全 文 ：分子植物育种，2015年，第 13卷，第 2期，第 401-408页
Molecular Plant Breeding, 2015, Vol.13, No.2, 401-408
研究报告
Research Report
瓠瓜类型砧木品种根系 DNA提取方法比较及指纹图谱构建
宋慧 * 张香琴 应泉盛 严蕾艳 王迎儿 王毓洪
宁波市农业科学研究院蔬菜研究所,宁波市瓜菜育种重点实验室,宁波, 315040
*通讯作者, 975281674@qq.com
摘 要 为利用瓠瓜砧木根系提取 DNA进行品种真实性分子检测，本研究比较了 CTAB法(方法 1)、SDS
简易法(方法 2)、SDS法(方法 3)、TPS法(方法 4)、快速制备法(方法 5)和简易快速制备法(方法 6)提取瓠瓜类
型砧木根系基因组 DNA的效果。研究结果表明，SDS简易法(方法 2)提取瓠瓜根系总 DNA质量好，蛋白污
染小，PCR扩增条带清晰稳定，满足瓠瓜根系 DNA分子检测的要求。利用该法提取的‘甬砧 1号’、‘甬砧 3
号’、‘甬砧 4号’、‘甬砧 5号’、‘神通力’和‘京欣砧 1号’的根系 DNA可重复上述 6份瓠瓜材料幼叶 DNA的
指纹图谱结果(01001, 10010, 10101, 01010, 00110和 00000)。新增加‘华欣 948’、‘5756’、‘1715’和‘56YZ2’等
4份瓠瓜砧木材料，通过根系 DNA构建的指纹图谱分别是 00110、01011、11000和 01000。10份瓠瓜类型砧
木品种根系 DNA指纹图谱出现概率为 1/13 500，图谱出现概率低，表明可以利用根系取代叶片提取 DNA，
用于构建指纹图谱进行品种鉴定与保护。
关键词 瓠瓜,根系, DNA制备,指纹图谱
Comparison of Root DNA Extraction Methods and Construction of DNA
Fingerprinting on Bottle Gourd (Lagenaria siceraria L.) Type of Rootstock
Cultivars
Song Hui * Zhang Xiangqin Ying Quansheng Yan Leiyan Wang Yinger Wang Yuhong
Institute of Vegetable, Ningbo Academy of Agricultural Sciences, Ningbo, 315040
* Corresponding author, 975281674@qq.com
DOI: 10.13271/j.mpb.013.000401
Abstract In order to identify the authenticity of the bottle gourd (Lagenaria siceraria L.) cultivars by using root
DNA, six methods were employed to extract the root DNA from bottle gourd type of rootstock cultivars, which
were CTAB (Method 1), Modified SDS (Method 2), SDS (Method 3), TPS (Method 4), Rapid extraction (Method 5),
and Simple-rapid extraction (Method 6). The quality and purity of DNAwere compared by agarose gel electrophore-
sis, K5600 micro-spectrophotometer, and PCR amplification. The results showed that DNA extracted by modified
SDS (Method 2) showed the highest purity and quality, less protein contamination, and the amplification bands were
clear and stable, modified SDS (Method 2) was selected for molecular experiment. The fingerprinting result gener-
ated from root DNA of‘Yongzhen No.1’,‘Yongzhen No.3’,‘Yongzhen No.4’,‘Yongzhen No.5’,‘Shentongli’
and‘Jingxinzhen No.1’was same to which from leave DNA (01001, 10010, 10101, 01010, 00110 and 00000).
The results of‘Huaxin 948’,‘5756’,‘1715’and‘56YZ2’were 00110, 01011, 11000 and 01000, respectively.
