全 文 ：杜仲叶多糖研究⒇
赵晓明 1 ,　张鞍灵 1 ,　张　檀 2 ,　高锦明 1 ,　张彦强 2
( 1西北林学院基础课部 , 2西北林学院林产工程学院 ,陕西 杨陵 712100)
摘　要:从杜仲叶提取的多糖 ,用分光光度法经苯酚—硫酸显色 ,在波长 480nm处测定的
含量为 11. 42% ;红外光谱证实多糖糖苷键为 β-构型 ,不含羧基 ;紫外光谱显示不含核酸、
多肽和蛋白质。
关键词:杜仲 ;叶 ;多糖
中图分类号: S792. 990. 8　文献标识码: A　文章编号: 1001-7461( 1999) 04-0073-03
60年代以来的研究表明〔 1, 2〕 ,多糖类成分不仅是一种非特异性免疫增强剂 ,可起到抗菌、
抗病毒、抗肿瘤、抗辐射、抗衰老的功效 ,而且具有降血糖、降血压、降胆固醇、抗炎、抗溃疡、抗
血凝、抗生育和止吐等多种生理活性。杜仲 ( Eucommia ulmoides Oliv. )在我国有极其丰富的资
源 ,其皮和叶具有类似的化学成分和药理作用〔 3〕。日本学者曾从树皮中分得两种有免疫增强活
性的多糖〔4〕 ,而关于树叶中多糖的研究至今国内外均未见报道。因此 ,开展杜仲叶中水溶性成
分多糖的研究 ,既可丰富杜仲化学成分的研究领域 ,又可为杜仲叶药理药效和临床应用提供理
论依据。作者采用苯酚—硫酸比色法〔5〕测定了其多糖的含量 ,并用红外光谱、紫外光谱对其结
构进行了初步表征。
1　材料、试剂和仪器
杜仲叶于 1997年 6月采自西北林学院。所用试剂均为分析纯。多糖含量测定用 721分光
光度计 ;红外光谱用 Bio-Rad FTS仪测定 , KBr压片 ,扫描范围 4 000～ 470 cm- 1 ;紫外光谱用
760CRT型紫外分光光度计测定 ,用去离子水溶解少许样品。
2　方法与结果
2. 1　多糖的提取与分离
称量粉碎的杜仲叶 250 g ,用乙醇回流脱脂 8 h,残渣用去离子水煎煮 3次 ,每次 1. 5 h,合
并水煎液 ,过滤 ,滤液通过大孔吸附树脂柱 ,接收液置水浴上浓缩至一定体积 ,冷却 ,搅拌下缓
慢加入 3倍量乙醇 ,静置过夜 ,过滤得沉淀。沉淀用适量去离子水溶解 ,并置水浴上浓缩。重复
以上操作 ,使沉淀析出 ,用乙醇洗涤 3次 ,真空干燥 ,得灰白色粉末多糖 6. 5 g ,得率 5. 24%。
西北林学院学报　 1999, 14( 4): 73～ 75　
Journal of No rthw est Fo r est ry Univ er sity
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
⒇收稿日期: 1999-04-20
基金项目:西北林学院青年基金资助课题
作者简介:赵晓明 ( 1949-) ,女 ,实验师 ;张彦强为本院 99届林产工程学院学生。
2. 2　多糖含量测定
2. 2. 1　测定波长的选择　精密称取 0. 200～ 0. 300 g 在 105℃下烘至恒重的样品 ,置小烧杯
中 ,加水溶解 ,过滤至 250m L容量瓶中 ,再加水至刻度 ,混匀 ,吸取该溶液 0. 3 mL于 10m L容
量瓶中 ,加水至 2 mL,加 1 mL5%苯酚溶液 ,加 5 mL浓硫酸 ,充分混匀后于沸水浴中加热 15
min,再于冷水中冷却 ,以酚—硫酸溶液为空白 ,从 460～ 600处进行吸收度测定 ,结果见表 1。
在 480 nm处吸收度最大 ,故选择 480 nm为测定波长。
表 1　最大吸收波长的选择 ( n= 3)
Table 1　 The selection of th e maximum ab sorption wave lenth
波长 /nm 460 470 475 480 485 490 500 520 550 600
吸收度 0. 107 0. 139 0. 152 0. 156 0. 152 0. 144 0. 122 0. 072 0. 018 0. 008
2. 2. 2　稳定性实验　取样品溶液 ,按 1项下分析方法操作 ,每隔一定时间测定吸收度。结果表
明 ,样品冷却后在 4h内显色稳定 ,可用于比色分析 ,结果见表 2。
表 2　稳定性实验 ( n= 2)
Table 2　 Th e stable test of polysacch arides
时间 /min 0 10 20 30 40 50 60 70 2h 4h
吸收度 0. 156 0. 154 0. 153 0. 152 0. 151 0. 150 0. 150 0. 149 0. 147 0. 146
2. 2. 3　标准曲线的绘制　精密称取 0. 034 6 g 105℃下烘至恒重的葡萄糖置小烧杯中 ,加水
