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断肠草提取物对小鼠的急性毒杀研究



全 文 :【论著】 中图分类号:R184.35  文献标识码:A  文章编号:1671-2781(2010)06-0423-03
断肠草提取物对小鼠的急性毒杀研究
钟平生 1 ,杨丽琴 1 , 赵 瑾 2 , 郭国汉 2
(1.惠州学院生命科学系 , 广东 惠州 516007, 2.惠州市南天生物科技有限公司 ,广东 惠州 516001)
  【基金项目】 广东省惠州市科技计划项目(编号:2008P56)。
  【作者简介】 钟平生(1964-), 男 ,江西宜春市人 , 副教授 ,博士 , 主要从事病媒生物防治等研究工作。
【摘 要】 目的 探讨断肠草提取物对小鼠的毒力作用。方法 灌胃法。结果 断肠草提取物对小鼠具有
很强的毒杀作用。一次性注射 0.5ml、浓度为 0.003、0.004、 0.005 g/ml的断肠草提取物时 , 小鼠在 30 min内
的死亡率分别为 8.33%、41.67%、100%。同时 ,断肠草提取物对小鼠的毒杀作用迅速。当浓度为 0.005g/ml
时 ,小鼠在 20 min内全部死亡 ,平均致死时间为 12.8 min;浓度为 0.004 g/ml时 ,试鼠在 28 min内死亡了 5只 ,
剩余的2 d内未见死亡;浓度为 0.003g/ml,试鼠在 16min时死亡 1只 , 剩余的 2 d内仍未见死亡。中毒小鼠均
表现出活动迟缓 ,步伐不稳 , 身体抽搐 ,肤色变黑等一些症状。结论 断肠草提取物对小鼠毒杀作用显著 , 所
需剂量少 ,致死时间短 , 为开发植物性灭鼠剂提供了技术参考。
【关键词】 断肠草;提取物;毒力作用;灌胃法
ThetoxicitystudyofextractofGelesemiumelegansonmice
ZHONGPing-sheng1 , YANGLi-qin1 , ZHAOJin2 , GUOGuo-han2
(1.DepartmentofLifeScience, HuizhouUniversity, Huizhou516007, China;
2.NantianBiotechnologyCo.Ltd., Huizhou516001, China)
【Abstract】 Objective ToinvestigatethetoxicityofextractofGelesemiumelegansonmice. Methods Intragas-
tricadministrationmethod. Results TheextractofG.eleganshadapoisoningefectsonmice.Injected0.5 ml
extracttothemice sstomachatatime, bytheconcentrationof0.003, 0.004and0.005g/mlG.elegansextract, the
micemortalitiesin30 minwere8.33%, 41.67% and100% respectively.Inaddition, theextractsactedquicklyon
mice.Thewholetestingmicehaddiedin20 minattheconcentrationof0.005 g/ml, andtheaveragelethaltimewas
12.8min.Whentheconcentrationofextractwas0.004 g/ml, fivemicediedin28 min, andtherestdidntdiedin2
d.Therewasonlyonemousediedattheconcentrationof0.003g/mlin2 d.Althetoxicmiceshowedthesymptoms
ofslowaction, shakedpace, convulsedbodyanddimskin, etc. Conclusion TheextracttoxicityofG.eleganson
miceisobvious, thedoseislittle, thelethaltimeisshort.Theresultsprovideatechnicalreferencetodevelopethe
plantrodenticide.
