全 文 ：STUDY ON THE EFFECT OF MONOCROTOPHOS ON AC-
TIVITY OF PO IN HAEMOLYMPH OFPenaeus chinensis
BAI-Jie　 LI-Yongqi　 LI-Kuiran
(Ocean University of Qingdao , 266003 )
Received: Feb. 27, 1998
Key Words: Penaeus chinensis, Activ ity o f PO , Monocro topho s
Abstract
This paper repo rts the effect of monocro tophos on PO activities in haemolymph of P . chinensis. The toxici-
ty mechanism of monocr otopho s on th e sh rimp w as tested and discussed with immuno to xico lo g y m ethod. The
r esults indica ted: After st ress fo r 96 h. The activity wa s inhibited. And the inhibition became mo re obvious as
the toxic concentr ation increased g radually. Th erefo re, str ess o f monocro topho s will restrain the ability of the
shrimp f rom cleaning away th e mic roo rg anisms w hich a ttack it. And it may be an inducement of sh rimp disease.
螺旋藻多糖对 CD3AK细胞增殖能力的影响
王友顺 1　　黎露刚 1　　吴　侃1　　谢宗华 1　　唐　庆 1
李新岗 1　　祁铁流 1　　李长亮1　　汪　洋 1　　汪　庭 2　　方光如 2
( 1海军医学高等专科学校基础部 南京 210099)
( 2江苏省农科院 南京 210014)
提要　　研究了螺旋藻多糖 ( PS)对 CD3McAb激活的杀伤细胞 ( CD3McAb Activ ated Killer
Cells, CD3 AK Cells)增殖能力的影响。 结果表明 ,当 PS浓度为 2. 5μg· ml- 1培养体系条件
下 ,对 CD3 AK细胞具有明显的刺激细胞增殖作用 (P < 0. 02) ;对培养长达 23 d的 CD3 AK细
胞杀伤肿瘤细胞 ( K562细胞 )的活性仍维持在较高的水平 ( 46. 5% ～ 50% )。提示 PS对辐射损
伤和化疗引起的造血功能损伤及在肿瘤的生物治疗领域有较好的应用前景。
关键词　　螺旋藻多糖 , CD3 AK细胞
⒇
　螺旋藻多糖 ( Po lpysaccha ride o f Spirulina , PS)是
从钝顶螺旋藻 ( Spirulina platensis)中提取的具有多种
生物活性的天然糖蛋白类物质。日本 [1 ]用聚丙烯酰胺
凝胶电泳确认为纯品时 ,测得 PS的主要成分及含量
为鼠李糖 14. 0% 、核酸 20. 3% 、木糖 6. 2% 、甘露糖
17. 6% 、葡萄糖 25. 5% 、半乳糖 16. 4%。由于藻种及
分析方法的不同 ,其组分略有不同。作者研究了 PS对
CD3 AK细胞的增殖作用及杀伤瘤细胞的活性表明 PS
对辐射损伤及对化学剂损伤 (另文报道 )所引起的造
血功能损伤确有明显的保护作用。
371998年第 3期
⒇ 收稿日期: 1997-04-07
1　材料与方法
1. 1　材料
PS　为江苏省农科院提供①。 主要为鼠李糖、葡