The fingerprinting appearance probability of ten cultivars derived from root DNA was 1/13 500, which showed that
the root of bottle gourd could be instead of the leave for DNA extraction used to construct the molecular
收稿日期：2014-04-18 接受日期：2014-08-25 网络出版日期：2014-12-03
URL: http://www.biopublisher.cn/index.php/mpbopa/article/view/2209
基金项目：本研究由国家自然基金(31000907)、公益性行业(农业)科研专项(201403032)、国家西甜瓜产业技术体系(nycytx-36)、宁波
市瓜类砧木育种创新团队(2014B81002)和宁波市瓜菜育种重点实验室(2014A22007)共同资助
分子植物育种
Molecular Plant Breeding
图 1各方法提取的根系 DNA的 RAPD扩增效果比较
注: A,B:重复扩增 2次; M: DL2000 marker; 1:方法 1 (CTAB法); 2:方法 2 (SDS简易法); 3a~3h: (SDS法)配方 1~配方 8; 4:方
法 4 (TPS法); 5:方法 5 (快速制备法); 6:方法 6 (简易快速制备法); CK:瓠瓜叶片 DNA
Figure 1 RAPD amplification by using root DNAs extracted by six methods
Note: A,B: Repeat twice; M: DL2000 marker; 1: Method 1 (CTAB); 2: Method 2 (Modified SDS); 3a~3h: Eight extraction solutions of
Method 3 (SDS); 4: Method 4 (TPS); 5: Method 5 (Rapid extraction); 6: Method 6 (Simple-rapid extraction ); CK: Leaf DNA of bottle
gourd
利用 CTAB法提取瓠瓜砧木幼叶高质量 DNA，
用以指纹图谱构建鉴别品种，已是成熟技术(宋慧等,
2012)。但是，在生产实践中，当瓠瓜砧木出现真假种
子纠纷的时候，砧木往往已经去除顶芽，叶片组织不
再生长，只有子叶节以下木质化程度增高的根系可
以作为砧木本身的证据存在。由于没有叶片组织用
以提取 DNA，为利用分子标记构建指纹图谱和鉴定
瓠瓜类型砧木品种真实性带来困难。
植物的根系与叶片组织一样包含 DNA遗传信
息，但是根系为了适应土壤环境，植物组织木质化程
度增高，细胞内富含多糖多酚等干扰物质，导致提取
根系高质量 DNA较叶片困难，需要进行比较试验才
能得出效果好的方法。目前尚未见利用瓠瓜砧木根
系提取 DNA用以分子检测的报道。柴胡(南晓洁等,
2009)、人参(王琼等, 2004)、玄参(沈志雯等, 2009)和
黄氏(刘敏等, 2010)等根用中药材中，有关根系 DNA
的提取方法报道较多，常用方法主要是 CTAB法和
SDS法。范永山等(2006)利用 CTAB法提取红掌的
叶、叶柄、根等不同组织的 DNA，结果表明 CTAB法
适用于红掌的根系 DNA提取，根系 DNA提取浓度
高。此外，水稻 DNA快速制备法步骤简单，成功报道
较多(彭锁堂等, 2002;宋丰顺等, 2007)。
本研究拟利用 CTAB法、SDS简易法、SDS法、
TPS微量法、DNA快速制备法和 DNA简易快速制
备法(田永航和罗洪发 , 2010)，比较瓠瓜砧木根系
DNA提取的效果，筛选适用的方法，用以瓠瓜类型砧
木品种指纹图谱构建，起到品种鉴定与保护的作用。
1结果与分析
1.1 6 种 DNA 提取方法对提取瓠瓜根系 DNA 的效
果比较
比较发现，6种 DNA提取方法对瓠瓜根系 DNA
提取的效果不同(表 1)。由吸收比值 A260/A280结果
可见，6种方法的比值介于 1.67±0.44与 2.15±0.24之
间，方法 5和方法 6低于正常值 1.8，分别为 1.67±
0.44和 1.72±0.38，两种方法的 PCR扩增效果显示扩
增失败和弥散(图 1;图 2)，表明方法 5和方法 6提取
的 DNA蛋白污染严重，不适合瓠瓜根系 DNA提取，
予以排除。由浓度结果可知，余下的方法 1~方法 4
中，方法 4提取浓度最高，为(115.71±28.7) ng/μL，提
取浓度最低的是方法 3，为(12.29±8.41) ng/μL，电泳
和 PCR扩增效果相当。但对比 4 种方法的操作流
程、提取时间和试剂成本，可以发现，方法 1 (CTAB
法)步骤繁琐、耗时长、所用试剂最多；方法 3 (SDS
法)和方法 4 (TPS法)居中；方法 2 (SDS简易法)步骤
简单、耗时最短。最终确定方法 2 (SDS简易法)为最
适用于瓠瓜根系 DNA提取的方法。
1.2 SDS法 8种提取液配方对瓠瓜根系 DNA 提取效
果的比较
比较发现，同一方法不同提取液配方，对瓠瓜根
系 DNA的提取效果不同(表 2)。由 K5600超微量分
光光度计测定结果可知，8种提取液提取的 DNA浓
度在(6.76±9.55)~(18.43±22.42) ng/μL 之间，提取量
fingerprinting for cultivar identification and protection.