【Keywords】 Gelesemiumelegans;extract;toxicity;intragastricadministrationmethod
  鼠类不仅种类多 、个体数量多 ,而且生长发育
快 ,具有强大的繁殖力 、分布广 、危害严重等 。目前
防治鼠害的方法主要有化学灭鼠 、生物灭鼠 、人工机
械灭鼠等。长期以来使用最多 、最广的为化学灭鼠 。
但化学灭鼠会使害鼠易产生耐药性和拒食性 ,导致
防效下降 ,且造成环境污染 ,产生二次中毒[ 1] 。断
肠草(GelesemiumelegansBenth)属马钱科 (Logani-
aceae)胡蔓藤属(Gelesemium),俗名大茶药 、胡蔓藤
等 ,为多年生常绿藤本植物 。断肠草在医药 、畜牧业
和农业方面都有开发和利用 [ 2-3] ,尤其在医药方面
开发利用的很多 ,研究表明断肠草有抗肿瘤 、免疫调
节 、镇痛 、治疗皮肤病 、扩瞳等作用。断肠草含多种
钩吻碱 ,有剧毒 ,民间常用作杀虫剂 ,故亦名 “菜虫
药”。骆悦等 [ 4]发现 ,断肠草甲醇粗提物及断肠草
生物碱对福寿螺幼螺和成螺有良好的控制作用。然
而断肠草对害鼠的研究鲜见报道 ,本文选择断肠草
提取物 ,研究对小鼠的毒力作用 ,为进一步研制植物
性杀鼠剂提供技术参考 。
·423·中华卫生杀虫药械 2010年 12月第 16卷第 6期 ChinJHygInsect&EquipDec2010Vol.16 No.6
1 材料与方法
1.1 小鼠 实验于 2010年 3 ~ 4月在广东省惠州
南天生物科技有限公司进行。实验小鼠取自该公司
养殖的昆明种小鼠 ,繁殖多代 ,选取体重 18 ~ 22 g
的健康小鼠做为实验对象 。
1.2 断肠草乙醇提取物(膏状) 由惠州南天生物
科技有限公司经索氏抽提提取并提供 。
1.3 试剂 75%乙醇 ,蒸馏水等 ,市售 。
1.4 仪器 电子天平 、注射器 、棕色小瓶 、量筒 、烧
杯 、玻璃棒。
1.5 方法 采用灌胃法[ 5] ,操作步骤如下:以左手
捉持小鼠 ,使腹部朝上 ,颈部拉直。右手持灌胃管
(由 1 ~ 2 ml注射器上连接磨去针尖的针头制成)。
灌胃管长约 4 ~ 5 cm,直径约 1 mm,先从小鼠口角
插入口腔内 ,然后用灌胃管压其头部 ,使口腔与食道
成一直线。再将灌胃管从舌面紧沿上腭进入食道 ,
灌胃管插入约 1/2处将药液注入 。若遇阻力 ,应退
出灌胃管再插入 ,注意操作时动作要轻。
1.6 断肠草提取物毒性试验
1.6.1 断肠草提取物药液的配制 用电子天秤称
取断肠草提取物 1g,用 10 ml的 20%乙醇溶解 ,搅
拌均匀 ,配制成浓度为 0.1 g/ml的断肠草提取物母
液 ,盛于棕色小瓶中 ,放入 4℃冰箱保存。使用时以
10倍梯度浓度稀释母液 ,分别配制成 0.1、0.01和
0.001 g/ml3个浓度药液。
1.6.2 断肠草提取物毒性预测定 将小鼠按 A
(0.1 g/ml)、B(0.01 g/ml)、C(0.001 g/ml)分为 3
组 ,每组 4只小鼠 ,禁食 12 h后用灌胃法对小鼠一
次性注射 0.5ml,然后正常喂养 ,观察小鼠的反应 ,
记录小鼠死亡时间及死亡数量。每个组重复 3次 。
1.6.3 断肠草提取物毒性测定 随机选取 48只小
鼠 ,按 A(0.005 g/ml)、B(0.004 g/ml)、C(0.003
g/ml)、D(0.002g/ml)分为 4组 ,每组 4只试鼠 ,重
复 3次 ,试验方法同 1.4.2。
1.6.4 小鼠中毒反应观察 灌胃后 5 d内观察记