溶解并定量转移至 250 mL容量瓶中 ,加水至刻度 ,混匀 ,分别吸取该溶液 0. 1, 0. 2, 0. 3, 0. 4,
0. 5, 0. 6 mL于 10 mL容量瓶中 ,加水至 2 m L,加 1 mL5%苯酚溶液 ,加 5 mL浓硫酸 ,充分摇
匀后于沸水浴中加热 15 min,取出于冷水中冷却 ,以酚 -硫酸溶液为空白 ,于 480 nm处测吸收
度值 ,经回归处理得直线方程: A= 2. 264× 10- 3+ 5. 035× 10- 3 C ,V= 0. 999 4,式中: A表示吸
收度 ,C表示葡萄糖标准溶液的浓度 (μg /mL)。
2. 2. 4　回收率实验　分别吸取 3项中标准溶液 0. 15, 0. 15, 0. 25, 0. 25, 0. 35, 0. 35 mL于 10
m L容量瓶中 ,加水至 2 mL,加 5%苯酚溶液 1 m L,浓硫酸 5 mL,充分摇匀 ,于沸水浴中加热
15 min后取出于冷水中冷却 ,以酚 -硫酸溶液为空白 ,在 480 nm处测吸收度 ,并按下试计算百
分回收率 ,结果见表 3。
葡萄糖的百分回收率 = V /W× 100% , V— 检出量 (μg ) ,W— 样品重量 (μg)
表 3　回收率实验结果
Table 3　 Th e recovery test of polysaccharides
浓度 /138. 4×μg· mL- 1 0. 15 0. 15 0. 25 0. 25 0. 35 0. 35
吸收度 0. 106 0. 103 0. 171 0. 184 0. 244 0. 243
检出量 /μg· mL- 1 20. 60 20. 01 33. 51 36. 09 48. 01 47. 81
加入量 /μg· mL- 1 20. 76 20. 76 34. 60 34. 60 48. 44 48. 44
回收率 /% 99. 24 96. 37 96. 86 104. 32 99. 11 98. 70
2. 2. 5　杜仲叶多糖含量的测定　精密称量 105℃烘至恒重的多糖 0. 200～ 0. 300 g ,倒入小烧
杯中 ,加水溶解并过滤于 250 mL容量瓶中 ,加水至刻度 ,混匀 ,分别吸取样品溶液 0. 3 mL,于
10 m L容量瓶中 ,加水至 2 mL,其余按标准项下操作 ,以酚 -硫酸溶液为空白 ,在 480 nm下测
吸收度 ,按回归方程求出供试品溶液中葡萄糖含量 ,按下式计算样品的百分含量 (表 4)。
样品的百分含量 = V /W× 100% , V— 检出量 (μg ) ,W— 样品重量 (μg )
74　　　　　　　　　　　　　　　　　　西北林学院学报　　　　　　　　　　　　　　　　　　 14卷
表 4　杜仲叶多糖含量测定结果
Table 4　 Th e determination of conten t of polys accharides in E .ulmoides
样品 /g 吸收度 检出量
/μg· mL- 1
样品质量
/μg· mL- 1
百分含量
/%
平均
/%
0. 300 0
0. 310 1
0. 134
0. 151
26. 16
29. 54
243. 96
10. 72
12. 11
11. 42
3　多糖光谱分析
3. 1　理化性质
杜仲叶多糖为灰白色粉末 ,易
溶于水 ,不易潮解 ,无味 ,不溶于高
浓度的乙醇、乙醚、丙酮、乙酸乙酯
等有机溶剂中。显色反应:苯酚-硫酸试剂反应呈桔红色 , Molisch反应呈紫色 ; KI-I2、 FeCl3、茚
三酮、盐酸-镁粉、斐林试剂和本尼地试剂反应均呈阴性 ,提示杜仲叶多糖不含淀粉、酚类成分、
氨基酸、肽和蛋白质、黄酮 ,属非还原性糖。
3. 2　紫外吸收光谱
在 190～ 204 nm处显末端吸收 , 260～ 290 nm处未出现核酸特征吸收峰和 250～ 300nm
区域未发现蛋白质特征吸收峰。 说明杜仲叶多糖不含核酸、多肽和蛋白质。
3. 3　红外吸收光谱
在 3 200～ 3 620 cm- 1 ( 3 379 cm- 1附近 )显示一宽展圆滑的强带 ,为羟基的伸缩振动 ,
2 924, 2 853 cm- 1吸收峰是由 C- H伸缩振动引起的 ,为糖类的特征峰 ; 1 422 cm- 1处吸收峰
是由 C- H弯曲振动引起的 ; 1 700 cm- 1附近无羰基吸收峰 ,说明该多糖不含乙酰基和糖醛
酸 ,属中性多糖 ; 1 198, 1 095 cm- 1是由 C- O伸缩振动引起的较强吸收峰 ; 884 cm- 1处吸收
峰 ,是吡喃糖 β -构型 C- H弯曲振动的特征吸收 ,提示该多糖的糖甙键为 β—构型。
4　讨论
在提取分离时 ,多糖水提液经大孔吸附树脂处理 ,目的是将配糖体 (如黄酮甙 )及部分色素