萄糖 ,环状糖醇、葡萄糖胺、胞壁酸及核酸等。 用生理
盐水将 PS配制浓度为 1%的溶液 ,经温度 121℃ , 30
min灭菌。
培养液　含 10% AB血清的完全 RPMI 1640日
本产培养液。
K562细胞引自南京医科大学。
人血细胞悬液　南京中心血站提供 ,当日供血。
CO2培养箱　日本产 CO2培养箱 ( NBSCO-24)。
CD3 AK细胞　 CD3McAb引自军事医学科学院 ;
CD3 AK细胞参照有关文献 [2] (另见 Cur ti BD.等 ,Clin
Oncol . 1993)。结合作者单位 100级净化室条件建立的
培养体系。
1. 2　方法
　　首先研究 PS最佳浓度 ,采用最佳的 PS浓度
( 2. 5μg /ml)对 CD3 AK细胞增殖水平及其杀伤肿瘤
细胞活性进行了研究。 取新鲜全血采用 Ficoll液分离
淋巴细胞 ,将细胞浓度调整至 100 000 /ml,每份容量
为 4 ml,加 CD3McAb 80 ng /ml, IL-2 500 U ,在温度
37℃ , 5% CO2条件下培养。
2　结果
2. 1　不同 PS浓度对外周血淋巴细胞增殖能
力的影响
选择 6种 PS梯度 ,细胞数为 100 000 /ml,进行细
胞培养 5 d,发现 PS最佳浓度为 2. 5μg /ml。结果见表
1。
表 1　不同 PS浓度对外周血淋巴细胞增殖能力的影
响 (X-± S )
Tab. 1　 Ef fect of various concentration of PS on the
proliferation of lymphocytes in vitro
PS浓度 样本数 ( n) 细胞浓度 (X-± S )
(μg /ml) ( 1× 105 /ml )
0. 0 4 0. 8± 0. 050
1. 0 4 2. 5± 0. 140
2. 5 4 3. 7± 0. 053
25 4 2. 8± 0. 032
50 4 2. 2± 0. 015
100 4 2. 0± 0. 100
200 4 1. 7± 0. 010
2. 2　 PS对 CD3AK细胞增殖能力的影响
采用 CD3McAb激活外周血淋巴细胞的方法 ,待
其培养至第 4天 ,将 CD3 AK细胞取出计数再分瓶培
养 ,同时每瓶加浓度为 2. 5μg /ml的 PS,调整细胞浓
度及 p H值 ,继续培养 3 d,收获细胞 ,计数。 结果见表
2。 PS与 NS(对照组 )比较具有非常显著性差异 ( P <
0. 02) , PS与 PG(银杏多糖 ) ,比较亦具有显著性差异
( P < 0. 05) (另文报道 ) ,但 PG与 NS比较未见显著
性差异。
表 2　 PS对 CD3AK细胞增殖能力的影响 (X-± S )
Tab. 2　 Inf luence of PS on the proliferation of
CD3AK cells in vitro (X
-± S)
组别 样本数 ( n ) CD3AK细胞数 ( X-± S ) P值
(1× 105 /ml )
N S 5 3. 052± 0. 359 1
PS 5 4. 260± 0. 710 9 < 0. 02
PG 5 3. 166± 0. 912 0 < 0. 05
　　 PS与 N S比较 P < 0. 0 2 , PS与 PG比较 P <
0. 05。
2. 3　 PS对培养第 23天 CD3AK细胞的增殖
能力的影响
为了观察 PS对培养不同阶段 CD3 AK细胞增殖
能力的影响 ,按先前的方法计数。 分瓶加 PS, PS浓度
仍然为 2. 5μg /ml,培养 3 d后 ,计数 CD3 AK细胞数 ,
结果见表 3。 实验结果显示即便是培养第 23天的
CD3 AK细胞 , PS对 CD3AK细胞仍有较强的刺激细
胞增殖作用 , PS与 NS比较具有显著性差异 ( P < 0.
