全 文 ：浙江中医药大学学报 2013年 10月第 37卷第 10期
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2013
中
药
研
究
山核桃叶总黄酮苷元抗炎镇痛作用的研究
张坤 沈勇 徐敏 刘楠楠 田莎莎 金波 蒋福升 杨汝春 丁志山
浙江中医药大学 杭州 310053
摘要：[目的]研究山核桃叶总黄酮苷元的抗炎镇痛作用。[方法]将 60只小鼠随机分为空白组，溶媒对照组，阴性组，山核桃叶总黄酮低、中、高剂量
组。采用小鼠扭体实验和小鼠福尔马林实验研究山核桃叶总黄酮苷元的镇痛作用，通过小鼠耳廓肿胀实验和棉球肉芽肿胀实验研究山核桃叶总
黄酮苷元的抗炎作用。[结果]山核桃叶总黄酮苷元中剂量组、高剂量组能明显减少醋酸致小鼠扭体次数；对福尔马林引起的小鼠疼痛也有明显的
抑制作用；高剂量组对二甲苯致小鼠耳廓肿胀、棉球致小鼠肉芽肿胀均有明显的抑制作用。[结论]山核桃叶总黄酮苷元具有明显的抗炎镇痛作用。
关键词：山核桃；总黄酮苷元；抗炎；镇痛
中图分类号：R331 文献标识码：A 文章编号：1005-5509（2013）10-1226-04
Study on Anti-inflammatory and Analgesic Effects of Total Flavonoid Aglycon from Leaves of Carya Cathayensis Sarg Zhang Kun, Shen Yong, Xu
Min, et al Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou (310053)
Abstract:[Objective]To study the analgesic effect and anti-inflammatory effect of the total flavonoid aglycon from leaves of Carya Cathayensis Sarg.
[Methods] 60 mice were randemly divided into control group, medium group, positire group, the low, middle and high groups. Dimethyl benzene-in－
duced acute ear swelling model and cotton ball induced increased granulation swelling model were carried out to observe the anti-inflammatory effects of
the total flavonoid aglycon from leaves of Carya cathayensis Sarg. And the analgesic effect of the total flavonoid agalycon was evaluated by pain experi－
ments induced by glacial acetic acid and formalin in mice.[Results]The total flavonoid aglycon from leaves of Carya Cathayensis Sarg.(25 mg·kg-1, 50 mg·
kg-1) could significantly relieve the pain caused by glacial acetic acid and by formalin. It also showed obvious inhibitory effects on the increased granulation
swelling induced by cotton ball, and dimethyl benzene-induced ear swelling in mice on the dosage 50 mg·kg-1. [Conclusion]The total flavonoid aglycon
from leaves of Carya Cathayensis Sarg showed anti-inflammatory and analgesic effects in the study.
