全 文 ：西北药学杂志 2 0 01 年 2月 第 16 卷 第 1期
· 中药及天然药物 ·
荷花玉兰组织培养的研究 ’
王 琪 王品之 “ 李映丽 “ ` (石河子大学医学院 石河子 83 2 0 0 2)
摘要 采用正交设计法考察 了 4种植物激素对诱导荷花玉 兰愈伤组织 产生的 影响 , 筛选出最佳的植物激素配
比为 : M S 培养基 + 2 , 4一 D ( 2 , 4一二氛苯氧 乙酸 , 4m g / L ) + 6一 B A ( 6一千基氛墓嗓吟 , l m g / L ) + N A A a( 一茶 乙酸 ,
4m g / )L
; 找到最适外植体为花托和叶芽 , 对比 了不 同外植体形成愈伤组织 的时间 、 形态和质地的差异 。
关键词 荷花玉兰 ;愈伤组织培养 ;植物激素
中图分类号 : R 2 8 2 . 2 文献标识码 : A
S t u d y o n t i s s u e c u l t u r e o f M a g n o l i a g r a n d价o ar L .
W
a n g Q i
,
W
a n g Z h e z h i a n d L i Y i n g li (油 J i c a z col z e岁 , s 人i入e z i u n i v e sr i妙 , s人认 e z i , 53 2 0 0 2 )
A B S T R A C T E f f e e t s o f Z
,
4
一
D
,
6
一
B A
,
N A A a n d I A A o n 。 a l l u s i n d u e e m e n t o f M a g n o l i a g r a n d i fl o ar L
.
w e r e s t u d ie d b y L
,
( 3
4
) o r t h o g o n a l d e s ig n
.
T h e b e s t m e d i u m f o r e a l l u s i n d u e e m e n t w a s M S + 2
,
4
一
D ( 4m g / L )
+ 6
一
B A ( l m g / L ) + N A A ( 4m g / L )
.
T h e a e e p t a b l e e x p l a n t s s e l le e t e d w e r e r e e e p t a e l e a n d le a f b u d
.
T h e 。 a l l u s
d i f f e r e n e e s i n t h e P e r i o d
, s h a P e a n d t e x t u r e f o r m e d b y d i f f e r e n t e x P l a n t s h a d b e e n e o m P a r e d
.
K E Y W O R D S M 泛g n o l i a g r a n d i fl o r a L
.
; 。 a l l u s 。 u l t u r e ; p h y t o h o r m o n e
荷花玉兰 材d g on il a g ar n id fl 口ar L . 为木兰科木
兰属植物 ,原产北美洲东南部 。我国各地有栽培 ,主要
作为庭院观赏植物 , 也作为芳香油料树种 。 文献报
道 ` , , 2 〕 ,其植物体内含多种化学成分 , 花蕾中含有大量
的挥发油及木脂素 , 茎皮和 叶片含有生物碱及菇
类 〔` , 。 其花蕾具有散风寒 、 通鼻窍 、降血压 、抗菌消炎
等作用 , 可作为传统中药辛夷及厚朴的补充药材 。 本
研究旨在通过组织细胞培养 ,建立荷花玉兰的愈伤组
织培养体系 ,优选细胞株 , 为进一步研究其次生代谢
产物的积累奠定基础 。
1 材料与方法
L l 取材及培养条件 荷花玉兰外植体采自陕西师
范大学校园内 。 取荷花玉兰的花蕾及叶芽 , 先用洗涤
剂漂洗 , 70 %乙醇浸泡 305 , 然后 用 0 . 1%氯化亚 汞
(加吐温 80 )灭菌 I Om in ,无菌水冲洗 6 次 。 无菌条件
下将花蕾的苞片及叶芽的被片拨去 ,分离出雄蕊 , 将
雌蕊 、 花被片、 花托及 叶芽切成 0 . sc m x 0 . sc m 的小
块 , 分别接种在固体培养基上 。 基本培养基为 M S , 附
加葡萄糖 3% , 琼脂 0 . 5% , p H 6 . 0 及不同配 比的激
素 。 1 21 ℃高压灭菌 25 m in 。 培养条件 : 温度 25 ℃ 士
1℃ ,光强 2 5 0 0 l x ,每天光照 1 0 h 。
1
.
