全 文 ：2006 年 12 月第 4 卷第 4 期 国际沙棘研究与开发 21　
译文
三种沙棘 (海滨沙棘 、中国沙棘 、
蒙古沙棘 )果实的黄酮醇苷成分
土小宁1 , 白　婧2 , 张　春2
(1. 水利部沙棘开发管理中心 , 北京　100038;2. 陕西省吴起县林业站 , 陕西吴起　717600)
　收稿日期:2006-05-16
　作者简介:土小宁 (1964-), 女 , 高工 , 从事沙棘科研与管理工作。
原文作者:Heikki Kallio 1 , Bao ru Yang 1 , 2 , Teemu Halttunen1
(1. 芬兰土尔库大学生物化学与食品化学系 , 土尔库 , 芬兰;2. 阿诺马特克有限公司 , 托尼欧 , 芬兰)
摘要:釆用 RP-HPLC-DAD高效液相色谱仪分离出了海滨沙棘果实中的黄酮醇苷並用标准品进行了鉴定。
糖苷组分用 β-葡萄糖苷酶进行酶水解再用色谱仪和标准品鉴定苷元。所有这 3 种沙棘都含有同样的黄酮醇苷
种类 , 其中蒙古沙棘果实的总含量最低。主要苷元是异鼠李素 , 其次是槲皮素及含量低的山萘酚。测定了 3
种沙棘中的黄酮醇苷例如黄酮醇 3-O-芸香苷, 3-O-葡萄糖苷 , 3-O-槐糖苷-7-鼠李糖苷以示它们的区别。
关键词:黄酮醇苷;海滨沙棘;异鼠李素;山萘酚;槲皮素;沙棘
中图分类号:S793. 678　　　　　　文献标识码:A 文章编号:1672-4638 (2006) 04-0021-04
　　黄酮醇和黄酮能防止植物免受紫外线 、可见
光和由自由基引发的损伤 (Takahama , 1983) .
这些化合物也有抗过滤性病毒和细菌的能力
(Parr and Bolw ell , 2000)。槲皮素是植物界中广泛
存在的黄酮醇 ,大量存在于树木 、苹果 、洋葱 、花椰
菜和许多蔬菜之中。黄酮醇在红葡萄酒中的含量
很高 ,可达每升 50mg(Frankel et al. ,1995)。据统
计 ,槲皮素以及山萘酚能够降低缺血性心脏病的危
险 (Hertog et al. , 1995;Knekt et al. , 2002)。有
证据显示黄酮醇对癌症 , 特别是肺癌有很好的疗
效 (Stefani et al. , 1999;Knekt et al. , 2002)。
1　材料和方法
1. 1　浆果
海滨沙棘的浆果采自芬兰西海岸的 Raip-
paluoto岛 。中国沙棘采自中国山西文水县。蒙
古沙棘采自俄罗斯新西伯利亚 。浆果在一天之内
冻藏待用 。
1. 2　试剂和标准品
β-葡萄糖苷酶购自 Novozyme. 。标准品异鼠
李素 , 山萘酚 , 槲皮素 , 异鼠李素 3-O-芸香苷 ,
异鼠李素 3-O-葡萄糖苷 , 槲皮素 3-O-芸香苷和槲
皮素 3-O-葡萄糖苷购自 Extrasynthése (Genay , 法
国)。内标根皮素购自 Sigma-Aldrich公司 (Stein-
heim , 德国)。异鼠李素 3-O-β-D-槐糖苷-7-O-α-鼠
李糖苷由核磁共振仪效验 (RÖsch et al. , 2003),
由柏林技术大学的 Kroh and RÖsch赠送。
1. 3　黄酮醇苷的提取
取 20g 解冻的浆果 , 加人甲醇和乙酸
(99. 8%)的混合液 , 按 14∶1 混合 , 使总体积
达 60mL。匀浆两分钟 , 混合液过滤 , 收集滤液
备用。滤渣加 50mL 甲醇 、 水和乙酸按70∶30∶5
的比例混合 , 匀浆 1min , 过滤。再提取 2 次。
蒸发后 , 滤渣溶于 25mL 甲醇和 10mL 甲醇溶液
添加 2mL 内标根皮苷溶液 (1. 00mg /mL)。该
溶液蒸发至干并溶于 10mL 水中 。
1. 4　黄酮醇苷的纯化
将提取物 1g 置于聚酰胺筒内加甲醇 20mL
22　 三种沙棘 ( 海滨沙棘 、 中国沙棘 、 蒙古沙棘 )果实的黄酮醇苷成分 　 第 4 期
和水 60mL 进行纯化。水除去极性化合物之后 ,
黄酮醇苷部分加入 40mL 甲醇来收集 。这部分溶
液蒸发至干 , 溶于甲醇 , 过滤 , 并在 - 20℃下贮
存。每个浆果样品重复提取并纯化 , 用高效液相
-DAD色谱仪分析两次 。
1. 5　黄酮醇苷的高效液相-DAD色谱分析
高效液相-DAD 色谱仪由岛津 SIL-10A 自动
进样器 、 样品冷却器 、两个 CTO-10A 泵 、 CTO-
10A 柱槽 、 SPD-M10AVP 二极管組探测器和
SCL10AVP 中央单元组成 (日本京都岛津公司)。