吸附于树脂上 ,与多糖分离 ,进一步纯化多糖成分。
本实验用水提醇沉法提取的多糖 ,多糖在浓 H2 SO4作用下 ,水解成单糖并迅速脱水成糖
醛衍生物。此糖醛衍生物和苯酚缩合成有色化合物 ,可用分光光度法于适宜波长处测定多糖含
量 ,本法简便 ,显色稳定 ,灵敏度高 ,重视性好 ,应使用新鲜蒸馏的苯酚。
有关杜仲叶多糖进一步分离纯化、分子量测定、糖基组成及药理活性尚待研究。
参 考 文 献
1　 Srivastava R, Kulsh reshtha D K. Bioactiv e polysacch arides f rom plants〔 J〕. Phytoch em, 1989, 28( 11): 2877～ 2881
2　杜显光 ,白雪芳 ,虞星炬等 .寡聚糖类物质生理活性的研究〔 J〕.中国生化药物杂志 , 1997, 18( 5) : 268～ 271
3　高锦明 ,刘丽 ,张鞍灵等 .杜仲叶生物活性成分的提纯研究〔 J〕. 西北林学院学报 , 1998, 13( 1): 83～ 86
4　尉芹 ,马希汉 ,张康健 .杜仲化学成分的研究〔 J〕 . 西北林学院学报 , 1995, 10( 4): 88～ 93
5　王强 ,陈绥清 ,张志华等 .枸杞子中多糖的含量测定〔 J〕 . 中草药 , 1991, 22(2): 76
A Study on the Po lysaccharides of Eucommia ulmoides Leaves
Zhao Xiaoming
1　 Zhang Anling1　Zhang Tan2　 Gao Jinming1　 Zhang Yanqiang2
( 1 Dept . of B asic Coures; 2 Faculty of Forest Products and Eng ineering , N WFU , Yangl in g , Shaan xi 712100)
(下转 81页 )
75第 4期　　　　　　　　　　　　　　　　赵晓明等　杜仲叶多糖研究　　　　　　　　　　　　　　　
Processing Techno logy of Du zh ong-cola
Zhang Jingfang　 Zhang Kangjian　Ma Xiaoshan
(Facul ty of Forest Products and Engineering , NWFU , Yangl ing , Shaanx i , 712100)
Abstract　 Processing technolog y o f Duzhong-co la w as developed w ith the ex t ract of Eucom-
mia ulmoides. Contents of consti tuents in Duzhong Cola was determined by using sing le fac-
to r experiments. Optimum fo rmula of Duzhong co la w as conducted on the basis of the o r-
thogonal experiment of fo rmula and fuzzy comprehensiv e evalua tion.
Key words　 Duzhong cola; fo rmula; processing technolog y
(上接 75页 )
Abstract　 The content of po lysaccharides ex t racted f rom the leaves of Eucommia ulmoides
was determined at 480nm to be 11. 42% by spectrophotometry using a pheno l-concentrated
sulfuric acid as the colo r developer IR spectrum show ed the g lyco sida tion linkage of β-config-
uration and absence of carboxy lic acid a t 884 and 1 700cm
- 1 , respectiv ely , and UV spect rum
indica ted that no nucleic acid and pro tein ex isted in the poly saccha rides.
Key words　Eucommia ulmoides; leav es; po lysaccharides
81第 4期　　　　　　　　　　　　　　张京芳等　杜仲可乐的加工技术研究