2 培养基的配制 选用正交实验设计卿 , 以 M S
培养基为主体选取 2 , 4一 D ( 2 , 4一二氯苯氧乙酸 ) , 6一 B A
( 6
一节基氨基嚓吟 ) , N A A a( 一蔡乙酸 ) , IA A (叫噪 乙
酸 )4 种激素 , 每种激素取三个水平 (浓度均为 m g /
L )
,选用 L 。 (3 ` )正交表进行实验 。 以不同外植体的愈
伤组织诱导率和生长量为考察指标 。 根据设计安排 9
次实验 (见表 1 ) 。
表 i L , ( 3 . )因子水平表
A B C D水平 2, 4一 D 6一 BA N A A 认 A
2 结果与分析
.2 1 2
,
4
一
D
,
6
一
B A
,
N A A
,
IA A 对不 同外植体愈伤组
织诱导率和生长童的影响 外植体培养一个 月后 , 5
种外植体在 4 种激素不同浓度配 比的实验组中 ,都不
同程度的形成了愈伤组织 , 但差异较大 。 经统计愈伤
硕士生研究论文 , , 陕西师范大学生命科学院 西安交通大学药学院
西北药学杂志 2。。 1年 2月 第 16 卷 第 1期
组织的诱导率及生长量 , 结果见表 2 ,极差分析见表
3
。
由表 3 可以直观看出因子 A (2 , 4一 D )对结果影响
最大 , 因子 C ( N A A ) 影 响次之 , 而 B (6 一B A ) 和 D
(I A A )影响较小 。
表 2 不同外植体愈伤组织诱导率
、 _
_ 因 子 愈伤组织诱导率 (% ) _ _ ,序号 一丁一是一~子= , 一丁二二若苦= 釜苦一士泛三云一一 艺XA B C D 叶芽 花托 花被 雄蕊 雌蕊 一
从以上结果可以看出 ,花托和叶芽最容易产生愈
伤组织 , 且生长量大 ,对激素的浓度要求不严 。 雄蕊 、
雌蕊及花被片不易产生愈伤组织 ,对激素浓度的配比
要求较严格 。
1 4 0
1 2 0
1 0 0O曰OL气Jl`八é口tJl,月1
,.五,止O自
1 0 0+
8064021 0 0++
1 0 0++
448.93468
4 2 2 1 0 0柑 1 0 0拼 0 2 5 . 0 0
O口J任n甘`任,曰,工néù日ó性月一1.
:
八ó几」n曰八é
2 3 0
0 1 0 0料 1 0 0拼
1 4 0
.
8 1 0 0++
7 4 1 2 1 10 0柑 1 0 0洲 58 . 3 3 7 . 5 25. 0 321
8 4 2 0 2 10 0升 1 0 0柑 26. 5 1 5 . 6 25. 0 267
9 4 3 1 0 6 2
.
5 1 0 0拼 0 6 . 3 2 5. 0 1 9 4
注 :每组接种 16 瓶 , 每瓶接种 8块 ,每种外植体接种 3~ 4瓶。
+ 产生愈伤组织 ;料产生稍多的愈伤组织 ;柑产生较多的愈伤组织 ;册
产生大量愈伤组织 。
表 3 L , ( 3’ )愈伤组织诱导率 (% )极差分析
K i j Z
,
4
一
D 6
一
B A N A A IA A
K
l 4 2 2 6 6 5 5 2 0 5 1 3
K
Z 5 7 8 6 1 4 5 5 6 60 2
K 3 7 82 5 1 3 7 0 5 667
R 3 6 0 / 3 1 5 2 / 3 1 85 / 3 1 5 5 / 3
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
图 其 5 种外植体形成愈伤组织的诱导率及生长 t 对比
1
一花托 2 一叶芽 3一雄蕊 4一花被 5一雌蕊
表 4 不同外植体形成愈伤组织的时间 、 形态及质地的差异
叶芽 花托 花被 雄蕊 雌蕊
出现时间(d ) 14 14 30 30 20
形态 团块状 团块状 团块状或粉状 团块状 团块状
质地 疏松易碎 紧密肿胀 紧密或疏松 紧密 致密或疏松
颜色 白色 白色 白色或浅绿色 白色 浅绿色
2
.
3 2
,
4
一
D
,
6
一
B A
,
N A A
,
I A A 及不 同浓度组合对外
植休形 成愈伤组织的影响 5 种外植体接种一周后
均有不同程度的膨大 ,而叶芽同时展开成幼叶 。 至 2
周时 ,所有培养基中花托和幼叶的边缘均有愈伤组织
的产生 ,但 1 , 2 , 3 , 6 , 9号实验组产生愈伤组织的量较
少 ,幼叶产生的愈伤组织质地松散 、 易碎 ;花托产生的
愈伤组织紧密肿胀 。 3 周后 1 , 2 , 3 号实验组产生的愈
伤组织由白色转为黑褐色 ;而 4 , 5 , 7 , 8 号实验组产生
愈伤组织的量较多 ,颜色较浅 , 尤其是 7 , 8 两组产生
的愈伤组织的量相对最大 。 3周时 , 雌蕊内壁形成质
地致密 、 浅绿色的块状愈伤组织 ,而雌蕊柱头上形成
的愈伤组织较松散 ,仅限于 7 , 8 , 9 号实验组 。 1 月左
右 ,在花丝的基部及花被边缘长出团块状白色的愈伤
组织 , 而在花被片背面形成的愈伤组织则较松散 、 粉
状 、浅绿色 。 花被片形成的愈伤组织仅限在 7 , 8 两实
验组中 。 花丝形成的愈伤组织在 2一 9号中均有出现 ,
7号为最多 , 8 号次之 (见图 1 ,表 4) 。
2
.
