全 文 ：收稿日期:2009-05-08;　修订日期:2009-11-30
基金项目:江苏省海洋生物技术重点实验室资助项目(No.2007HS009);
淮海工学院引进人才启动资助基金项目(No.KK01060)
作者简介:胡喜兰(1961-),女(汉族),新疆伊犁人 ,现任淮海工学院化学
工程学院教授 ,学士学位 ,主要从事配位化学和天然药物化学的提取及应
用研究工作.
凤仙花中山萘酚的提取 、分离与纯化
胡喜兰 ,程青芳 ,尹福军 ,边红玲
(淮海工学院·化学工程学院 ,江苏 连云港　222005)
摘要:目的 从凤仙花中提取山萘酚。方法 用不同方法和不同溶剂对凤仙花中山萘酚的进行提取 , 对得到的醋酸乙酯提
取物 , 采用葡聚糖凝胶 LH-20进行分离 ,以甲醇为溶剂进行重结晶 , 利用 HPLC进行检测。结果 用醋酸乙酯溶剂提取
凤仙花中山萘酚是可行的 ,山萘酚含量相对较高。结论 凤仙花可作为提取山萘酚的优选原料。
关键词:凤仙花;　山萘酚;　提取;　分离;　纯化
中图分类号:R284.2　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2010)04-0932-02
　　凤仙花为凤仙花属植物凤仙花 ImpatiensbalsaminaL., 凤仙
花科 , 又称为金凤花(《世医得效方》), 灯盏花(《滇南本草》),好
女儿红(《本草纲目》),指甲桃花(《山东中药》), 金童花(《江西
民间草药》), 竹盏花《药材学》 [ 1] 。凤仙花对气候土壤要求不严 ,
全国各省区均有栽培 。凤仙花为一年生草本植物 , 高可达 80cm
左右 , 茎直立 ,圆柱行 , 上部分枝 ,下部的节常膨大 ,表面有短柔毛
或近乎光滑 , 常呈紫红色。 花大 , 腋生单朵或数朵;花色颇多 ,如
白色 , 粉红色 ,紫色 , 大红 , 洋红 , 雪青等;花型丰富 , 有单瓣型 ,花
型较小 , 长势旺盛。蔷薇型 ,朵较大 , 重瓣 ,宛如盛开的蔷薇 ,长势
中常。山茶型 , 花瓣重叠匀整 ,形如父瓣类山茶模样 , 长势较强。
顶头花新型 , 花大在枝顶 , 似山茶花样 , 腋花似蔷薇样 , 花朵浮现
株丛表面 , 长势较弱。凤仙花性健壮 ,生长迅速。 并且凤仙花中
含多种具有药用价值的成分 ,山萘酚就是其中一种。
山萘酚原本来源于山萘 KaempferiagalangaL.的根茎;百蕊
草 ThesiumchinenseTurcz.的全草;槐树 SophorajaponicaL.的果
实。
化学名:4H-1 -benzopyran-4-one, 3, 5, 7 -trihydroxy-2
-(4′-hydroxy-phenyl)[ 2] , 结构式见图 1。
图 1　山萘酚化学结构式
本实验拟从资源丰富的凤仙花中提取山萘酚 , 找出成本低
廉 , 工艺简便 ,能得到纯净山萘酚的工艺路线。
1　仪器与材料
恒温水浴锅 B-220(浙江舟山市定海区海源仪器厂);旋转
蒸发器 RE52CS(浙江舟山市定海区海源仪器厂);SHZ-CD型
循环水真空泵(浙江舟山市定海区海源仪器厂);ZF-I型四用
紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂);LC-10ADVP型高压液相
色谱仪 、CLASS-VP工作站 、SPD-M10AVP二极阵列检测器(日
本岛津公司);电子天平(北京赛多利斯天平有限公司);硅胶板
(青岛美高集团有限公司);凤仙花红色花瓣(采于新疆伊犁 ,自
然晾干揉碎储存于密闭的广口瓶中备用), 葡聚糖凝胶 LH-20
