全 文 ：　第 21卷第 2期　　　　　　　　　　　　　　　　安康学院学报　　　　　　　　　　　　　　　　　Vol.21№ 2
2009年 4月　　　　　　　　　　　　　　　JournalofAnkangUniversity　　　　　　　　　　　　　　Apr.2009
犁头草中化学成分及总黄酮含量的研究
谢娟平
(安康学院 化学化工系 , 陕西 安康 725000)
摘　要:目的:研究犁头草中的化学成分 , 测定犁头草中总黄酮的含量 .方法:以鉴别法对犁头草提
取物中的化学成分进行定性 , 以芦丁为对照品 , 采用紫外分光光度法在 274nm处测定犁头草中总黄酮类化
合物的含量 .结果:犁头草提取物中含有大量黄酮 , 总黄酮含量为 15.5%, 芦丁对照品在 0.800 ～ 16 μg/
mL浓度范围内线性良好 , R =0.9997, 总黄酮平均回收率为 99.5 %, RSD为 1.76 %.结论:该研究首次
报道了犁头草中的化学成分及总黄酮含量的测定 , 此方法仪器要求低 、 灵敏度高 , 操作简便 、 快速 , 结果
准确 , 可作为犁头草总黄酮研究及含量测定的方法.
关键词:犁头草;黄酮类;芦丁;紫外分光光度法
中图分类号:R284.1　文献标识码:A　文章编号:1009-024X(2009) 02-0095-03①
　　犁头草 , 为堇菜科多年生草本植物 , 又名犁咀草 ,
紫金锁 、 三角草 、 犁头尖等 , 产于我国长江流域及南部
各省 , 多生于山坡林边 、 溪边或荒山草地中 , 资源极为
丰富 .全草入药 , 夏季至秋初 , 于花正开放时采集 .性
味苦 、 辛 、 寒 , 无毒 .
犁头草为民间常用药 , 文献记载其能清热解毒 , 除
脓消炎 , 治痈疽 、 疔毒 、 瘰疬 、 疮疡等症 , 常用来治疗
跌打损伤 、 外伤出血 、 风湿性关节炎 、 白喉 、 角膜实质
炎及匐行性角膜溃疡 、 扁桃体炎 、 肺炎 、 盆腔炎 、 乳痈
及疔疮等 〔1-2〕.现代研究表明 , 犁头草有抗金黄色葡萄
糖球菌 、 抗 HBsAg、 抗 HBV及治疗急慢性骨髓炎等作
用 〔3-7〕.但目前尚未见对其进行化学成分及含量测定研
究的报道 .本文首次对犁头草中的化学成分进行了研究 ,
得到了总黄酮成分 , 并采用改进的紫外分光光度
法 〔8-12〕 , 对其总黄酮含量进行了测定 .实验中仪器要求
低 、 操作方法简单 , 结果准确 , 稳定性 、 精密度 、 重复
性和回收率良好 , 为合理开发犁头草资源提供了一定的
质量控制和评价手段 .
1　仪器 、试剂与药材
SPUV— 1901紫外可见分光光度计 (上海色谱仪器
有限公司).试剂均为分析纯 , 所用水均为一次蒸馏水 .
芦丁对照品购自中国药品生物制品鉴定所 .犁头草采自
安康市佛坪乡 , 经安康市药品检验所胥道宝主任药师鉴
定 .
2　方法与结果
2.1犁头草有效成分的提取及总黄酮的鉴别
2.1.1犁头草有效成分的提取
取干燥的犁头草 , 粉碎 , 以 75%乙醇渗漉 , 收集渗
漉液 , 回收乙醇 , 干燥 , 即得总提取物 .
2.1.2犁头草中有效成分的鉴别:
2.1.2.1紫外光下呈色反应 .取该样品溶液点在滤纸上 ,
在可见光下呈灰黄色 , 在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑
点 .
2.1.2.2浓氨水反应.取该样品溶液点在滤纸上 , 将滤纸
在氨水上方熏 0.5min, 立即在紫外光下观察 , 呈极明显
的黄褐色荧光斑点 .
2.1.2.3三氯化铝反应 .取样品溶液点在滤纸上 , 滴加
1%三氯化铝乙醇溶液 , 吹干 .在可见光下呈灰黄色 , 在
紫外光下呈黄色荧光斑点 .
2.1.2.4乙酸镁反应 .取样品溶液点在滤纸上 , 滴加 1%
乙酸镁甲醇溶液 , 吹干 , 紫外光下呈黄色斑点 .
2.1.2.5盐酸 -镁粉反应 .取乙醇提取液 1 ml于试管中
加镁粉 , 再加入浓盐酸数滴 (1次加入), 在泡沫处呈紫
红色 .