4 激素浓度最佳水平的选择 由表 2 、 表 3 、 表 4
和图 1 可以推断出诱导荷花玉兰不同外植体产生愈
伤组织的最佳激素配 比为 A 3B I C 3D , , 即 4m g / L Z , 4 -
D + l m g / L 6
一
B A + Zm g / L N A A + Zm g / L I A A
。
N A A 和 I A A 对荷花玉兰愈伤组织的诱导无显著差
别 ,并属生长调节物质 ,故可合并为 4m g / L Z , 4一 D +
l m g / L 6
一
B A + 4m g / L N A A
。 用此种配比的培养基
进行了验证实验 ,结果表明 , 愈伤组织诱导快 , 生长量
大 ,诱导率高 ,从而证明实验结果是正确的 。
3 讨论
植物的细胞分化是一个复杂的生理生化过程 ,不
同的激素 、 不同的浓度以及不同组合直接影响着愈伤
组织的诱导 。 从本实验可以看出 ,荷花玉兰愈伤组织
的诱导除了作为细胞生长调节物质的 2 , 4一 D 具有显
著作用外 ,作为细胞分裂素的 6一 B A 及生长调节剂的
N A A 和植物激素 I A A 的影响较小 。 生长素与细胞分
裂素比值是决定愈伤组织诱导率和生长量的关键 。从
本实验还可看出 2 , 4一 D + N A A 十 I A A 6/ 一 B A 的比值
越大 , 形成愈伤组织的诱导率就越高 , 生长量就越大 ,
反之则小 。 这同前人在其他植物上的研究结果相同 。
西北药学杂志 2。。 1 年 2 月 第 16 卷 第 1 期
不同的外植体形成愈伤组织的时间 ,愈伤组织的
生长量 、 质地和颜色都会有很大差异 , 从而表明来自
不同部位的外植体对不 同的激素及其浓度的配比会
有不同的敏感度 。不同外植体形成不同质地和颜色的
愈伤组织的现象 ,为今后进一步研究荷花玉兰组织培
养提供了需要重视的问题 。
参考文献
芦金清 ,彭信玉 ,蒋礼成 ,等 . 荷花玉兰树皮的酚性成分
研究 . 中成药 , 1 9 9 0 , 1 2 ( 5 ) : 3 2
《全国中草药汇编 》编写组 , 全国中草药汇编 . 上册 .
北京 :人民卫生出版社 , 1 97 5 : 39 5
杜勤 , 王振华 ,张俊荣 ,等 . 正交设计在何首乌组织培养
中的应用 . 中草药 , 1 9 9 9 , 3 0 ( 7 ) : 5 3 7
(收稿 : 20 0 0一 0 9 一 25 )
3 5 种中药及藏药的同名异源研究
郭全兴 (青海省药品检验所 西宁 8 1 0 0 0 0)
中图分类号 : R 2 8 2 . 5 文献标识码 : A
中药学及藏药学是我国传统医药学的重要组成
部分 ,具有独特的理论体系和浓厚的民族特色以及丰
富的用药实践 。 青藏高原号称地球第三极 ,东北部和
南部蕴藏着品种繁多 、 引人注 目的中药与藏药资源 。
藏本草所载藏药的来源主要有三个方面 , 一是道地藏
药 ,二是来自中药 , 三是来源于天竺的药物 。笔者查阅
药学典籍 〔,一 5〕发现 ,有些中药与藏药同名而其来源相
异 ,有些品种来源相差较大 。 现就 35 个同名异源品种
作以概述 ,为医药学工作者提供参考 。
l 党 参 中 药 为桔 梗科植 物 党 参 oC d on o sP is
P i l o s u l a ( F r a n e h ) N a n n f
. 、 素 花 党参 C . P i l o s u l a
N a n n f
.
v a r
.
m o de
s t a ( N a n n f
.
) L
.
T
.
S h e n 或川党参
c
.
at n gs he
。
ol iv
. 的干燥根 ;藏药为桔梗科植物党参
及同属多种植物新疆党参 C . c l e m a t id a e ( S e h r e n k )
C
.
B
.