用甲醇浸泡后备用。山萘酚标准品 ,购于中国药品生物制品鉴定
所 , 甲醇(色谱纯)、甲醇(分析纯)、石油醚 、醋酸乙酯均为天津市
福晨化学试剂厂试剂。
2　方法
2.1 　提取 提取中基于课题组的前期工作 [ 3, 4] , 对烘干的凤仙花
用不同的溶剂进行提取或是萃取。溶剂包括有甲醇 、醋酸乙酯 、
石油醚 、环己烷 、乙醇 、丙酮和正丁纯。 对所得的甲醇提取液
(H0)、石油醚提取液(H1)、环己烷提取液(H2)、醋酸乙酯提取液(H3)、丙酮提取液(H4)、乙醇提取液(H5)、石油醚萃取液(H6)、
醋酸乙酯萃取液(H7)、正丁醇萃取液(H8)进行高效液相色谱检
测 , 结果见图 2 ～ 3。所得实验结果在经过分析和比较后 , 发现在
醋酸乙酯提取液和醋酸乙酯萃取液中所含山萘酚含量较高。 因
此 , 本实验就在此基础上选择醋酸乙酯作为溶剂对凤仙花进行山
萘酚的提取 、分离和纯化。
a为标准对照液;b:H0;c:H3 , d:H1
图 2　样品色谱图
a为标准对照液;e:H8;f:H7;g:H6
图 3　样品色谱图
用索氏提取器进行提取:称取 10g干燥的凤仙花碎粉 , 用滤
纸扎成包裹 , 成圆状 ,放入索氏提取器。用石油醚约 60ml浸泡用
滤纸包裹的凤仙花 ,滤纸筒的高度不超过虹吸管 , 石油醚超过纸
筒 , 但也不超过虹吸管 , 浸泡一夜 ,于第 2日在恒温水浴锅中加热
回流至基本无色。停止加热 , 在旋转蒸发仪上浓缩提取液 , 并晾
干凤仙花包裹。用醋酸乙酯浸泡上一步中晾干的凤仙花包裹 , 浸
泡一夜 , 于第 2日加热回流至回流液基本无色 ,将所获得回流液
转移入梨形瓶 ,进行浓缩。浓缩后将其全部溶解转移入小瓶 , 将
小瓶用保鲜膜封口 ,并戳几个小洞 , 使溶剂慢慢挥干 ,以备下一步
使用。
2.2 　分离与纯化 采用葡聚糖凝胶 LH-20分离 , 首先装柱:把
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时珍国医国药 2010年第 21卷第 4期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2010VOL.21NO.4
凝胶颗粒放在甲醇溶液中浸泡 , 用相对多的甲醇使其充分膨胀 ,
让其成糊浆状 , 沿层析柱内壁 , 缓缓灌入柱中 , 同时打开下端活
塞 , 让洗脱液缓缓滴出。注意在装入凝胶之前应预先在层析柱中
加入 1 cm左右高的甲醇 , 使其最大可能的在装柱过程中无气泡
产生 , 在灌浆过程中和灌浆完毕都不能让洗脱剂流完 、干柱 ,让柱
面上一直保持有一定的液面 , 使吸附剂自由沉降而填实 , 并一边
用玻璃棒轻轻敲打柱子 ,尽量使柱子装的紧密而均匀 ,层析柱一
般柱高 30cm,装柱内水体积在 100 ml以上 ,柱直径采用 2.5 cm
左右。其次 , 加样:装好的层析床 , 至少采用 3倍于层析床体积的
洗脱液平衡 , 葡聚糖凝胶柱分离常用的溶剂系统有:①醇溶液 ,如
甲醇 、乙醇及不同比例的含水醇;②水溶液 , 如水 、碱性水溶液
(0.1mol/LNaOH)、盐溶液(0.5 mol/LNaCl)[ 5] 。本实验选甲醇
为平衡液 , 待平衡液流定 ,液面在床表面上约 1～ 2 cm处 , 沿柱壁
周围将样品加入。加完后打开出口阀 , 使样品完全渗入层析床 ,
再关闭出口 , 用少量洗脱液如上操作 ,将管壁残留的样品洗下 ,再
打开出口 , 至上面少量样品都渗入柱内 , 关闭出口 ,柱床上面露出
一薄层脱脂棉 , 以保护柱床表面。然后慢慢加入洗脱液 , 开始洗
脱 , 20ml一个试管 ,并依次浓缩各提取液 , 转入准备好的各小瓶