Keywords Bottle gourd, Root, DNA preparation, Fingerprinting
402
表 1 6种 DNA提取方法的提取效果
Table 1 Comparison of 6 extraction methods
编号
Code
1
2
3
4
5
6
名称
Name
CTAB法
CTAB
SDS简易法
Modified SDS
SDS法
SDS
TPS法
TPS
快速制备法
Rapid extraction
简易快速制备法
Simple-rapid extraction
A260/A280
1.72±0.54
2.15±0.24
1.93±0.53
2.10±0.11
1.67±0.44
1.72±0.38
浓度(ng/μL)
Concentration (ng/μL)
26.44±6.32
29.30±5.51
12.29±8.41
115.71±28.7
59.32±50.73
106.71±113.5
电泳
Electrophoresis
正常
Normal
正常
Normal
正常
Normal
正常
Normal
正常
Normal
正常
Normal
RAPD
正常
Normal
正常
Normal
正常
Normal
正常
Normal
失败
Failed
弥散
Smear
SSR
正常
Normal
正常
Normal
正常
Normal
正常
Normal
失败
Failed
弥散
Smear
PCRK5600
图 2各方法提取的根系 DNA的 SSR扩增效果比较
注: A,B:重复扩增 2次; M: 50 bp DNA Ladder marker; 1:方法 1 (CTAB法); 2:方法 2 (SDS简易法); 3a~3h: (SDS法)配方 1~配
方 8; 4:方法 4 (TPS法); 5:方法 5 (快速制备法); 6:方法 6 (简易快速制备法); CK:叶片 DNA
Figure 2 SSR amplification by using root DNAs extracted by six methods
Note: A,B: Repeat twice; M: 50 bp DNA Ladder marker; 1: Method 1 (CTAB); 2: Method 2 (Modified SDS); 3a~3h: Eight extraction
solutions of Method 3 (SDS); 4: Method 4 (TPS); 5: Method 5 (Rapid extraction); 6: Method 6 (Simple-rapid extraction ); CK: Leaf
DNA of bottle gourd
均满足 PCR扩增对 DNA模板 50 ng最小用量的要
求。吸收比值 A260/A280用以反应 DNA的提取纯
度，正常值在 1.8左右，配方 1、3和 8偏离正常值
1.8 较大，表明提取的 DNA受蛋白污染较重，予以
排除。RAPD和瓠瓜 SSR引物 PCR扩增效果显示
(图 1;图 2)，配方 5~配方 7的扩增条带清晰稳定，
表明 Tris-HCL的最适使用量为 200 mmol/L，结合
配方 5~配方 7的 DNA浓度和纯度结果，可以确定
配方 7和 5提取浓度高，分别是(14.62±9.01) ng/μL
和(12.29±8.41) ng/μL，纯度相当，A260/A280 比值
分别是 1.92±0.81和 1.93±0.53。比较配方 5和 7的
NaCl和 SDS试剂用量，最终确定配方 5，试剂用量
经济，提取效果最佳，为适用于瓠瓜根系 DNA提取
的 SDS法的最佳配方。
1.3 利用瓠瓜类型砧木材料叶片 DNA 和根系 DNA
构建的指纹图谱比较
前期我们利用瓠瓜类型砧木品种甬砧 1号、甬
砧 3号、甬砧 4号、甬砧 5号、神通力和京欣砧 1号
的幼叶 DNA，筛选得到 3个 RAPD (s23, s148和 s255)
和 1对 SSR (S1109/1110)多态性标记，构建了各材料
指纹图谱(图 3)，分别是 01001、10010、10101、01010、
00110和 00000 (表 3)。本试验通过上述材料的根系
DNA构建指纹图谱(图 4)，甬砧 1号、甬砧 3号、甬砧
4号、甬砧 5号、神通力和京欣砧 1号的图谱赋值分别