C l a r k e
. 、藏党参 C . m o l l i i C h i p p . 、 Jl l党参等的
根 。
2 骨碎 补 中药为水龙骨科植物 棚族 D yr an ir a
fo rt un ie ( K im
z e ) J
.
SM
. 的干燥根茎 ;藏药为水龙骨
科植物中华棚藏 D . ,b a or n i i ( C h r i s t ) D i e l s 的根茎 。
3 商 陆 中药 为商 陆科 植 物 商陆 尸 h yt ol ac ca
a c i n o s a R o x b
. 或垂序商陆 P . a m e r i e a n a L . 的干燥
根 ;藏药为商陆科植物商陆的根 。
4 川 木 香 中药为菊科植物 川木 香 V al id m i ir a
s o u l i e i ( F
r a n e h
.
) L i n g 或 灰 毛 川 木 香 V . s o u l i e i
( F r a n e h
.
) L i n g v a r
.
c i n e r e a L i n g 的干燥根 ;藏药为
菊科植物川木香的根 。
5 紫兑 中药为菊科植物紫苑 A st er t at ar i cu 、 L . .F
的干 燥根及 根 茎 ;藏药为 菊 科 植物萎软紫莞 .A
fl a c e id u : B u n g e 的花 。
6 茜草 中药为茜草科植物茜草 R ub ia 。。 dr i fo l l’a
L
. 的干燥根及根茎 ;藏药为茜草科植物西藏茜草 .R
t i b e t i c a H o o k
.
F
. 和 光茎茜草 R . w a l l i e h i a n a D e e n e .
等同属多种植物的根茎及根 。
7 黄精 中药为百合科植物滇黄精 尸 ol y go an ut m
k i n g i a n u m C o l l
.
e t H e m s l
、 黄精 P . s i bi r i c u m R e b . 或
多花黄精 尸 . 。 y rt on e m a H u a 的干燥根茎 ;藏药为百合
科植物轮叶黄精 尸 . ve rt ic l’ lat u m ( L . ) A n . 的根茎 。
8 天南星 中药为天南星科植物天南 星 A ir s ae m a
e r u be s c e n : ( W
a l l
.
) S e h o t t
. 、 异 叶 天 南 星 A .
h e t e r o P h少 l l u m B I . 或 东北天南 星 A . a m u r e n s e M a x -
im
. 的干燥块茎 ;藏药为天南星科植物一把伞南星 .A
e r u
be
s c e n : (W
a l l
.
) S e h o t t
. 的块茎 。
, 甘松 中药为败酱科植 物甘松 N ar do s t ac h ys
c h i n e n s i: B a t a l或匙叶甘松 N . aj t a m a n s i D C . 的干燥
根及根茎 ;藏药为败酱科植物甘松的干燥根及根茎 。
10 独活 中药为伞形科植物重齿毛当归 A n g el i ca
P u be
s e e n s M a x im
.
F
.
b i s e r a t a S h a n e t Y u a n
. 的干燥
根 ; 藏 药 为 伞 形 科 植 物 白 亮 独 活 H er ac l eu m
e a n d i e a n : W
a l l
.
e x D C
. 及其同属多种植物的根 。
n 黄连 中药为毛蓑科植物黄连 oC tP is hc ien sn is
F r a n e h
. 、 三角 叶黄 连 C . d e l t o i d e a C . Y , C h e n g e t
H s ia o 或云连 e . t e e t a w a l l . 的干燥根茎 ;藏药为毛食
科植物黄连的根茎 。
12 甘 草 中药为 豆 科 植 物 甘草 lG yc y r h iaz
u r a l e n s i : F i s e h
. 、 胀果甘草 G . i n fl a t a B a t . 或光果甘
草 G . g lab ar L . 的干燥根及根茎 ;藏药为豆科植物甘
草的根及根茎 。
13 构 祀子 中药为茄科植物宁夏构祀 L yc iu m
ba br o ur m L
. 的干燥成熟果实 ;藏药为茄科植物中宁
构祀 L . ba bar ur m L
. 及同属多种植物的果实 。
1 4 马 兜 铃 中药 为 马 兜铃 科植 物 北 马 兜铃
A r i s t o l o c h i a e o n t o rt a B g e
. 或马兜铃 A . d e bi l i s S i e b .
et Z u c 。
. 的千燥成熟果实 ;藏药为马兜铃科植物马兜
铃或木香马兜铃 A . m ou lP’ ne ns is F ar n o h . 的干燥地上
部分 。
1 5 木瓜 中药为蔷薇科植物贴梗海棠 C h ae no m el es
s p e e i o s a ( s w e e t ) N a k a i
. 的干燥近成熟果实 ; 藏药为
蔷薇科植物皱皮木瓜 C . s P e c i o s a ( Sw e e t ) N a k a i 、 毛