Key words: Carya Cathayensis Sarg; total Flavonoid aglycon; anti-inflammatory; analgesic
山核桃（Carya Cathayensis Sarg.）是胡桃科山核
桃属的一种落叶乔木，约有 20个种，我国为主产地
之一[1]。山核桃作为一种药食两用的植物，近年来受
到研究者的广泛关注，本实验室长期从事山核桃叶
的研究工作，并从中分离鉴定出含量较高的 5种黄
酮苷元物质，分别是汉黄芩素、白杨素、球松素查尔
酮、小豆蔻明和松属素[2]。经过进一步的研究发现，山
核桃叶总黄酮苷元具有抑制 HepG2细胞增殖[3]、抗心
肌缺血和抗氧化等药理生理活性。国内外有文献报
道黄酮类化合物具有一定的抗炎镇痛作用，但尚未
见山核桃叶总黄酮苷元相关的报道。因此，本实验在
前期对山核桃叶总黄酮苷元研究的基础之上，进一
步对其药理活性进行研究探讨，证实山核桃叶总黄
酮苷元具有抗炎镇痛的疗效。并为以后开发利用山
核桃叶黄酮苷元提供相关的依据。
1 材料
1.1 试验药物 山核桃叶采自浙江省临安市，经浙
江中医药大学生命科学学院丁志山教授鉴定，山核桃
叶为胡桃科（Juglandaceae）山核桃属植物山核桃（Carya
Cathayensis Sarg.）的叶子。山核桃叶干粉用 95%的乙
醇提取，提取液用聚酰胺树脂吸附，40%乙醇洗脱，回
收蒸干乙醇即得受试药物。HPLC检测[4]里面含有的 5
种黄酮苷元化合物（汉黄芩素、白杨素、球松素查尔
酮、小豆蔻明和松属素），且总黄酮苷元含量为 50%。
受试药物用 1%的吐温 80 生理盐水溶液溶解，
得山核桃叶总黄酮苷元试药。阿司匹林（沈阳奥吉娜
药业有限公司，批号：101003），吐温 80（Sigma 公司，
批号：085K00961）。
1.2 动物 ICR小鼠，雄性，体重 18~22g，购于浙江
省医学科学院。动物实验条件合格证：SYXK(浙 )
2008-0115；许可证：SCXK(沪)2008-0016。
1.3 试剂 冰乙酸（AR，杭州化学试剂有限公司，批
号：20091128），多聚甲醛(国药集团化学试剂有限公
司，批号：F20090113)，其他试剂均为市售分析纯。
————————
基金项目：国家自然科学基金（81303258）；浙江省卫生厅科研基金(2012KYB136)；浙江省大学生科技创新活动计划资助项目
(2012R410057)。
Fund Project: National Natural Science Foundation of China(81303258); Research Fund of Zhejiang Provincial Ministry of
Health(2012KYB136); Funded Project of College Students’ Science and Technology Innovation Activities in Zhejiang Province
(2012R410057).
通讯作者：丁志山，Email:zjtcm@163.com
1226
DOI:10.16466/j.issn1005-5509.2013.10.026
浙江中医药大学学报 2013年 10月第 37卷第 10期
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总
黄
酮
苷
元
抗
炎
镇
痛
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用
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1.4 仪器 万分之一精密电子天平（AR2130 Ohaus
Corp.Pine Brook，NJ,USA）、打耳器（山东省医学科学
院设备站）、恒温干燥箱（DGG-9070A型，上海森信实
验仪器有限公司）。
2 实验方法
2.1 实验动物分组方法 实验动物采用随机单位组
设计分组法。将 60只小鼠分为 6组，按体重从轻到
重依次编号 1、2、3…60号。1~6号为一配伍组，7~12