为 01001、10010、10101、01010、00110和 00000 (表 4)，
这与叶片 DNA结果相同，表明利用葫芦类型砧木品
种根系 DNA构建指纹图谱的可行性。
瓠瓜类型砧木品种根系 DNA提取方法比较及指纹图谱构建
Comparison of DNA Extraction and Construction of DNA Fingerprinting on L. siceraria of Rootstock Cultivars
403
分子植物育种
Molecular Plant Breeding
表 2 SDS法 8种提取液配方的提取效果
Table 2 Comparison of eight extraction solutions of SDS preparation
编号
Code
1
2
3
4
5
6
7
8
Tris-HCl
(mmol/L)
100
100
100
100
200
200
200
200
NaCl
(mmol/L)
20
20
100
100
20
20
100
100
SDS
(%)
1
5
1
5
1
5
1
5
A260/A280
2.96±1.32
1.80±0.06
0.77±1.23
1.95±0.54
1.93±0.53
1.76±0.12
1.92±0.81
2.28±0.31
浓度(ng/μL)
Concentration (ng/μL)
18.43±22.42
10.05±2.87
6.76±9.55
9.32±6.15
12.29±8.41
11.10±1.47
14.62±9.01
9.83±3.60
电泳
Electrophoresis
正常
Normal
正常
Normal
正常
Normal
正常
Normal
正常
Normal
正常
Normal
正常
Normal
正常
Normal
RAPD
正常
Normal
正常
Normal
差
Poor
正常
Normal
正常
Normal
正常
Normal
正常
Normal
正常
Normal
SSR
差
Poor
差
Poor
差
Poor
正常
Normal
正常
Normal
正常
Normal
正常
Normal
正常
Normal
提取液配方
Extraction solutions
K5600 PCR
图 3 RAPD和 SSR标记在甬砧 1号、甬砧 3号、甬砧 4号、甬砧 5号、神通力和京欣砧 1号叶片 DNA中的扩增
注: M1: DL2000 marker; M2: 50 bp DNA ladder marker; a:甬砧 1号; b:甬砧 3号; c:甬砧 4号; d:甬砧 5号; e:神通力; f:京欣砧
1号
Figure 3 Amplification of leave DNA of‘Yongzhen No.1’,‘Yongzhen No.3’,‘Yongzhen No.4’,‘Yongzhen No.5’,‘Shentongli’
and‘Jingxinzhen No.1’by using RAPD and SSR markers
Note: M1: DL2000 marker; M2: 50 bp DNA ladder marker; a: Yongzhen No.1; b: Yongzhen No.3; c: Yongzhen No.4; d: Yongzhen
No.5; e: Shentongli; f: Jingxinzhen No.1
404
表 4 10个葫芦品种根系 DNA指纹图谱
Table 4 DNA Fingerprinting generated from root DNA of ten bottle gourd type of rootstock varieties
材料名称
Name
s23-700
s148-400
s255-480
S1109/1110-120
S1109/1110-140
甬砧 1号
Yongzhen
No.1
0
1
0
0
1
甬砧 3号
Yongzhen
No.3
1
0
0
1
0
甬砧 4号
Yongzhen
No.4
1
0
1
0
1
甬砧 5号
Yongzhen
No.5
0
1
0
1
0
神通力
Shentongli
0
0
1
1
0
京欣砧 1号
Jingxinzhen
No.1
0
0
0
0