一个 Phenomex Prodigy ODS 5μ(3) 柱子 (250×
4.60mm , 粒子大小 5μm)用于分析 。流出物由水
-四氢肤腩 (THF)-三氟醋酸 (TFA)(98∶2∶
0.1)(溶剂 A)和乙睛 (溶剂 B) 组成 。用于糖苷
分析的梯度见表 1。流出物的流速是 1mL /min。
探测器波长是 270nm 和 370nm , 注入样品量
10μL。基于注入的标准品和吸收光谱鉴定样品。
1. 6　黄酮醇苷的分离和酶水解
用高效液相-DAD色谱仪分析的 5个主要糖
苷被分离出来并用同样的方法再分析以验证组分
的纯度。用干的氮气流把糖苷组分蒸发至干 , 剩
渣用 1 mL0. 1M 醋酸盐缓冲液 (pH 值 4. 6)溶
解。将 10μLβ-葡萄糖苷酶溶液 (活性 640nkat /mL)
加入溶液 , 样品在 45℃下保温 5h 。水解过的样
品用干的氮气蒸发至干。把剩渣中的苷元溶于
1mL<的甲醇并过滤。
1. 7　黄酮醇苷元的分析
苷元的分析按苷元梯度用高效液相色谱仪进
行 (表 1)。
表 1　用于高效液相-DAD色谱仪分析的梯度
糖苷梯度Glycoside g radient 苷元梯度 Aglycone g radient
T (min) B (%) T (min) B (%)
0 ～ 2 15 0～ 2 10
2 ～ 14 15～ 25 2 ～ 25 10～ 30
14 ～ 19 25 25～ 35 30～ 50
19 ～ 24 25～ 60 35～ 40 50～ 90
24 ～ 28 60 40～ 45 90
28 ～ 30 60～ 90 45～ 50 90～ 10
30 ～ 35 90 50～ 60 10
35 ～ 40 90～ 15
40 ～ 50 15
2　结果和讨论
图 1给出了海滨沙棘果实的类黄酮苷色谱
图。图中 5个主要的糖苷用 1-5数字表示 。高效
液相色谱仪能把这 5个糖苷的峰与其他峰很好地
区分出来 。根据保留时间 , 同时注入的标准化合
物 , 糖苷的 DAD-光谱 , 从组分中酶水解分离出
来的苷元鉴定出类黄酮苷的成分 。黄酮醇苷的
DAD-光谱与苷元分析说明这 5 种糖苷的合理
纯度 。
图 1　海滨沙棘果实的类黄酮苷色谱图
2006 年 12 月第 4 卷第 4 期 国际沙棘研究与开发 23　
　　图 1中列出的 5个化合物分别是:1-异鼠李
素 3-槐糖苷-7-鼠李糖苷 , 2-槲皮素 3-O-芸香苷 ,
3-槲皮素 3-O-葡萄糖苷 , 4-异鼠李素 3-O-芸香
苷 , 5-异鼠李素 3-O-葡萄糖苷。6-根皮苷 (內
标)。很少量的山萘酚可能掩蔽在异鼠李素 3-O-
葡萄糖苷和异鼠李素 3-O-芸香苷的峰下面 。
为了验证 5个糖苷峰的苷元部分的纯度 , 每
个峰内的组分再由高效液相色谱柱分离出来 。对
海滨沙棘的黄酮醇苷进行了彻底的研究 。每个收
集的组分用正常的程序再分析以便确认收集物是
正确的。经酶水解后 , 其苷元部分用高效液相色
谱仪进行分析 。糖苷峰 1 、 4 和 5分离出分别为
100%, 100%和 95%的异鼠李素 。糖苷峰 2和 3
分离出分别为 98%和 95%的槲皮素 。
在做糖苷的大量分析时 , 根皮苷用来作内
标。在高效液相色谱分析中 , 糖苷的较正因数分
别是:异鼠李素 3-O-芸香苷-1. 0 , 异鼠李素 3-
O-葡萄糖苷--0. 70 , 槲皮素 3-O-芸香苷--0. 90 ,
槲皮素 3-O-葡萄糖苷--0. 72 。
对异鼠李素 3-槐糖苷-7-鼠李糖苷来说 , 较
正因数用 1 , 因为缺少分离出来的糖苷做较正因
数测定。
不同亚种沙棘的黄酮醇苷含量见表 2。海滨
沙棘和中国沙棘是具有 5种最丰富的黄酮醇苷。
蒙古沙棘果实含有很少量的异鼠李素 3-槐糖苷-
7-鼠李糖苷。在本研究中一些未曾研究过的其他
糖苷还很丰富 , 这些未知的黄酮醇苷部分可以在
图一中看到。因为缺少已知的响应因数 , 高效液
相色谱不能给出它们的成分名称来 。
表 2　3 种沙棘果实中黄酮醇苷含量 , 以 mg/kg和总黄酮醇的百分数表示
化合物名称 海滨沙棘 中国沙棘 蒙古沙棘
异鼠李素 3-槐糖苷-7-鼠李糖苷 252±22(31. 6±1. 9) 84. 4±6. 1(11. 1±0. 6) 17. 3±3. 3(4. 9±0. 7)
异鼠李素 3-O-芸香苷 47. 2±3. 0(5. 9±0. 2) 55. 6±3. 0(7. 3±0. 6) 33. 6±5. 7(9. 4±1. 1)
