全 文 ：2014年 第 17卷 第 4期 广西中医药大学学报
收稿日期：2014-11-20
基金项目：国家自然科学基金项目（编号：81360646）；广西教育厅高校科研项目（编号：LX2014163）
作者简介：秦华珍，教授，博士，从事中药理论与中药药效研究
通信作者：黄燕琼，E-mail：26017473@qq.com
不同产地大高良姜高效液相色谱指纹图谱研究
秦华珍 1，谭喜梅 1，黄燕琼 2，柳俊辉 1，翁铭钻 1，谢 鹏 1，龙小琴 1，罗 君 1
（1.广西中医药大学药学院，广西 南宁 530001；
2.广西中医药大学附属瑞康医院，广西 南宁 530011）
摘 要：［目的］采用高效液相色谱法建立不同产地大高良姜药材的指纹图谱。［方法］采用 phenomenex-C18色谱柱
（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱，流速为 1.0 ml/min，柱温为 30 ℃，检测波长为 260 nm。［结
果］建立了 10批不同产地大高良姜药材乙醇提取部位的高效液相色谱指纹图谱，确定了 10个共有峰及其相对保留时间和相
对峰面积，不同产地大高良姜药材指纹图谱的相似度均大于 0.90。［结论］该分析方法稳定、可靠，可用于大高良姜药材质量的
控制和鉴别。
关键词：大高良姜；指纹图谱；高效液相色谱法
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：2095-4441（2014）04-0069-03
大高良姜为姜科山姜属植物大高良姜（Alpinia galanga L.）
的干燥根茎，又名大良姜、良姜，主产于我国的广东、广西、云
南、台湾等地。其性温，味辛，有温胃、散寒、行气止痛之功效，
主治胃脘冷痛、伤食吐泻等症［1］。由于受地理环境和生长因
素的影响，不同产地大高良姜的化学成分及其含量存在一定
差异，从而造成药材质量不稳定，品质各异，这将会影响到该
药的临床疗效和基础研究［2］。为了提高其质量和疗效，也为
了更好地开发利用大高良姜药材，本研究采用高效液相色谱
建立了大高良姜乙醇提取部位的指纹图谱分析方法，共分析
了 10批不同产地的大高良姜药材，分离效果好，确认出 10个共
有峰，为进一步评价和控制大高良姜药材质量提供了依据。
1 实验材料
1.1 仪器 安捷伦 Agilent 1260型高效液相色谱仪（DAD检
测器、四元泵、在线脱气装置、自动进样器），Chem.Station工作
站（Agilent科技有限公司）；BP211D万分之一克电子天平（德
国赛多利斯生产）；HH-4数显恒温水浴锅（国华电器有限公
司）；SB25-12D 型超声清洗仪（宁波新芝生物科技有限
公司）。
1.2 试药 大高良姜药材，购自广西玉林、凭祥、南宁及云南
等 10个不同产地。样品来源见表 1。乙腈、甲醇为色谱纯（赛
默飞世尔科技有限公司）；磷酸为优级纯；水为超纯水；乙醇为
分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：phenomenex -C18柱（250mm×4.6mm，
5 μm）；流动相为乙腈（B）-0.1%磷酸水溶液（A），采用梯度洗
脱（洗脱程序见表 2）；检测波长：260 nm；流速：1.0 ml/min；柱
温：30℃；进样量：10 μl。
表 1 不同产地大高良姜的来源
S1 广西宾阳 广西宾阳
样品号 产地 来源
130601
批号
S2 广西金秀 广西金秀 130601
S3 广西南宁 广西南宁 130801
S4 广西凭祥 广西凭祥 130901
S5 广西防城港 广西防城港 130601
S6 广西武鸣 广西武鸣 140901
S7 广西玉林 广西玉林制药厂 140730
S8 云南 广西玉林制药厂 140701
S9 广西南宁 南宁市湘君大药房 130901
S10 广西玉林 广西玉林制药厂 140730
表 2 流动相梯度洗脱程序
0 90 10
时间（min） A（0.1%磷酸水）% B（乙腈）%
25 58 42
30 58 42
35 52 48
55 30 70
65 15 85
69· ·
2014，Vol．17 No．4Journal of Guangxi University of Chinese Medicine
2.2 供试品溶液的制备［3-4］ 精密称取大高良姜药材粉末