2.1.2.6纸层析 .取样品溶液 10μl点在滤纸上 .用正丁
醇:醋酸:水 =4:1:5为展开剂 , 上行展开 5 h, 取出
晾干 .喷 1 %三氯化铝乙醇溶液 , 吹干 , 于紫外光下观
察 , 可见荧光斑点 .
上述结果表明 , 犁头草提取物中的主要成分为黄酮
类成分 .
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① 收稿日期:2009-01-07
基金项目:安康学院基金资助项目 (2007AKXY029)
作者简介:谢娟平 (1972-), 女 , 陕西宝鸡人 , 安康学院化学化工系讲师 , 硕士 , 研究方向:中药天然成分分离分析与开发 .
2.2对照品溶液的制备
精密称取芦丁对照品约 20 mg于 100 mL容量瓶中 ,
加入 95%乙醇溶解 , 在定容至刻度即得对照品储备液 ,
浓度为 0.2 mg/mL.
2.3供试品溶液的制备
准确称取犁头草总黄酮提取物 13.0 mg于 25 mL容
量瓶中 , 加入 95%乙醇 2 mL, 加热溶解 , 再加入 65%
乙醇并定容至刻度 , 摇匀 , 再取上述溶液 5mL于 25 mL
容量瓶中 , 加入 65%乙醇并定容至刻度 , 摇匀 , 作为供
试品溶液 .
2.4总黄酮测定方法及改进
天然产物中黄酮类化合物的测定方法主要有高效液
相色谱法和比色法 〔8〕.高效液相色谱法主要用于测定单
一黄酮类成分 , 比色法主要用于测定总黄酮 , 而比色法
大多以芦丁为对照品 , 采用 NaNO2 -Al盐 -NaOH的显
色体系在可见光区测定 , 已有文献报道此方法测定总黄
酮专属性差 〔9〕.本实验发现犁头草中黄酮化合物采用上
述显色方法后的光谱特性并不相同 , 其与对照品相一致
的最大吸收不在可见区 , 而在紫外光谱区;此外 , 样品
仅加三氯化铝显色与同时加入三氯化铝和氢氧化钠显色
后的最大吸收波长相同 , 且仅加三氯化铝中性条件下显
色后的溶液稳定性好 , 吸收度高 (关于上述实验的条件
考察及影响因素另文专门讨论), 故对传统测定方法进行
改进 , 采用仅加入三氯化铝在中性条件下显色 , 用紫外
分光光度法测定 , 结果满意 .
2.4.1测定波长的选择
将芦丁对照品和供试品溶液按实验方法操作 , 在
200 ～ 800 nm进行波长扫描见图 1和图 2.结果表明 , 对
照品和供试品的络合物在 274nm处有最大吸收 , 且光谱
形状极为相似 , 形成的络合物在常温下稳定性较好 , 满
足分光光度法测定的基本要求 , 因此 , 选定 274nm作为
测定波长 .
图 1　芦丁对照品扫描图　　　图 2　犁头草样品扫描图
2.4.2测定方法
取上述芦丁对照品或供试品溶液 , 置于 25 mL比色
管中 , 加入 0.1 moL/L的三氯化铝溶液 3 mL, 摇匀 , 再
加入 65 %乙醇并定容至刻度 , 摇匀 , 放置 10 min后 ,
用 1 cm比色皿以试剂空白为参比 , 在波长 274 nm处测
定吸光度 .
2.4.3标准曲线及线性范围
精密吸取 0.1、 0.6、 1.0、 1.4、 2.0 mL芦丁对照品
于 25mL比色管中 , 按实验方法处理 , 测定吸光度 , 并
随行做空白试验 , 得标准曲线回归方程 A = 0.0436 C
+0.0752, R =0.9997 (n=5), 表明芦丁在 0.8 ～ 16
μg/mL浓度范围内与吸光度成良好的线性关系 .
2.4.4精密度试验
分别精密吸取 1.00 mL供试品溶液各 5份 , 按实验
方法操作 , 测定其吸光度 .结果表明 5次测定的吸光度
的 RSD为 0.37%, 因此 , 仪器的精密度良好.
2.4.5稳定性试验
精密吸取供试品溶液 , 按实验方法操作 , 分别于 0,
4, 8, 12, 24h在 274 nm处测定其吸光度 , 结果表明 ,
吸光度在 24h内测定是稳定的 , RSD为 1.23%.
2.4.6加样回收率试验
精密吸取犁头草样品溶液五份 , 每份 1.00 mL, 各
加入芦丁对照品溶液 0.2mL测定吸光度 , 计算平均回收
率为 99.5%, RSD为 1.76%.