号为一配伍组，依次类推。从随机数字表中任一行任
一列自左向右每抄录 5个数字留一空位，将随机配
伍组的 5个随机数，依次以 6、5、4、3、2除之，余数为
1的归第 1组，余数为 2的归第 2组，余数为 3的归
第 3组，余数为 4的归第 4组，余数为 5的归第 5组，
除尽的归第 6组。
2.2 对醋酸致小鼠扭体反应的影响 参照文献的方
法[5,6]，选取 18~22g小鼠 60只，雄性，随机分为 6组，
每组 10只。即空白组、溶媒对照组、阳性组、山核桃
叶总黄酮苷元低、中、高剂量组。灌胃（ig）给药，每只
0.4mL，空白组给予生理盐水，溶媒对照组给予 1%吐
温 80生理盐水，阳性组给予阿司匹林，给药剂量为
100mg·kg-1，浓度为 5mg·mL-1，山核桃叶总黄酮苷元
低、中、高剂量组的给药剂量分别为 12.5mg·kg-1、25
mg·kg-1、50mg·kg-1，药物浓度分别为 0.625mg·mL-1、
1.25mg·mL-1、2.5mg·mL-1，1次/d，连续 7d，末次给药
30min后每只小鼠腹腔注射 0.7%的新鲜配制冰醋酸
溶液 0.01mL·g-1，观察并记录 15min内小鼠扭体（腹部
凹陷，后肢伸展）次数，同时计算各组扭体抑制率。
扭体抑制率（%）=[1-（给药组扭体反应次数/溶媒
对照组扭体反应次数）]×100%
2.3 对福尔马林致小鼠疼痛的影响 参照文献的方
法[7,8]，选取 18~22g小鼠 60只，雄性，随机分为 6组，
每组 10只。即分为：空白组、溶媒对照组、阳性组、山
核桃叶总黄酮苷元低、中、高剂量组。灌胃（ig）给药，
每只 0.4mL，空白组给予生理盐水，溶媒对照组给予
1%吐温 80生理盐水，阳性组给予阿司匹林，给药剂
量为 100mg·kg-1，浓度为 5mg·mL-1，山核桃叶总黄酮
苷元低、中、高剂量组的给药剂量分别为 12.5mg·kg-1、
25mg·kg-1、50mg·kg-1，药物浓度分别为 0.625mg·mL-1、
1.25mg·mL-1、2.5mg·mL-1，1 次/d，连续 7d，末次给药
30min 后小鼠右足底皮下注射 2.5%的福尔马林
10μL，将小鼠舔、咬右爪的时间长度作为疼痛反应的
指标。观察并记录小鼠注射福尔马林后 0~5min（第一
时期）和 15~30min（第二时期）的反应时间。
2.4 对二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀的影响 参照文献
的方法[9,10]，选取 18~22g小鼠 60只，雄性，随机分为 6
组，每组 10只。即分为：空白组、溶媒对照组、阳性组、
山核桃叶总黄酮苷元低、中、高剂量组。灌胃（ig）给
药，每只 0.4mL，空白组给予生理盐水，溶媒对照组给
予 1%吐温 80生理盐水，阳性组给予阿司匹林，给药
剂量为 100mg·kg-1，浓度为 5mg·kg-1，山核桃叶总黄
酮苷元低、中、高剂量组的给药剂量分别为 12.5mg·
kg-1、25mg·kg-1、50mg·kg-1，药物浓度分别为 0.625
mg·mL-1、1.25mg·mL-1、2.5mg·mL-1，1次/d，连续 7d，
末次给药 30min后在小鼠右耳廓两面用微量进样器
均匀涂抹二甲苯 20μL致炎，30min后脱颈椎处死小
鼠，将小鼠两耳齐根剪下，用直径 6mm的打孔器将小
鼠双耳相同部位打孔，分别称重，计算耳肿胀度和肿
胀抑制率。
肿胀抑制率（%）=[1-（给药组两耳片重量差/溶媒
对照组两耳片重量差）]×100%
2.5 对棉球诱导小鼠肉芽组织增生的影响 参照文
献的方法[11,12]，选取 18~22g小鼠 60只，雄性，随机分
为 6组，每组 10只。即分为：空白组、溶媒对照组、阳
性组、山核桃叶总黄酮苷元低、中、高剂量组。用戊巴
比妥钠麻醉小鼠，剂量为 30mg·kg-1，脱去小鼠腹股部
鼠毛，用酒精消毒，在无菌条件下用手术刀在小鼠腹
股部切一小口，用眼科镊子将高压灭菌的棉球（棉球
重量为 8±0.2mg）从切口处植入皮下，随即缝合皮肤，
并在伤口外部涂上 10mg·mL-1的青霉素。术后 24h开
始灌胃（ig）给药，每只 0.4mL，空白组给予生理盐水，
溶媒对照组给予 1%吐温 80生理盐水，阳性组给予
