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实
验
研
究
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山核桃叶不同萃取物及 DHMC
对大鼠胸主动脉条收缩功能的影响
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★ 刘彩霞 蒋福升 丁滨 陈铌铍 黄艳芬 金波 丁志山 (浙江中医药大学 浙江 杭州 310053)
摘要:目的:研究山核桃叶 95%醇提物不同萃取层和黄酮单体 2＇，6＇－二羟基 － 4＇－甲氧基查耳酮(DHMC)对大鼠胸主动脉条
收缩功能的影响并探讨 DHMC的作用机理。方法:采用离体血管环灌流装置，观察不同受试药物对大鼠胸主动脉条收功能的
影响判断其舒张血管的作用。结果:山核桃叶各萃取层对去甲肾上腺素(NE)100 nmol /L 预收缩的大鼠离体胸主动脉条的影
响作用各不相同:水层和正丁醇层基本无作用，石油醚和氯仿层具有一定舒张动脉条作用且氯仿层作用较强，而乙酸乙酯层
具有加强血管收缩作用;DHMC对 NE和 KCl预收缩的动脉条都有明显的舒张血管作用。结论:山核桃叶中同时具有收缩和
舒张血管的化学成分，其中山核桃叶中含量较高的黄酮类化合物 DHMC舒张血管效应明显，其作用机制可能与抑制细胞外钙
内流及抑制细胞内储存钙的释放有关。
关键词:山核桃叶;胸主动脉;黄酮类化合物;舒张;心血管疾病
中图分类号:Ｒ284． 1 文献标识码:A
Study on the Effects of Different Extracts from C． cathayensis Sarg． Leaves and DHMC on
Ｒat Thoracic Aorta Shrinkage
HU Xu － jiao，CHEN Lin，LIN Shao － hua，DING Bin，CHEN Ni － pi，JIANG Fu － sheng，JIN Bo，DING Zhi － shan
Zhejiang Chinese Medical University，Hangzhou 310053，China．
Abstract:Objective:To investigate the effects of 95% alcohol extract of different extraction layers from C． cathayensis Sarg． leaves on
rat thoracic aorta shrinkage． The effect and mechanism of 2，6 － dihydroxy － 4 － methoxy chalcone (DHMC)，the main compound
in flavonoids，on rat thoracic aorta shrinkage are also to be detected． Methods:In vitro vascular ring perfusion device was used to ob-
serve the effects of different drugs on rat thoracic aorta shrinkage and determine their diastolic roles． Ｒesults:Different extracts from C．
cathayensis Sarg． leaves had different effects on 100 nmol /L norepinephrine (NE)preshrinkaged rat thoracic aorta:extracts from the
water and butanol layers hardly had effects;extracts from the petroleum ether and chloroform layers had diastolic roles on rat thoracic a-
orta while the chloroform layer showed a stronger effect;the ethyl acetate layer could strengthen the contraction of blood vessels． DHMC
could significantly diastole blood vessels on NE and KCl preshrinkaged aorta． Conclusion:Some chemical components from C． cathay-
ensis Sarg． leaves could shrinkage and diastole blood vessels，among which DHMC had an obvious effect of vasodilation，which might