0
华欣 948
Huaxin948
0
0
1
1
0
5756
0
1
0
1
1
1715
1
1
0
0
0
56YZ2
0
1
0
0
0
表 3利用叶片 DNA绘制甬砧 1号、甬砧 3号、甬砧 4号、甬砧 5号、神通力和京欣砧 1号的 DNA指纹图谱
Table 3 DNA Fingerprinting generated from leave DNA of‘Yongzhen No.1’,‘Yongzhen No.3’,‘Yongzhen No.4’,‘Yongzhen No.5’,
‘Shentongli’and‘Jingxinzhen No.1’
引物名称
Primer name
s23-700
s148-400
s255-480
S1109/1110-120
S1109/1110-140
甬砧 1号
Yongzhen No.1
0
1
0
0
1
甬砧 3号
Yongzhen No.3
1
0
0
1
0
甬砧 4号
Yongzhen No.4
1
0
1
0
1
甬砧 5号
Yongzhen No.5
0
1
0
1
0
神通力
Shentongli
0
0
1
1
0
京欣砧 1号
Jingxinzhen No.1
0
0
0
0
0
图 4 RAPD和 SSR标记在 10份葫芦类型砧木品种根系 DNA中的扩增
注: M: DL2000 marker; a:甬砧 1号; b:甬砧 3号; c:甬砧 4号; d:甬砧 5号; e:神通力; f:京欣砧 1号; g:华欣 948; h: 5756; i: 1715; j:
56YZ2
Figure 4 Amplification of RAPD and SSR in root DNA of ten bottle gourd type of rootstock varieties
Note: M: DL2000 marker; a: Yongzhen No.1; b: Yongzhen No.3; c: Yongzhen No.4; d: Yongzhen No.5; e: Shentongli; f: Jingxinzhen
No.1; g: Huaxin948; h: 5756; i: 1715; j: 56YZ2
瓠瓜类型砧木品种根系 DNA提取方法比较及指纹图谱构建
Comparison of DNA Extraction and Construction of DNA Fingerprinting on L. siceraria of Rootstock Cultivars
405
分子植物育种
Molecular Plant Breeding
1.4 10份瓠瓜类型砧木材料根系 DNA构建指纹图谱
利用甬砧 1号、甬砧 3号、甬砧 4号、甬砧 5号、
神通力、京欣砧 1号、华欣 948、5756、1715和 56YZ2
根系 DNA构建的指纹图谱，分别是 01001、10010、
10101、01010、00110、00000、00110、01011、11000 和
01000，不同品种出现相同指纹图谱的概率为
1/13500。研究结果表明 3个 RAPD (s23, s148和 s255)
和 1对 SSR (S1109/1110)能够根据 10个品种的根系
DNA扩增，达到区分品种保护品种的作用。
2讨论
PCR分子技术在作物品种真实性检测方面，运
用前景广阔，高质量 DNA的制备是开展此类工作的
基础。瓠瓜作为砧木，出现真假种子纠纷的时候，由
于去除顶芽，没有叶片组织，只能依靠子叶节以下根
系进行分子检测。但根系木质化程度高，多糖及次生
代谢产物含量高，不如新鲜叶片组织 DNA含量高、
片段完整，易于提取。本研究首次参考根用中药材根
系 DNA提取方法和水稻快速提取法，选择 CTAB
法、SDS简易法、SDS法、TPS法、快速制备法和简易
快速制备法等 6种方法，经过比较，确定 SDS简易法
为最适用于瓠瓜根系 DNA提取的方法。该方法不用
液氮研磨，不使用氯仿、CTAB等有毒试剂，对人体
安全；且步骤简单、耗时最短，大大降低了 DNA提取
的时间成本。
对比根系 DNA和叶片 DNA构建的甬砧 1号、
甬砧 3号、甬砧 4号、甬砧 5号、神通力和京欣砧 1
号等 6份瓠瓜类型砧木品种的指纹图谱，结果可显
示，多态性引物扩增的带型和差异位点的赋值均可