2.4.7样品中总黄酮含量的测定
取供试品溶液三份 , 测定吸光度 , 取平均值 , 按回
归方程计算黄酮 , 结果为 15.5%.
3　讨论
实验结果表明 , 本实验方法简单 , 渗漉法提取 、 纯
化而得到的黄酮类物质其纯度较高 .75%乙醇可以有效
穿透植物细胞壁 , 达到省时 、 高效 、 节能的目的 , 此方
法采用全物理过程 , 无任何污染 , 是一条理想的提取高
含量黄酮类物质的途径 , 也有利于下一步的分离纯化单
体成分的研究 , 具有广阔的应用前景 .
目前 , 犁头草的研究未得到广泛开展 , 其化学成分
和含量测定未见文献报道 , 但是民间使用和临床疗效却
较好 .据报道 , 犁头草内服外敷治疗化脓性关节炎 , 取
得了满意疗效 〔3-4〕;犁头草水提取物和乙醇提取物可明
显抑制疱疹病毒 , 有抗 HBsAg的功效 〔5〕 , 用犁头草和黄
柏等制成的犁头冰散治疗创伤性溃疡 , 全部治愈 〔6〕;以
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犁头草组方的 “复方九神汤 ” 对急慢性骨髓炎治疗有效
率为 100 %, 治愈率达 94 %〔7〕.此外 , 据 《植物名实图
考》 等文献记载 , 犁头草能清热解毒 , 除脓消炎 .治痈
疽 、 疔毒 、 外伤感染 、 出血 、 毒蛇咬伤和湿热肠痈下血 、
角膜实质炎及匐行性角膜溃疡 、 扁桃体炎 、 肺炎 、 盆腔
炎 、 疮疡等症 , 内服并外用 .可见 , 犁头草具有广泛的
开发和利用价值 , 值得加强资源开发 , 实现综合利用.
实验表明 , 犁头草中的总黄酮含量达 15 %以上 , 在
植物界并不多见 , 而黄酮类化合物是一大类天然产物 ,
在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇 , 其他包括双氢黄
(醇)、 异黄酮 、 双黄酮 、 黄烷醇 、 查尔酮 、 橙酮及花色
苷等 .天然来源的生物黄酮分子量小 , 能通过血脑屏障 ,
进入脂肪组织而消除疲劳 、 保护血管 、 防动脉硬化 、 扩
张毛细血管 、 疏通微循环 、 抗脂肪氧化 、 抗衰老 、 活化
大脑及其他脏器细胞的功能 , 具有抗癌 、 抗肿瘤 、 抗心
脑血管疾病 、 抗炎镇痛 、 免疫调节 、 降血糖 、 治疗骨质
疏松 、 抑菌抗病毒 、 抗氧化 、 抗衰老 、 抗辐射等作用 .
而犁头草中含有丰富的黄酮类成分 , 且植物资源丰富 ,
分布广泛 .因此 , 对于犁头草中的黄酮类成分的定量和
研究具有重要的意义 .
本实验建立了紫外分光光度法测定犁头草提取物中
总黄酮的方法 .实验表明 , 本法具有操作简单 、 仪器要
求低 、 灵敏度高 、 准确度较好 、 试剂用量少 、 重现性好 、
测定环境中性 、 对样品无破坏等优点 , 用于犁头草中总
黄酮的测定 , 结果满意 .
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TheChemicalCompositionandDeterminationof
TotalFlavonoidsinLitouCaobyUVSpectro-photometry
XIEJuanping
(DepartmentofChemistry-ChemicalEngineering, AnkangUniversity, Ankang725000, Shaanxi, China)
Abstract:Objective:Tostudychemicalcompositionandtoestablishthedeterminationmethodfortotalflavonoid
compoundsinChineseHerbalMedicineLitouCao.Method:chemicalidentificationactwasusedasQualitativeanaly-
sis;RutinwasusedasreferencesamplebyUVspectro-photometryandthemeasurementwasconductedat274
nm.Results:extractionsofLitouCaocontainsalargenumberofflavonoids, Thetotalflavonoidcontentsis15.5%.
TheabsorbencyandconcentrationofaRutinhadgoodlinearintherangeof0.8 ～ 16.0μg/mL, r=0.9997(n=5).The
recoveryratewas99.5%, RSD% was1.76% (n=5).Conclusion:Thestudyreportedthechemicalcomposition
andDeterminationofflavonoidsinChineseHerbalMedicineLitouCaoforthefirsttime;Themethodisreliableand
canbehelpfultoeffectivelythequalitycontrolofChineseHerbalMedicineLitouCao.
Keywords:ChineseHerbalMedicineLitouCao;totalflavonoids;Rutin;UVspectrophotomatry
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