10 g，准确加入 8倍量 95%乙醇，加热回流提取 2 h，过滤，滤
渣再加入 5倍量 95%乙醇提取 1.5 h，过滤，合并两次提取液，
将提取液减压浓缩，水浴挥干。精密称定 10 mg干膏，用甲醇
超声溶解定容至 10 ml的容量瓶中，摇匀，并用 0.22 μm的一
次性针筒过滤器过滤即得。按上述色谱条件进样测定，色谱
图见图 1。
2.3 方法学考察［5］
2.3.1 精密度试验 取同一供试品溶液，连续进样 6次，考察
色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的一致性。计算出各色
谱峰相对保留时间的 RSD值为 0.01%～0.09%，相对峰面积的
RSD值为 0.46%～2.96%。采用相似度软件评价，其相似度均
大于 0.99，符合指纹图谱研究技术的要求。结果表明，各共有
峰的相对保留时间和相对峰面积均没有明显变化，表明仪器
精密度良好。
2.3.2 稳定性试验 取供试品溶液，分别于放置 0，2，4，6，
12，24 h后检测，计算出各色谱峰相对保留时间的 RSD值为
0.028%～0.15%，相对峰面积的 RSD值为 0.24%～2.62%，采用
相似度软件评价，其相似度均大于 0.99，符合指纹图谱研究技
术的要求。结果表明样品溶液在 24 h内稳定。
2.3.3 重复性试验 取同一批号的样品 6份，按照 2.2项下
方法制备并检测，各色谱峰相对保留时间的 RSD 值为
0.055%～0.39%，相对峰面积的 RSD值为 0.07%～1.67%。采用
相似度软件评价，其相似度均大于 0.93，符合指纹图谱研究技
术的要求。结果表明，样品制备和检测方法重现性良好。
2.4 指纹图谱的建立 取 10批不同产地的大高良姜，按 2.2
项制备供试品溶液，再根据 2.1项色谱条件依次进样分析，得
到 HPLC指纹图谱（图 2）。采用国家药典委员会相似度评价
软件进行相似度计算［6］，根据以上供试品的检测结果及其相
关参数，选择相似度评价软件中生成的共有指纹图谱作为对
照指纹图谱（图 3）。根据以上供试品的检测结果，确定 10个
共有峰，以 6号峰为内参照峰，根据参照峰的保留时间和峰面
积计算各峰的相对保留时间（表 3）和相对峰面积值（表 4）。
表 3 不同产地大高良姜各共有峰的相对保留时间 （min）
1 6.09 6.12 6.12
峰号 S1 S2 S3
6.13
S4 S5
6.13
S6 S7 S8 S9 S10 R
6.12 6.89 6.58 5.96 5.96 6.12
2 13.71 13.75 13.19 13.76 13.76 13.76 13.92 14.50 13.20 13.20 13.75
3 22.30 22.35 21.99 22.36 22.36 22.36 22.75 23.05 23.39 22.00 22.35
4 26.80 26.85 26.28 26.86 26.85 26.85 26.88 27.58 26.26 26.30 26.85
5 29.10 29.15 28.73 29.16 29.15 29.15 29.11 29.90 28.70 28.75 29.14
6 37.33 37.38 36.73 37.39 37.39 37.39 36.95 38.29 36.70 36.76 37.40
7 38.85 38.90 38.27 38.90 38.90 38.90 38.45 39.78 40.95 41.04 38.89
8 41.42 41.47 41.01 41.47 41.47 41.47 41.15 42.30 41.01 43.36 41.46
9 53.73 53.76 53.29 53.76 53.76 53.76 53.30 54.39 53.29 53.37 53.76
10 55.37 55.39 54.96 55.39 55.40 55.40 54.97 56.01 55.03 55.04 55.40
图 1 大高良姜的 HPLC色谱图
mU
200
150
100
50
0
10 20 30 40 50 min
图 2 大高良姜 HPLC指纹图谱
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50 52 54 56 58 60 min
S10
S9
S8
S7
S6
S5
S4
S3
S2
S1
图 3 大高良姜药材对照指纹图谱