录各组小鼠在注射后的反应及中毒症状 。
2 结果与分析
2.1 毒杀预试验测定 灌胃 0.5 ml断肠草提取物
对小鼠的毒杀预测定结果见表 1。 0.1 g/ml断肠草
提取物处理后 ,小鼠在 12 min内全部死亡 ,平均致
死时间为 7.4 min;注射灌胃断肠草提取物 0.01
g/ml,小鼠在 21 min内全部死亡 ,平均致死时间为
13.3 min;而灌胃断肠草提取物 0.001 g/ml时 ,在 2
d内未见小鼠死亡 。同时还可看出 ,当提取物浓度
在 0.01 g/ml以上时 ,随着浓度的增加小鼠死亡时间
缩短 。由此表明 ,断肠草提取物在浓度达 0.01 g/ml
以上时对小鼠有较强的毒杀作用 。故毒性试验中采
用 0.01 ~ 0.001g/ml浓度进行测定 。
表 1 断肠草提取物对小鼠毒杀预测定
处理组 浓度(g/ml) 试鼠数(只) 总死鼠数(只)
不同时间(min)的死鼠数(只)
3 6 9 12 15 18 21
A 0.10 12 12 2 3 5 2 0 0 0
B 0.010 12 12 0 0 1 5 3 1 2
C 0.001 12 0 0 0 0 0 0 0 0
2.2 毒性试验结果 灌胃 0.5 ml断肠草提取物对
小鼠的毒性试验结果(表 2)。当灌胃浓度为 0.005
g/ml时 ,试鼠在 20 min内就全部死亡 ,平均致死时
间为 12.8 min;当灌胃浓度为 0.004g/ml时 ,试鼠在
28 min内死亡了 5只 ,剩余的 2 d内未见死亡;当灌
胃浓度为 0.003 ,试鼠在 16 min时死亡 1只 ,剩余的
2d内未见死亡;灌胃浓度为 0.002g/ml时 , 2d内均
未见小鼠死亡。
从表 2中可看出 ,小鼠的死亡率随着浓度的降低
而降低 ,死亡时间也向后推迟 。灌胃浓度在 0.005
g/ml以上 ,小鼠在 20 min内全部死亡。灌胃浓度为
0.003g/ml以上时 , 28 min内小鼠死亡率为 41.67%。
灌胃浓度达 0.003g/ml时 ,小鼠的死亡率很低 ,仅为
8.33%,表明对小鼠有明显毒杀作用的浓度为 0.003
~ 0.005g/ml,且在这可致死浓度范围内 ,随着作用剂
量的增加 ,小鼠的致死时间缩短。
·424· 中华卫生杀虫药械 2010年 12月第 16卷第 6期 ChinJHygInsect&EquipDec2010Vol.16 No.6
表 2 断肠草提取物对小鼠的毒杀测定
浓度
(g/ml)
试鼠数
(只)
总死鼠
数(只)
死亡率
(%)
不同时间(min)的死鼠数(只)
4 8 12 16 20 24 28 32
0.005 12 12 100.00 1 0 6 2 3 0 0 0
0.004 12 5 41.67 0 0 0 0 3 1 1 0
0.003 12 1 8.33 0 0 0 1 0 0 0 0
0.002 12 0 0.00 0 0 0 0 0 0 0 0
2.3 小鼠中毒症状观察  灌胃后 ,最初小鼠无异
常;5 min左右 ,小鼠活动迟缓 ,步伐不稳 ,蜷缩着 ,
头部开始抽动 ,慢慢地小鼠全身颤抖;再过一段时间
后 ,小鼠开始活跃跳动 ,在鼠笼内四处窜跳 ,颤抖更
加厉害;濒临死亡时 ,小鼠继续挣扎 ,前腿不动蹬后
腿 , 1 min左右抽搐不止直至死亡 。同时 ,小鼠在挣
扎过程中 ,身体肤色由原来的粉红色逐渐变黑 ,眼睛
外突。此外 ,观察还发现 ,有些小鼠在后期会出现磨
牙现象 。
3 结论
研究结果表明 ,断肠草提取物对小鼠毒杀作用显