阿司匹林，给药剂量为 100mg·kg-1，浓度为 5mg·mL-1，
山核桃叶总黄酮苷元低、中、高剂量组的给药剂量分
别为 12.5mg·kg-1、25mg·kg-1、50mg·kg-1，药物浓度分
别为 0.625mg·mL-1、1.25mg·mL-1、2.5mg·mL-1，每日 1
次，连续 7d，末次给药 24h后，处死小鼠，打开切口，
将棉球连同周围结缔组织一起取出，剔除脂肪组织，
恒温 60℃干燥 12h取出，分析天平称重，将称得的重
量减去棉球原先的重量即为肉芽肿重量，并计算肉芽
肿抑制率。
肉芽肿抑制率（%）=[1-（给药组棉球重量/溶媒对
照组棉球重量）]×100%
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浙江中医药大学学报 2013年 10月第 37卷第 10期
2.6 数据处理 实验结果以平均数±标准差（x±s）的
形式表示，采用 t检验，用 SPSS软件处理。
3 实验结果
3.1 对醋酸致小鼠扭体反应的影响 山核桃叶总黄
酮苷元中剂量组和高剂量组均能显著地减少醋酸引
起的小鼠扭体次数，与溶媒对照组相比，P<0.05，差异
具有统计学意义，表明其对醋酸引起小鼠疼痛有显著
的抑制作用，而中剂量组小鼠扭体抑制率仅为24.45%，
与溶媒对照组相比无统计学差异（见表 1）。可见，山
核桃叶总黄酮苷元对醋酸引起的小鼠扭体反应呈剂
量正相关。
3.2 对福尔马林致小鼠疼痛的影响 在注射福尔马
表 1 山核桃叶总黄酮苷元对醋酸致小鼠扭体反应的影响（x±s，n=10）
Tab. 1 The effect of the total flavonoid aglycon from leaves of Carya cathayensis Sarg on pain experiment by
glacial acetic acid（x±s，n=10）
组别 剂量（mg·kg-1） 扭体次数（次） 扭体抑制率（%）
空白组
溶媒对照组
阳性组
低剂量组
中剂量组
高剂量组
―
―
100
12.5
25
50
30.00±7.37
27.4±4.22
11.1±2.85**
24.4±5.82
20.6±2.54**
11.9±2.92**
―
―
59.49
10.95
24.45
56.57
注：α=0.05，与空白组和溶媒对照组比较，**P﹤0.01。
Note: α=0.05, compared with control group and medium group，**P﹤0.01.
林后第一时期和第二时期，山核桃叶总黄酮苷元中剂
量组和高剂量组均能明显缩短小鼠舔足时间，经过统
计学分析，P﹤0.01，具有统计学意义。表明其对福尔
马林引起的小鼠疼痛有明显的抑制作用；低剂量组与
溶媒对照组相比无统计学差异（见表 2）。山核桃叶总
黄酮苷元对福尔马林致小鼠疼痛效应，与醋酸扭体反
应效应基本一致，也呈一定的剂量正相关性。
3.3 对二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀的影响 山核桃叶
表 2 山核桃叶总黄酮苷元对福尔马林致小鼠疼痛的影响（x±s，n=10）
Tab. 2 The effect of the total flavonoid aglycon from leaves of Carya cathayensis Sarg on pain experiment by Formalin
（x±s，n=10）
组别 剂量（mg·kg-1） 第一时期舔足时间（s） 第二时期舔足时间（s）
空白组
溶媒对照组
阳性组
低剂量组
中剂量组
高剂量组
―
―
100
12.5
25
50
84.20±8.99
83.50±7.65
72.20±5.09*
79.40±9.90
60.90±7.69**
49.50±5.32**
102.70±12.21
101.10±8.40
56.00±5.85**
97.80±8.16
79.10±5.57*
61.6±6.31**
注：α=0.05，与空白组和溶媒对照组比较，*P﹤0.05，**P﹤0.01。
Note: α=0.05, compared with control group and medium group，*P﹤0.05，**P﹤0.01.