be related with the inhibition of extracellular calcium internal flow and the release of intracellular calcium storage．
Key words:C． cathayensis Sarg． Leaves;Thoracic Aorta;Flavonoids Compounds;Ｒelaxation;Cardiovascular Disease
山核桃(Carya cathayensis Sarg．)为我国的特有
树种，属胡桃科山核桃属，是浙江省临安地区最主要
的经济林木。山核桃具有解毒、消肿等药效，临床多
用于脚痔、皮肤廯症等，同时又有很高的营养、保健
价值［1］。山核桃叶片中含有糖、鞣质、酚类、有机
酸、黄酮类、蒽醌类、强心苷类、三萜类及皂苷等物
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江 西中医药大学学报2014年12月第26卷第6期
JOUＲNAL OF JIANGXI UNIVEＲSITY OF TCM 2014 Vol. 26 No. 6
* 基金项目:浙江中医药大学科研基金项目;国家自然科学基金项目(81303258);浙江省卫生厅科研计划项目(2013KYB136)。
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质，它具有清热解毒、抗癌、杀菌、中暑导致的发热，
并可减轻风湿疼痛［2］。众多研究表明，黄酮类化合
物是一类天然有机化合物，其生物活性多种多样，分
布广泛，部分植物中含量很高，研究发现黄酮在山核
桃叶中含量非常高，本实验室一直从事山核桃叶相
关研究，并从其中分离鉴定出 2＇，6＇－二羟基 － 4＇－甲
氧基查耳酮(DHMC)［3］，其含量高达 0． 79%［4］，所
以有必要对山核桃叶中化学物质的作用进一步研
究，尤其是黄酮类物质。目前，国内外对山核桃的研
究主要集中于对其植物形态分类、栽培、山核桃仁营
养价值等方面，尚未发现对山核桃叶中化学成分对
心血管疾病治疗方面的研究报道。因此本研究针对
山核桃叶醇提不同萃取层物质及含量较高的黄酮类
物质 DHMC对大鼠胸主动脉收缩功能的影响进行
研究，为山核桃叶的开发利用提供理论依据［5 － 17］。
1 材料
1． 1 动物 SD 大鼠，雄性，体重 200 ± 20g，由浙江
中医药大学动物实验中心提供［动物合格证号:
SYXK(浙 2003 － 0003)］。
1． 2 器材 精密电子天平(型号:AＲ520，奥豪斯国
际贸易(上海)有限公司);张力换能器(高碑店市新
航机电设备有限公司);计算机实时分析系统或自
动平衡记录仪(成都仪器厂);数码相机(型号:DSC
－ V3，索尼公司);旋涡混合器(型号:XW － 80A，上
海精科实业有限公司);超级恒温水浴(宁波新芝生
物科技股份有限公司)。
1． 3 药物与试剂 去甲肾上腺素(Norepinephrine，
NE)(Sigma产品);维拉帕米(张家口云峰制药厂);
氢氧化钠，氯化钠，氯化钾，氯化钙，硫酸镁，磷酸二
氢钾，碳酸氢钠，葡萄糖，EDTA(国药集团化学试剂
有限公司)，DHMC(实验室自制，经 NMＲ 鉴定其结
构，HPLC峰面积归一化法检测其含量 99． 5%)。
山核桃叶采自浙江临安，经浙江中医药大学丁
志山教授鉴定为山核桃(Carya cathayensis Sarg．)的
树叶。
1． 4 实验主要试剂配制
1． 4． 1 Krebs 液 NaCl 6． 8968g;KCl 0． 3541g;
CaCl2 0． 2647g;MgSO4 0． 144g;KH2PO4 0． 1633g;
NaHCO3 2． 1g;Glucose 2． 1g，PH7． 4。
1． 4． 2 无 Ca2 + Krebs 液 按照正常 Krebs 液中去
掉 CaCl2，加入 0． 01mmol /L EDTA。
1． 4． 3 无 Ca2 +高 K + Krebs液 为无 Ca2 + Krebs液
中含有 K + 40mmol /L。
1． 4． 4 实验样品的制备 取适量山核桃叶干品粉
碎过 40 目筛，称取 200g，加入 2 000mL 95%乙醇。
室温下浸泡 1 h，再加热回流提取 2 次，每次 1 h，过
滤，合并 2 次滤液。滤液于 45℃减压回收至干，得
山核桃叶乙醇粗提物，再用 200mL 蒸馏水混悬，分
别用等体积的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇各萃取 4
次，合并萃取液，剩余部分为水部分，各萃取部分减
压回收至干，即得山核桃叶各部分萃取物，实验前以
生理盐水溶解。DHMC为实验室前期实验分离纯化
所得［3］，同样实验前以生理盐水溶解。
2 实验方法［18］
2． 1 胸主动脉条制备 大鼠击枕致昏，沿胸骨左缘
纵向剖开胸腔，暴露心脏及大血管。剪下胸主动脉
降支，置于盛有经氧饱和的 Krebs液的平皿中，冲洗
至无血迹，剔除多余的脂肪和结缔组织。用细剪将
主动脉剪成长约 15mm，宽约 2． 5mm 的螺旋条。将