著 ,具有急性致死的效果。在可致死浓度范围内 ,随
着灌胃浓度的增加 ,小鼠的致死时间减少 ,一般致死
时间约 30 min。当断肠草提取物浓度在 0.005 g/ml
以上时 , 20min内小鼠全部死亡。同时灌胃后小鼠具
有一个短暂的潜伏期 ,约 5 min左右。之后 ,小鼠则
开始表现出一些全身颤抖 、抽搐等症状 ,直至死亡。
据研究报道 ,断肠草植株中含有的活性成分叫
钩吻碱 ,属于吲哚类碱 ,植株各部分生物碱的含量以
根皮部(1.5% ~ 2.2%)为最高 ,茎皮(1% ~ 1.1%)
次之 ,茎含量为 0.4% ~ 0.5 %,叶含量仅 0.3%[ 3] 。
这为下一步分离和提纯杀鼠活性成分 ,为断肠草作
为植物源灭鼠剂的开发提供了依据。
在实际防控工作中 ,由于化学药物不断出现抗
性 、公害等问题 ,人们越来越倾向于从天然物质中寻
找更安全 、更有效的活性物质 ,以开发新型的植物源
农药。植物性农药来源于自然 ,有其顺畅的降解途
径 ,无残毒遗留 ,不污染环境 ,不易产生抗药性 ,因此
受到广泛关注 。韩崇选等 [ 6] 对多种植物进行了杀
鼠活性的测定 ,发现曼陀罗 、苦参 、铁棒锤等植物对
试鼠具有较强的毒杀活性 ,且无二次中毒现象发生。
詹绍琛等 [ 7]用闹羊花进行灭鼠试验 ,表明闹羊花叶
煎剂灌服或毒饵试鼠都有较强的毒性。张美文
等[ 8]将烟草水煮液与玉米粉 、面粉饵料按一定的比
例制成的毒饵喂养小鼠 ,表明烟草对鼠类也具有较
好的毒杀作用 。我国植物资源极为丰富 ,对植物源
农药的研究历史悠久 ,有丰富的经验和深厚的基础。
因此 ,研究与开发安全性高的植物性灭鼠剂 ,将成为
现今新型灭鼠剂研制的热点 ,对解决当前化学灭鼠
剂所引起的社会和环境问题具有重要的意义 。
参考文献:
[ 1]  张宏利 ,韩崇选 ,杨学军 ,等.鼠害防治方法研究进展 [ J] .陕西
林业科技 , 2004, (1):41-47.
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1982, 9(2):81.
[ 3]  陈志慧 ,于 新 ,宋光泉.断肠草资源的开发与利用 [ J] .农业
技术学院学报 , 2006, 19(2):66-70.
[ 4]  骆 悦 ,曾鑫年 ,张 帅 ,等.钩吻总碱及粗提物的杀螺活性研
究 [ J] .中国农学通报 , 2004, 20(6):243-246.
[ 5]  徐叔云 ,卞如濂 ,陈 修.药理实验方法学 [ M] .北京:人民卫
生出版社 , 1982:129.
[ 6]  韩崇选 ,张宏利 ,杨学军 ,等.利用植物控制鼠害的应用研究现
状及展望 [ J] .西北农业学报 , 2004, 13(3):89-92.
[ 7]  詹绍琛 ,严延生 ,林 湍 ,等.闹羊花有毒成分的提取及灭鼠试
验 [ J] .中国媒介生物学及控制杂志 , 1997, 8(2):89-91.
[ 8]  张美文 ,王 勇 ,郭 聪 ,等.开发烟草等为植物源灭鼠剂的初
步探讨 [ J] .中国媒介生物学及控制杂志 , 2001, 12(1):16-18.
(收稿日期:2010-06-09)
更  正
姬淑红在 2009年第 2期发表的 “上海江湾湿地蚊蝇种群及蝇类消长初步调查研究”一文中提到
的 “黄色轲蚊为上海市新记录”,应改为 “上海市中心城区蚊类新记录 ”。
·425·中华卫生杀虫药械 2010年 12月第 16卷第 6期 ChinJHygInsect&EquipDec2010Vol.16 No.6