异鼠李素 3-O-葡萄糖苷 30. 2±2. 1(3. 8±0. 2) 44. 5±3. 0(5. 9±0. 3) 36. 9±5. 8(10. 3±0. 8)
槲皮素 3-O-芸香苷 69. 7±5. 5(8. 7±0. 5) 63. 9±2. 8(8. 4±0. 7) 23. 3±2. 9(6. 6±0. 9)
槲皮素 3-O-葡萄糖苷 121±8. 0(15. 1±0. 7) 167±6. 1(22. 0±2. 2) 50. 1±7. 0(14. 1±2. 1)
总计 799±30 763±81 362±85
　　海滨沙棘果实中的异鼠李素 3-槐糖苷-7-鼠
李糖苷含量最高 , 不管它釆自何地或何时釆收
(实验结果待发表)。早在 60多年前 , Biehlig 就
证明了沙棘果实中存在异鼠李素 (Biehlig ,
1944)。1963 年 , Friedrich 报告说异鼠李素 3-
O-葡萄糖苷和异鼠李素 3-O-芸香苷是沙棘果实
中典型的化合物 (Friedrich , 1963)。众所周知 ,
除了异鼠李素和槲皮素糖苷以外 , 沙棘果实中
还有山萘酚和杨梅素糖苷 (Hoerhammer et al. ,
1966;Rö sch et al , 2003)。2003年 Rö sch e t al.
做了一个最可靠的研究 , 他们用核磁共振技术
测定了主要成分异鼠李素 3-槐糖苷-7-鼠李糖苷
的结构从而验证了这一成分的存在。据我们所
知 , 商业上最重要的沙棘种类海滨沙棘 、 中国
沙棘和蒙古沙棘的黄酮醇苷的比较研究还没有
报道过。
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Vol 29 (3):225-229.
Flavonol Glycosides of Berries of Three
Seabuckthorn Subspecies , Hippophae
rhamnoides ssp. sinensis and ssp.mongolica
Tu Xiaoning
1 , Bai Jing2 , Zhang chun2
(1.China National A dministration Center f or Seabuchthorn Derelopment , Bei j ing　100038;
2.Wuqi County Forest Stat ion , Wuqi 　717600　shaan xi)
Abstrcat:Flavonol gly co sides of seabuckthorn (Hippophae rhamnoides L. ) berries we re sepa rated by
RP-HPLC-DAD analysis and identified by reference compounds. Glycoside f ract ions w ere hydrolyzed
byβ-gly co sidase and the agly cones identif ied , again , by HPLC and reference compounds. A ll the three
subspecies investigated (ssp.mongolica , ssp. rhamnoides , ssp. sinensis) contained the same majo r
flavonoid g lycoside species , the low est total contents ex ist ing regularly in the mongolica berries. The
major ag lycon w as isorhamne tin fo llow ed by quercetin w ith minor amounts of kaempfero l. The flavo-
nol gly co sides , such as f lavonol 3-O-rutinosides , 3-O-g luco sides and 3-O-sophoro side-7-rhamnoside s
were determined to distinguish between the three subspecies.
Key words:Flavonol gly cosides;Hippophae rhamnoides ;i sorhamnetin;kaemphero l;quercetin;sea-
bucktorn