重复。通过根系 DNA取代叶片 DNA构建指纹图谱，
进行品种鉴别，能够更切实际地解决砧木种子的实
际纠纷，研究结果具有很好的实用意义。
10份瓠瓜类型砧木品种的根系 DNA在进行多
态性引物扩增的过程中，个别材料出现扩增失败的
情况(s23-华欣948)，这与 DNA的提取质量无关，经
过 3次 PCR重复扩增，所有材料的扩增赋值结果均
能得到。10份砧木品种通过 4个多态性引物扩增的
5个多态性位点，经过赋值，可以甄别各个品种，起到
品种鉴定与保护的作用。
3材料和方法
3.1植物材料与仪器试剂
3.1.1植物材料
选取‘甬砧 1号’进行瓠瓜砧木根系 DNA提取
方法的比较研究；以‘甬砧 1号’、‘甬砧 3号’、‘甬砧
4号’、‘甬砧 5号’、‘神通力’、‘京欣砧 1号’、‘华欣
948’、‘5756’、‘1715’和‘56YZ2’10份瓠瓜类型砧木
材料为试材，利用根系 DNA构建指纹图谱。
以上述各材料作为砧木，西瓜‘8424’为接穗，嫁
接成活后，定植于塑料大棚。在植株拉秧前，砧木仅
凭子叶节以下部位不能相互区分。挖取根系，用剪
刀剪取砧木子叶节以下部位，清水洗净，放入液氮
中保存待用。
3.1.2仪器试剂
试验所需仪器包括：MM400破碎仪(RETSCH)，
低温高速离心机(Thermo Scientific)，DYY-11型电泳
仪和水平电泳槽(北京六一)，凝胶成像及分析系统
(Tanon-1600)，超微量分光光度计(K5600)等。
主要试剂包括：十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)，
十二烷基磺酸钠(SDS)，聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)。
3.2 DNA提取方法
CTAB法(方法 1)、SDS简易法(方法 2)、SDS法
(方法 3)、TPS微量法(方法 4)、DNA快速制备法(方
法 5)和 DNA简易快速制备法(方法 6)的操作流程和
使用试剂配方见表 5。
3.3基因组 DNA提取效果检测
利用 K5600 超微量分光光度计，吸取 1 μL
DNA检测浓度。
选择‘甬砧 1号’叶片 DNA成功扩增的 RAPD
引物 s148和瓠瓜 SSR引物 S1063/S1064，对 6种方
法提取的 DNA样品进行 PCR扩增，观察电泳效果。
试验重复 2次。
3.4 利用 10 份瓠瓜类型砧木材料根系 DNA 构建指
纹图谱
利用 SDS简易法提取各材料根系 DNA。
利用前期幼叶 DNA构建甬砧系列指纹图谱的
分子标记，包括 3 个 RAPD (s23、s148 和 s255)和 1
对瓠瓜 SSR(S1109/1110)，对 10 份瓠瓜类型砧木品
种根系 DNA进行扩增。
3.5数据分析
根据 10份瓠瓜类型砧木品种根系 DNA扩增结
果进行赋值。分子标记扩增出等位位点条带的记为
“1”，同一位点无扩增的记为“0”。这些由 1和 0组成
的字符串即构成各品种指纹图谱。
406
表 5 6种 DNA提取方法的操作流程
Table 5 Protocols of 6 DNA extraction methods
根系取样(g)
Sample (g)
加入提取液
Extraction solution
MM400研磨
MM400 grinded
65℃水浴中加热
Water bath at 65℃
沸水浴
Boiling water bath
PCR仪 99℃
PCR at 99℃
室温放置
Room temperature
氯仿:异戊醇溶液(24:1)抽提
Chloroform: soamylol (24:1) extraction
中和溶液 g
Neutralized solution g
储备溶液 h
Storage solution h
沸水浴
Boiling water bath
7 000 r/min离心
Centrifuged at 7 000 r/min
13 200 r/min离心
Centrifuged at 13 200 r/min
异丙醇沉淀
Precipitated by isopropanol
无水乙醇沉淀
Precipitated by alcohol
3 000 r/min离心
Centrifuged at 3 000 r/min
13 200 r/min离心