中 , 依次标号待用。
如凝胶有微量污染 ,可用 0.5 mol/LNaOH(内含 0.5 mol/L
NaCl)处理。经多次使用后 , 凝胶色泽改变 , 流速减低 ,表面有污
染物等情况则需再生 。常用温热(50℃左右)的 0.5 mol/LNaOH
和 0.5 mol/LNaCl混合液浸泡 ,再用水洗净。经常使用的凝胶是
以湿态保存。加入 0.02%的叠氮钠(NaN3), 可保存一年不致发
霉(本实验中取 29.22gNaCl和 20.00gNaOH配置 0.5 mol/L
NaOH和 0.5 mol/LNaCl混合液 200ml, 加入到凝胶中 , 并把此混
合物在 50℃的恒温水浴下浸泡过夜 ,于次日用蒸馏水冲洗 , 减压
抽滤 , 至 pH试纸显中性 , 然后用甲醇浸泡待用)。
2.3　薄层色谱检测(TLC)把上述样品与山萘酚对照品对比进
行薄层色谱检测。先在离薄板一端约 1 cm处 , 用铅笔轻轻画一
条线作为点样线 , 用毛细管蘸取被测液按一定顺序点在硅胶板
上 , 点间距离均等 , 每个样用毛细管少量 、多次 、反复地取后点在
薄板上 , 然后把板放入装有甲醇溶液的层析缸中 , 进行跑板 ,结果
如图 3所示。对于比移值一致 , 现象一致的点 ,把其所属的各小
瓶中溶液进行合并 , 然后用甲醇进行重结晶 , 得山萘酚黄色针晶 ,
熔点 276 ～ 278℃。
图 4　TLC跟踪检测图
2.4　高效液相检测 [ 5] 高效液相色谱仪所设置条件为:压力:
10 ～ 400kgf/cm2 , 显示精度;±2%或 5 kgf/cm2 , 流速:0.001 ～
5ml/min, 精度:±2%或 2 ml/min操作温度 , 4 ～ 35℃。测山萘酚
时所设置具体条件为:流动相:水与甲醇之比为 1∶1;波长:360
nm;流速:1.0ml/min
取分离前的凤仙花的醋酸乙酯的提取液的浓缩物样品少量
和经葡聚糖凝胶 LH-20分离所得的样品分别进行高效液相检
测 , 所得谱图见图 5 ～ 6。
图 5　分离前样品的高效液相色谱图
图 6　分离后样品的高效液相色谱图
3　结果
由实验可知 ,用醋酸乙酯作为溶剂提取山萘酚是可行的 , 利
用葡聚糖凝胶 LH-20的分离能使凤仙花中可能含有的山萘酚
糖苷等杂质预先除去 ,从而得到纯净的山萘酚。
4　结论
凤仙花作为原料资源广泛 , 山萘酚含量相对较高 ,且获得山
萘酚的提取 、分离和纯化工艺方便 、可行 ,因此凤仙花可作为提取
山萘酚的优选原料。
参考文献:
[ 1 ] 　江苏新医学院.中药大辞典(上册)[ M] .上海:上海科学技术出版
社 , 1977:486.
[ 2 ] 　LinHua, ZhaofengPeng.LianSaiChia, etal.Separationofkaempfer-
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trochemicaldection[ J].J.chromatographyA.2001, 909:297.
[ 3 ] 　胡喜兰 , 朱　慧 ,刘纯瑞 ,等.凤仙花的化学成分研究 [ J] .中成药 ,
2003, 25(10):833.
[ 4 ] 　胡喜兰 , 韩照祥,刘玉芬 ,等.凤仙花不同提取物中山萘酚的测定
[ J] .分析试验室 , 2007, 26(5):33.
[ 5 ] 　谭仁祥.植物成分分析 [ M] .北京:科学出版社 , 2002:494.
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