总黄酮苷元高剂量组能显著抑制由二甲苯诱导的小
鼠耳廓肿胀，中剂量组能有效抑制由二甲苯诱导的小
鼠耳廓肿胀，经统计学分析，均有统计学意义，低剂量
组与溶媒对照组相比无统计学差异（见表 3），且剂量
效应明显呈现正相关性。
3.4 对棉球诱导小鼠肉芽组织增生的影响 山核桃
叶总黄酮苷元高剂量组能显著抑制由棉球诱导的小
鼠肉芽组织增生，中剂量组能有效抑由棉球诱导的小
鼠肉芽组织增生，经统计学分析，均有统计学意义，低
剂量组与溶媒对照组相比无统计学差异（见表 4），且
剂量效应明显呈现正相关性。
4 讨论
炎症是具有血管系统的活体组织对局部损伤所
发生的一种以防御为主的组织反应。在一般的炎症过
程中，早期以变质和渗出为主，局部症状有红、肿、热、
痛和功能障碍[13]。本实验是为了验证山核桃叶总黄酮
苷元是否具有抗炎镇痛的作用。查阅文献发现黄酮类
化合物具有类雌激素的作用[14]，故为避免雌激素对本
实验的影响，实验选用的小鼠均为雄性。醋酸扭体法
和福尔马林致小鼠疼痛是常用的选取镇痛药物的模
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表 3 山核桃叶总黄酮苷元对二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀的影响（x±s，n=10）
Tab. 3 The effect of the total flavonoid aglycon from leaves of Carya cathayensis Sarg on Dimethyl benzene-induced acute ear
swelling（x±s，n=10）
组别 剂量（mg·kg-1） 耳肿胀度（mg） 肿胀抑制率（%）
空白组
溶媒对照组
阳性组
低剂量组
中剂量组
高剂量组
―
―
100
12.5
25
50
8.98±1.36
8.23±1.58
2.19±0.87**
7.25±10.71
6.82±1.15*
2.72±1.42**
―
―
73.39
11.91
17.13
66.95
注：α=0.05，与空白组和溶媒对照组比较，*P﹤0.05，**P﹤0.01。
Note: α=0.05, compared with control group and medium group，*P﹤0.05，**P﹤0.01.
组别 剂量（mg·kg-1） 肉芽肿重量（mg） 肉芽肿抑制率（%）
空白组
溶媒对照组
阳性组
低剂量组
中剂量组
高剂量组
―
―
100
12.5
25
50
16.54±3.55
16.04±4.07
6.92±2.28**
14.35±1.44
13.03±2.33*
8.61±1.60**
―
―
56.86
10.53
18.77
46.32
注：α=0.05，与空白组和溶媒对照组比较，*P﹤0.05，**P﹤0.01。
Note: α=0.05, compared with control group and medium group，*P﹤0.05，**P﹤0.01.
表 4 山核桃叶总黄酮苷元对棉球诱导小鼠肉芽组织增生的影响（x±s，n=10）
Tab. 4 The effect of the total flavonoid aglycon from leaves of Carya cathayensis Sarg on cotton ball-induced increased
granulation swelling（x±s，n=10）
型；二甲苯致小鼠耳廓肿胀为急性炎症，而棉球致小
鼠肉芽增生为慢性炎症，故实验选用这几种模型来
评价山核桃叶总黄酮苷元。
由实验结果发现随着受试药物剂量的加大，抗炎
镇痛的效果也相应变得明显，均呈现剂量正相关性。
本实验的受试药物为黄酮苷元，由于苷元的水溶性
差，实验采用 1%的吐温 80生理盐水溶解，随着受试
药物（山核桃叶总黄酮苷元）浓度的加大，给药以后，
小鼠对药物的吸收导致其血药浓度增加，因此
12.5mg·kg-1低剂量的山核桃叶总黄酮苷元的抗炎镇
痛效果没有 25mg·kg-1和 50mg·kg-1效果明显。具体的
药物在小鼠体内的吸收代谢需进一步的研究探讨。
山核桃叶作为被废弃的材料无法得到科学合理
的利用，这样不仅造成资源的极大浪费，而且会污染
环境。本实验充分利用了“废料”，并从中发现有药用
价值的黄酮类化合物，并且证实了山核桃叶总黄酮
苷元具有良好的抗炎镇痛疗效，为以后开发利用山
核桃叶黄酮提供了相关依据。
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（收稿日期：2013-06-21）
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(收稿日期：2012-12-01） 陈
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