002) ,说明在同等条件下 PS对 CD3AK细胞的增殖作
用要比 PG显著增强。结果见表 3。
表 3　 PS对培养第 23天的 CD3AK细胞增殖能力的
影响 (X-± S )
Tab. 3　 Inf luence of PS on the proliferation of
CD3AK cells cultured until 23 days in vitro
组别 样本数 ( n ) CD3AK细胞数 ( X-± S ) P值
(1× 105 /ml )
N S 5 1. 74± 0. 371 5 /
PS 5 2. 60± 0. 234 5 < 0. 002
PG 5 1. 86± 0. 151 7 < 0. 05
NS与 PS比较 P < 0. 002, NS与 PG比较 P <
0. 05。
38 海洋科学
① 江苏省农科院微生物生化制品厂 ,螺旋藻多糖企业标准 Q /320000 WC931018, 1993
2. 4　 PS对 CD3AK细胞活性的影响
实验证明 PS不但对不同培养阶段的 CD3 AK细
胞具有刺激细胞增殖作用 ,而且对不同阶段的
CD3 AK细胞杀伤肿瘤细胞 ( K562细胞 )的活性有一定
影响 ,结果见表 4。 实验结果表明 ,在培养第 23天 ,
CD3 AK细胞仍维持较高的杀瘤细胞 ( K562 )活性 ,提示
PS在肿瘤的生物治疗领域具有较好的应用前景。
表 4　 PS对 CD3AK细胞活性的影响 (X-± S )
Tab. 4　 Influence of PS on the activity of CD3AK
cells in v itro (X
-± S )
效靶比 测定次数 ( n ) CD3AK细胞活性 (% )
100∶ 1 2 46. 5
200∶ 1 2 57. 0
3　讨论
本研究揭示了螺旋藻多糖具有海藻类凝集素作
用及促细胞分裂剂的活性 [3 ]。 发现 PS对培养不同阶
段的 CD3 AK细胞都具有较强的刺激细胞增殖作用。
特别是要提及的是 ,本 CD3AK细胞体系中 CD3McAb
浓度 ( 80 ng /ml)及 IL-2浓度 ( 500 U /ml)都比较低 ,且
在长时间培养体系中 CD3 AK细胞仍具有较高的杀伤
肿瘤细胞的活性 ,有较高的应用价值。 目前临床上已
采用螺旋藻多糖来作为放疗、化疗的一种重要的辅助
治疗剂 [4 ]。 在本项研究中发现银杏多糖有类似作用 ,
但作用较 PS明显减弱。 其刺激细胞增殖作用机理尚
有待进一步研究。
参考文献
1　日本国特许厅 ( JP)公报 ( A)特开昭 61-69728, 1986。 1～ 4
2　 Thigcc, Hargrov e M E, Liang SM, et al . . Cel l Imm unol ,
1994, 142: 40
3　刘长发。 中国海洋药物 , 1996, 1: 52～ 54
4　王友顺、汪　庭等 ,海军医学高等专科学校学报 , 1994, 16
( 4): 306～ 309
THE INFLUENCE OF SPIRULINA POLYSACCHARIDE ON
THE CD3AK CELLS PROLIFERATION IN VITRO
WANG You-shun1 , L I Lu-gang1 , WU Kan1 , Xie Zong-hua1 , TAN G Qing1 , L I Xin-gang1 , QI
Tie-liu
1
, L I Chang-liang
1
, W ANG Yang
1
, WANG Ting
2
, FAN G Guang-ru
2
( 1Department of Foundation , Naval Medical College, Nanjing 210099)
( 2Centre of spirulina breeding , J iangsu Academy of Agricultural sciences, N anjing 210014)
Received: Apr. 7, 1997
Key Words: Spirulina po ly saccharide; CD3 AK cells
Abstract
We studied that the influence of spirulina po ly sa cchride ( PS) on th e pr olifera tion o f CD3AK celles w er e ac-
tiv ated by CD3McAb. The r esults show ed that th e obvious effects o f celles pro lifera ting w ere ac tiv a ted by
CD3McAb when PS w as in 2. 5μg· ml- 1. The higher lev el of vitality of killing tumo r celles ( K562 ) was kept in
vitr o on 23 rd day ( 46. 5% -50% ) . These r esults suggest that application fo reg round is v ery well on PS against
hemopoietic func tion injury was induced by radiother apy and chemo th erapy and in the therapy of tumo rs.
391998年第 3期