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 min
300
250
200
150
100
50
0
mu
70· ·
2014年 第 17卷 第 4期 广西中医药大学学报
采用国家药典委员会相似度评价软件进行计算，除了
S3、S4和 S8样品的相似度较低外，S1、S2、S6和 S9样品的相
似度较高，其相似度均大于 0.947。在供试品色谱图中共有 10
个共有峰。大高良姜指纹图谱中各共有峰在客观上有一定的
相似性，但主要峰群的整体图貌及共有特征峰的相对含量有
一定差异。从表 3可看出，S3、S4和 S10样品的大部分色谱峰
的峰面积明显高于其他 7个产地的样品，其中 S1和 S6样品
中匹配得到各色谱峰的峰面积偏低于对照指纹图谱中相应的
峰，表明其代表的化学成分和对照指纹图谱相比有较大的差异。
3 讨 论
本研究所建立的方法在精密度、重现性和稳定性方面完
全符合指纹图谱研究的技术要求，为大高良姜的质量控制提
供科学依据［5］。在预试验中通过全波长扫描比较不同波长下
的色谱图，发现 260 nm的吸收强度最大，出峰最多，且峰形较
好，故选择 260 nm作为检测波长。通过比较甲醇-水、乙腈-
水、乙腈-0.1%磷酸水溶液等流动相的分离效果，结果乙腈-
0.1%磷酸水溶液分离效果好，且基线比较平稳，故选择乙腈-
0.1%磷酸水溶液作为流动相。通过不同梯度洗脱程序、不同
流速和不同柱温的比较，最终建立了大高良姜药材高效液相
色谱指纹图谱分析方法。方法学考察结果显示，液相指纹图
谱分析方法方便快捷、准确可靠，该方法可用于大高良姜药材
质量的控制和鉴别。
根据相似度评价系统分析，广西大部分地区的大高良姜
有着很大的相似性，而云南产的大高良姜在总体上也和广西
各地区的大高良姜相似，但是云南产大高良姜的出峰时间有
些延迟，这种现象可能与大高良姜的生长环境不同有关。不
同产地大高良姜液相指纹图谱的差异与其所含化学成分和相
对含量之间有一定关系，可作评价其质量的一种手段。
参考文献
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（编辑 陈明伟）
表 4 不同产地大高良姜各共有峰的相对峰面积 （mU）
1 373.06 404.47 516.00
峰号 S1 S2 S3
452.40
S4 S5
255.70
S6 S7 S8 S9 S10 R
158.40 246.51 344.60 258.30 316.40 332.58
2 276.90 223.87 394.30 308.88 214.20 202.37 370.04 412.60 399.40 380.04 318.26
3 2387.55 2677.08 3833.40 4089.17 3178.70 1508.93 3721.99 3415.30 3923.40 3937.80 3267.33
4 199.00 232.00 272.40 225.55 212.90 576.97 217.27 275.10 255.90 272.90 274.00
5 482.11 443.64 896.40 594.15 590.10 2602.66 843.32 470.90 899.90 899.70 872.29
6 2464.71 2808.28 4222.00 5134.53 4782.90 2405.15 4150.63 5066.40 4321.50 4346.90 3970.30
7 443.84 425.54 572.50 759.91 3128.60 2202.01 610.83 2080.10 597.00 585.80 1140.61
8 1228.62 1293.67 1284.40 2239.98 1255.70 714.65 1320.56 87.20 1330.80 1334.50 1209.01
9 549.72 635.35 1006.20 1209.29 954.50 543.90 984.64 826.30 1009.70 1006.20 872.58
10 268.43 314.52 486.30 614.58 452.20 441.90 476.81 279.70 521.60 487.80 434.38
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