实验标本下端固定于浴槽挂钩上，游离端用细线悬
吊于张力传感器的力臂上。浴槽内的 Krebs 液保持
37℃，浴槽容积保持于 20mL。营养液中饱和供应
95%O2 + 5% CO2 的混合气体，标本负荷 19g，每 15
～20min换液 1 次，平衡 1． 5h 后开始实验。动脉条
收缩通过肌张力传感器记录在 MS4 000U 记录仪
上。
2． 2 不同浓度的山核桃叶各萃取物对 NE 诱导大
鼠胸主动脉条收缩的影响 使溶液中累加 NE 的浓
度依次为 10 －9 － 10 －4mol /L，测定 NE 引起大鼠胸主
动脉条收缩的量 －效反应曲线。用 KrebS 液冲洗三
次，待主动脉条张力恢复正常后，平衡 30min，加入
100 nmol /L的 NE，平衡 20min后分别加入不同浓度
山核桃叶各萃取物，以 100 nmol /L 的 NE 引起的最
大收缩幅度为 100%，记录各不同浓度萃取物对动
脉条的影响。
2． 3 DHMC对 NE 诱导大鼠胸主动脉条收缩的影
响 按照蓄积技术给药，依次加入 NE，浓度由
50nmol /L累积至 250nmol /L(按 50nmol /L递增)，得
NE收缩主动脉条的量效曲线;之后用 Krebs液反复
冲洗标本，待其张力恢复至基线后 20min，分别加入
DHMC(终浓度为 3 × 10 －5 mol /L)和阳性药物 Ver
(终浓度为 5 × 10 －9mol /L)，对照组动脉条给生理盐
水(NS)，预处理 20min 后重复以上加 NE 过程。与
NS组比较 NE 的量 －效曲线。给药 50min 后以 NE
引起的最大收缩幅度为 100%记录量效曲线变化。
2． 4 DHMC 对 KCl 量 － 效反应曲线的影响 在
Krebs液中使 KCl 的累加浓度依次为 4、6、8、10、
12mmol /L，测定 KCl对大鼠胸主动脉条收缩作用的
量 －效曲线。用 Krebs 液冲洗三次后，待主动脉条
收缩恢复正常后 30min，分别加入 DHMC 3． 7 × 10 －7
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刘彩霞等:山核桃叶不同萃取物
及 DHMC对大鼠胸主动脉条收缩功能的影响
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mol /L和 Ver 7． 95 × 10 －10 mol /L。平衡 30min后，重
复测定 KCl 的量 － 效曲线，以最大收缩幅度为
100%。
2． 5 DHMC 对 CaCl2 量 －效曲线的影响 用无钙
Krebs液平衡 1． 5h，然后换入无钙高钾(4 × 10 －2
mo1 /L)溶液，使动脉条去极化，20min 后加入 10 －5
－ 10 －2mol /L 的 CaCl2，测定 CaCl2 引起收缩的量 －
效曲线。然后用无钙 Krebs 液冲洗 3 次，待主动脉
张力恢复正常后，平衡 30min，分别加入 NS、终浓度
为 3． 7 × 10 －7mol /L的 DHMC，平衡 20min 后重复上
述测 CaCl2 量 －效曲线。与 NS 组比较 CaCl2 的量
－效曲线，最大收缩幅度为 100%。
2． 6 DHMC 对血管平滑肌钙内流和钙释放的影响
动脉条在无钙 Krebs 液中平衡 1． 5h，然后加入
NE，使溶液中 NE 的浓度为 5 × 10 －6 mol /L，主动脉
条出现快速收缩反应，当达到最大张力时，加入
CaCl2 使溶液钙浓度为 3 × 10
－3 mo1 /L，主动脉条进
一步收缩。用无钙 Krebs 液冲洗 3 次，待恢复到正
常水平后，平衡 30min，换上含 3． 7 × 10 －7 mol /L 的
DHMC的无钙 Krebs液，20min后重复上述过程。
3 结果
3． 1 山核桃叶各层提取物对 NE 诱导大鼠胸主动
脉条收缩的影响 根据 2． 2 方法步骤所得数据绘制
的收缩影响曲线图 3 － 1。从图 3 － 1 中可以看到，
山核桃叶各萃取物对 NE(100nmol /L)预收缩的动
脉条影响各不相同:氯仿层、石油醚层可降低大鼠主
动脉条的收缩强度，具有一定的浓度依赖性;乙酸乙
酯层则升高其收缩强度，浓度越大收缩强度越大;水
层、正丁醇层对血管收缩几乎没影响，表明在氯仿层
与石油醚层中含有某些化学成分可舒张血管，而乙
酸乙酯层中则含有某些化学成分能促进血管收缩。
图 3 － 1 山核桃叶各萃取层
对 NE(100nmol /L)诱导大鼠胸主动脉条收缩的影响
3． 2 DHMC对 NE 诱导大鼠胸主动脉条收缩的影
响 NE与膜上特异性受体相偶联，受体控制型通道
(ＲOC)开放。DHMC可以使 NE收缩的量效曲线非
平行右移，收缩强度降低，作用性质与 Ver 相似，呈
非竞争性拮抗效应(图 3 － 2)。给药前后相比较张
力降低(表 1)，存在显著性差异(P ＜ 0． 01)。
图 3 － 2 DHMC对 NE所致的量 －效曲线的影响
表 1 DHMC对 NE诱导大鼠胸主动脉条收缩的影响(珋x ± s，n = 3)