Centrifuged at 13 200 r/min
TE溶解
Dissolved by TE
氯仿:异戊醇溶液(24:1)抽提
Chloroform: soamylol (24:1) extraction
异丙醇沉淀
Precipitated by isopropanol
75%乙醇清洗
Washed by 75% alcohol
TE溶解
Dissolved by TE
浸出液
Leach
CTAB法
CTAB
0.1
750 μL a
是
Yes
30~45 min
3~5 min
5 min
30 min
4 min
500 μL
3~5 min
1~2 h
3
200 μL
SDS简易法
Modified SDS
0.1
500 μL b
是
Yes
10 min
5 min
30 min
2 min
1
50 μL
SDS法
SDS
0.1
750 μL c
是
Yes
30~45 min
3~5 min
5 min
30 min
4 min
500 μL
3~5 min
1~2 h
3
200 μL
TPS提取法
TPS
0.1
400 μL d
是
Yes
30 min
2 min
1
30 μL
DNA快速制备法
Rapid extraction
0.1
200 μL e
是
Yes
30 s
200 μL
100 μL
20 min
20 min
200 μL
简易快速制备法
Simple-rapid extraction
0.1
50 μL f
是
Yes
10 min
50 μL
20 min
200 μL
注: a: 100 mmol/L Tris-HCl (pH 8.0), 20 mmol/L EDTA (pH 8.0), 140 mmol/L NaCl, 2% CTAB, 1% PVP; b: 200 mmol/L Tris-HCl
(pH 8.0), 50 mmol/L EDTA (pH 8.0), 20 mmol/L NaCl, 1% SDS (pH 8.0), 1% PVP; c: 同表 2; d: 100 mmol/L Tris-HCl (pH 8.0),
10 mmol/L EDTA, 1 mol/L KCl; e: 0.25 mol/L NaOH; f: 0.5 mol/L EDTA; g: 0.25 mol/L HCI; h: 0.5 mol/L Tris-HCI
Note: a: 100 mmol/L Tris-HCl (pH 8.0), 20 mmol/L EDTA (pH 8.0), 140 mmol/L NaCl, 2% CTAB, 1% PVP; b: 200 mmol/L Tris-HCl
(pH 8.0), 50 mmol/L EDTA (pH 8.0), 20 mmol/L NaCl, 1% SDS (pH 8.0), 1% PVP; c: The same as table 2; d: 100 mmol/L Tris-HCl
(pH 8.0), 10 mmol/L EDTA, 1 mol/L KCl; e: 0.25 mol/L NaOH; f: 0.5 mol/L EDTA; g: 0.25 mol/L HCI; h: 0.5 mol/L Tris-HCI
瓠瓜类型砧木品种根系 DNA提取方法比较及指纹图谱构建
Comparison of DNA Extraction and Construction of DNA Fingerprinting on L. siceraria of Rootstock Cultivars
407
分子植物育种
Molecular Plant Breeding
作者贡献
宋慧、张香琴、应泉盛和王迎儿是本研究的试验
设计和实验研究的执行人；宋慧完成数据分析和论
文初稿的写作；严蕾艳和王毓洪参与试验研究和结
果分析；宋慧是项目的构思者及负责人，指导实验设
计，数据分析，论文写作与修改。全体作者都阅读并
同意最终的文本。
致谢
本研究由国家自然基金(31000907)、公益性行
业(农业)科研专项(201403032)、国家西甜瓜产业技
术体系(nycytx-36)、宁波市瓜类砧木育种创新团队
(2014B81002)和宁波市瓜菜育种重点实验室(2014A2
2007)共同资助。
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