - + +
2+0.05 BC AC - - +++ ++ 4+0.05 BC A - - + +
C
2+0.1 ABC AC - 10% + + 4+0.1 BC A - - ++ +
C
2+0.5 ABC ABC 4.2% 14.3% + + 4+0.5 ABC A - - ++ +
C
注 　 1　A 、B 、C分别示密布白色霜块状 、绿色瘤状 、黄褐色颗粒状愈伤组织.
2　+示胚状体形成相对数量:+很少 、++少 、+++较多 , -示无不定芽或胚状体形成.
3　百分比数值为不定芽发生率(即:形成不定芽块数 愈伤组织块数×100%).
2.3.2　不定芽的形成
表2结果显示继续在原培养基上培养 , 结果叶来源的密布白色霜块状的愈伤组织在 2mg/LBA +
0.1mg/LNAA 、2mg/LBA+0.5mg/LNAA以及3mg/LBA+0.5mg/LNAA组合的MA培养基上分别形成了
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丛生或单个粗壮的不定芽(图版 Ⅰ-6),发生率分别为 10%、14.3%、6.7%;而来源于茎的白色霜块状愈
伤组织只在 2mg/LBA +0.5mg/LNAA培养基上成芽 ,发生率仅为 4.2%.此外 ,培养 7周后 ,黄褐色颗粒
状愈伤组织可产生胚状体(图版 Ⅰ-7)而绿色瘤状愈伤组织除个别形成胚状体外未见其产生不定芽.赵
洁等[ 4] 报道 ,石刁柏外植体诱导的愈伤组织有块状 、瘤状 、颗粒状 、团块状四类型 ,且具有不同的形态发
生能力.程井辰[ 5] 报道天仙子白色紧实型愈伤组织易分化芽和根 ,灰褐色松散型愈伤组织易分化胚状
体.我们在龙牙 木组织培养外植体诱导的愈伤组织中 ,其形态特征上无明显差异 ,但在分化培养中观
察到 ,愈伤组织其生长速度显著加快 ,色泽及形态特征发生了变化 ,形成了密布白色霜状物的块状 、绿色
瘤状 、黄褐色颗粒状三类愈伤组织 ,其中在白色霜块状愈伤组织上分化出了不定芽 ,黄褐色颗粒状愈伤
组织上分化出了胚状体 ,而绿色瘤状愈伤组织上仅个别出现胚状体发生 ,但未见到不定芽形成 ,可能说
明愈伤组织的类型与形态发生能力一定的相关性.实验中还观察到各类型愈伤组织可独立出现在同一
瓶培养基中(如图版 Ⅰ-3中)但未观察到同一块愈伤组织上既有胚状体 ,又有不定芽的发生.
2.3.3　不定芽植株再生
切取1cm 左右长的不定芽 ,转移到1/2MA无激素的生根培养基上 ,20天即可生长出根系 ,从而形成
完整的再生植株(图版 Ⅰ-8).
参考文献:
[ 1] 　吉林省中医中药研究所.长白山植物药志[ M] .长春:吉林人民出版社 , 1982, 78.
[ 2] 　马铃薯种薯生产协作组.马铃薯种薯生产的研究Ⅰ用茎尖培养方法生产马铃薯无病毒原种[ J] .植物学报 ,1976 , 18(3):223-238.
[ 3] 　李建民 ,李喜文 ,张德炎 ,等.龙牙 木幼芽体细胞胚胎发生和植株再生[ J].实验生物学报 , 2001 , 34(2):137-141.
[ 4] 　赵洁.石刁柏愈伤组织形态发生能力及器官发生[ J] .武汉植物学研究 , 1992 ,10(4):328-322.
[ 5] 　程井辰.天仙子花粉的胚胎发生与器官发生[ J] .武汉植物学研究 , 1987 ,5:315-332.
Tissue culture and adventitious bud regeneration of Aralia elate(miq.)seem
LI Jian-min1 , LI Xi-wen2 ,LI Fuan3 , ZHONGDe-yan4 , XING Miao5
(1 .Dept of Biology , Qinghal Normal University ,Xining 810008 ,China;2.Institute of Genetics and Cytology ,
Northeast Normal University , Changchun 130024 , China;3.Dept of Chinese Medicine , Qinghai Medicine College ,
Xining 810001 ,China;4.Xianning Education College , Xianning , 437100 ,China;5.Shenzhen University ,Shenzhen
518060 ,China)
Abstract:Explants excised from the young stems and leaves of Aralia elate(miq.)seem.were cultured on MA
media Calli rate was that induced from the explants on MA medium supplemented with 0.5mg L NAA , and0.5mg
L BA after increase of 0.5mg L 2 ,4-D and 2mg L2 ,4-D the best.Then these calli were transferred onto the MA
medium containing 1-3mg L BA and 0-0.5mg L NAA , closed white downy calli , green tubercular calli and leo-
nine granulated calli was observed , and the adventitious buds were obtained from white downy calli.The rhizogenet-
ic media was 1 2MA after removal of the hormones.
Key words:Aralia elate(miq.)seem.;callus type;adventitious bud;plant regeneration
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图版说明
Ⅰ -1.示茎切段在诱导下正在愈伤化
Ⅰ -2.示叶切片在诱导下正在愈伤化
Ⅰ -3.示密布白色霜状物的块状愈伤组织及颗粒状胚愈伤组织
Ⅰ -4.示绿色瘤状愈伤组织
Ⅰ -5.示黄褐色颗粒状胚性愈伤组织
Ⅰ -6.示白色霜块状愈伤组织分化形成不定芽
Ⅰ -7.示不定芽再生植株
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