组别 浓度(mol /L)
给药前张力
(g)
给药后张力
(g)
张力降低率
(%)
NS 0． 427 ± 0． 31 0． 431 ± 0． 11 0
DHMC 5 × 10 －5 0． 423 ± 0． 12 0． 312 ± 0． 23b 28． 37b
Ver 3 × 10 －9 0． 484 ± 0． 18 0． 228 ± 0． 31b 52． 89b
注:与给药前后比较，b 为 P ＜ 0． 01。
3． 3 DHMC对 KCl量 －效反应曲线的影响 如图
3 － 3 DHMC、Ver 对 KCl 诱导的大鼠胸主动脉条收
缩都呈现抑制作用，并使最大收缩张力降低。量 －
效曲线右移，降低和右移程度随 DHMC 和 Ver 的浓
度增加而加大，成非竞争性拮抗。
图 3 － 3 DHMC对 KCl量 －效反应曲线的影响
3． 4 DHMC 对 CaCl2 量 －效曲线的影响 DHMC
能抑制 CaCl2 诱导的大鼠胸主动脉条的收缩(图 3
－4)，使 CaCl2 收缩的量效曲线非平行右移，收缩强
度降低。
图 3 － 4 DHMC对 CaCl2 量 －效曲线的影响
表 2 DHMC对 NE诱导大鼠主动脉条
依赖细胞内钙与细胞外钙的影响(珋x ± s，n = 6)
组别
依赖内钙
给药前张力 给药后张力
依赖外钙
给药前张力 给药后张力
NS 0． 186 ± 0． 012 0． 185 ± 0． 002 0． 369 ± 0． 013 0． 371 ± 0． 027
DHMC 0． 185 ± 0． 004 0． 115 ± 0． 015b 0． 371 ± 0． 011 0． 265 ± 0． 030a
注:与给药前后比较，a 为 P ＜ 0． 05，b 为 P ＜ 0． 01。
3． 5 DHMC 对血管平滑肌钙内流和钙释放的影响
NE与膜上特异性受体相偶联，受体控制型通道
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江西中医药大学学报 2014 年 12 月第 26 卷第 6 期
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(ＲOC)开放，不仅使细胞外钙内流，还能使细胞内
的储存钙释放。DHMC对依赖 NE 诱发的两种收缩
机制均有抑制作用(表 2)(P ＜ 0． 05，P ＜ 0． 01) ，而
且对依赖细胞外钙的收缩影响更显著。
4 讨论
目前认为，细胞膜上存在两类钙通道［19］，一为
电压依赖型通道(PDC)，该通道受膜电位控制，具有
电压依赖性。当细胞膜去极化(如用高 K +液)到一
定水平时，PDC 开放，钙离子经此内流。还有一种
为受体控制型通道(ＲOC)，该通道与膜上特异性受
体相偶联，并能够被膜上受体激活。特异性受体激
动剂如 NE 与受体结合而开放，不仅使细胞外钙内
流，还能使细胞内的储存钙释放［20］。
本实验将山核桃叶醇提物分 5 个萃取层分别作
用于离体大鼠胸主动脉条，结果显示，山核桃叶氯仿
层、石油醚层总黄酮可降低大鼠主动脉条的收缩强
度，而乙酸乙酯层则升高其收缩强度，表明在氯仿层
与石油醚层中含有某些成分可舒张血管，而乙酸乙
酯层正好相反存在某些成分可促进血管的收缩作
用。
本实验还研究了山核桃叶中含量较高的黄酮类
化合物 DHMC 对血管收缩作用的影响并探讨了其
作用机制，发现 DHMC 能显著抑制高 K +液引起的
主动脉条收缩，对 KCl 和 NE 引起的主动脉条收缩
量效曲线非平行右移，使最大反应降低，作用性质与
阳性药物 Ver相似，呈非竞争性拮抗效应，表明 DH-
MC对 PDC和 ＲOC都具有拮抗作用。此外，同一浓
度的 DHMC对 NE引起的收缩反应的抑制比对 KCl
引起的收缩反应的抑制作用要强，其机制可能是对
受体性钙通道的作用较强。
观察药物对血管平滑肌 CaCl2 量效曲线的影响
是证明药物是否具有钙内流阻滞作用的直接方法。
实验同时发现 DHMC 可以通过某种途径阻滞钙离
子内流，它既可以抑制细胞外钙内流，又可以抑制细
胞内储存钙的释放，相比而言，其对细胞外钙内流阻
滞作用更加显著。
总之，血管的正常生理功能的维持和异常病理
学改变与血管上的离子通道的状态密切相关，在调
节血管张力和收缩力方面起着重要作用的离子通道
主要是 Ca2 +通道和 K +通道。DHMC 可降低 NE 和
KCl预收缩的胸主动脉环张力，影响 Ca2 +由 PDC 和
ＲOC通道进入细胞，抑制细胞内钙库释放钙，阻滞
细胞外钙内流，从而使血管平滑肌舒张，这一机制的
发现丰富了黄铜类化合物在心血管系统方面的药理
作用的同时也为山核桃叶的开发利用提供了科学的
理论依据。
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(收稿日期:2014-02-17)编辑:王河宝
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刘彩霞等:山核桃叶不同萃取物
及 DHMC对大鼠胸主动脉条收缩功能的影响