全 文 ：收稿日期：２０１１－０９－１７
基金项目：河南省教育厅自然科学基金项目（２０１０Ｂ１８００３４）
作者简介：赵锦慧（１９７９－），女，河南周口人，讲师，硕士，主要从事生物技术方面的研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈａｏｊｉｎｈｕｉ２００５＠１２６．ｃｏｍ
中草药犁头草的体外抑菌作用研究
赵锦慧，葛红莲，赖　颖，郭　婕
（周口师范学院 生命科学系，河南 周口４６６０００）
摘要：为测定中草药犁头草的体外抑菌作用，利用平板菌落计数法筛选１０３　ｃｆｕ／ｍＬ的大肠杆菌和
金黄色葡萄球菌菌液，并将其涂布到细菌培养基与不同质量浓度中草药犁头草混合的药液培养基
上，测定犁头草对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌率和最小抑菌浓度。结果显示，犁头草对大肠
杆菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌质量浓度分别为２５０ｍｇ／ｍＬ和６２．５ｍｇ／ｍＬ；在药液质量浓度
不小于最小抑菌质量浓度时，犁头草对以上２种细菌的抑菌率均为１００％。由此看出，犁头草对大
肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有明显的体外抑制作用，且对金黄色葡萄球菌的抑制效果优于大肠杆
菌。
关键词：中草药；犁头草；大肠杆菌；金黄色葡萄球菌；抑菌率；最小抑菌浓度
中图分类号：Ｒ２８５．５　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００４－３２６８（２０１２）０２－０１４６－０３
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　Ａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ
Ｈｅｒｂａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｖｉｏｌａ　ｊａｐｏｎｉｃａ　Ｌａｎｇｓｄ．
ＺＨＡＯ　Ｊｉｎ－ｈｕｉ，ＧＥ　Ｈｏｎｇ－ｌｉａｎ，ＬＡＩ　Ｙｉｎｇ，ＧＵＯ　Ｊｉｅ
（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｚｈｏｕｋｏｕ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｏｕｋｏｕ　４６６０００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｌｉｑｕｉｄ　ｗｉｔｈ　１０３　ｃｆｕ／ｍＬ　ｗａｓ　ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｂｙ　ｆｌａｔ　ｃａｌｃｕｌａｔｉｎｇ　ｃｏｌｏｎｙ，ｗｈｉｃｈ　ｗａｓ
ｓｍｅａｒｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｍｉｘｔｕｒｅ　ｏｆ　ｎｏｒｍａｌ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ａｎｄ　Ｖｉｏｌａ　ｊａｐｏｎｉｃａ　Ｌａｎｇｓｄ．ｗｉｔｈ　ｄｉ－
ｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｖｉｏｌａ　ｊａｐｏｎｉｃａ　Ｌａｎｇｓｄ．Ｅ．ｃｏｌｉ　ａｎｄ　Ｓｔａｐｈｙｌｏ－
ｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　ｗｅｒｅ　ｅｖａｌｕａｔｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｒａｔｅ　ａｎｄ　ＭＩＣ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　Ｖｉｏｌａ　ｊａ－
ｐｏｎｉｃａ　Ｌａｎｇｓｄ．Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ　ｏｂｖｉｏｕｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ａｃｔｉｏｎ　ｔｏ　Ｅ．ｃｏｌｉ　ａｎｄ　Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ．
Ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔ　ｔｏ　Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　ｗａｓ　ｓｕｐｅｒｉｏｒ　ｔｏ　Ｅ．ｃｏｌｉ．Ｔｈｅ　ｍｉｎｉｍａｌ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ＭＩＣ）ｏｆ　Ｖｉｏｌａ　ｊａｐｏｎｉｃａ　Ｌａｎｇｓｄ．ｔｏ　Ｅ．ｃｏｌｉ　ａｎｄ　Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　ｗａｓ　２５０
ｍｇ／ｍＬ　ａｎｄ　６２．５ｍｇ／ｍＬ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　１００％ ｗｈｅｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ
ｌｉｑｕｏｒ　ｗａｓ　ｅｑｕａｌ　ｏｒ　ｇｒｅａｔｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＭＩＣ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｈｅｒｂａｌ　ｍｅｄｉｃｉｎｅ；Ｖｉｏｌａ　ｊａｐｏｎｉｃａ　Ｌａｎｇｓｄ．；Ｅ．ｃｏｌｉ；Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ；
ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｒａｔｅ；ｍｉｎｉｍａｌ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ＭＩＣ）
　　致病性大肠杆菌和金黄色葡萄球菌是导致动物
患病的常见病原菌，前者常引起严重腹泻、败血症
等，后者常引起局部化脓感染、败血症、毒素性疾病
等，治疗不及时常引起动物死亡［１］。长期以来，主要
靠抗生素抑制和杀灭细菌，但长期使用抗生素一方
面会造成药物残留问题，另一方面会使细菌产生耐
药性。而中草药具有取材天然，作用平稳，毒副作用
小等抗生素无法比拟的独特优点［２－３］，通常具有清热
解毒功效的中草药在体外大多显示一定的抗菌活
性，本试验选取常见的清热解毒中草药犁头草，研究
其对致病性大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的体外抑制
作用，旨在为研制开发天然抗菌中草药制剂及动物
　河南农业科学，２０１２，４１（２）：１４６－１４８
　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｈｅｎａｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
DOI:10.15933/j.cnki.1004-3268.2012.02.007
细菌性疾病的预防和治疗提供科学的理论依据。
１　材料和方法
１．１　试验材料
犁头草购于周口市同和堂大药店；致病性大肠
杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ）、金黄色葡萄球菌（Ｓｔａｐｈｙ－
ｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）由周口师范学院生命科学系微生物
实验室提供；牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。
１．２　试验方法
１．２．１　菌悬液的配制及稀释　用接种环从活化后
的斜面菌种上刮少量菌，加入至１００ｍＬ无菌生理
盐水中，振摇５ｍｉｎ，制成均匀的菌悬液。用微量移
液器吸取１ｍＬ菌悬液，加入到装有９ｍＬ无菌生理
盐水的试管里混匀，制成１０－１的稀释菌液，再从
１０－１的稀释菌液中吸取１ｍＬ加入到装有９ｍＬ无
菌生理盐水的试管中，制成１０－２的稀释菌液，依次
类推，分别制成１０－３、１０－４……的稀释菌液，并对每
个梯度的菌悬液进行平板菌落计数，直至获得合适
稀释度（本试验用于测定抑菌率和最小抑菌浓度
（ＭＩＣ）的菌悬液的合适菌体密度为１０３ｃｆｕ／ｍＬ）。
每个稀释度设３次重复。
１．２．２　中草药犁头草提取液的制备及药液稀释　
准确称取供试中草药犁头草５０ｇ，加水２００ｍＬ，浸
泡３０ｍｉｎ，文火加热煮沸１ｈ，用纱布过滤后得提取
液，滤渣用４倍水量煎煮２次后弃去，将３次所得滤
液混合并浓缩到５０ ｍＬ，使生药质量浓度达到
１ｇ／ｍＬ。所得提取液在１２１℃高压蒸汽灭菌２０ｍｉｎ
后，４℃下保存备用。
将提取液原液用无菌水进行二倍稀释［４］，得
５００、２５０、１２５、６２．５、３１．３、１５．６ｍｇ／ｍＬ的稀释药液。
１．２．３　最小抑菌浓度（ＭＩＣ）的测定　分别取原药液
与６个稀释度的药液各１０ｍＬ，分别与１０ｍＬ牛肉膏
蛋白胨固体培养基混匀，制成提取物的质量浓度分别
为５００、２５０、１２５、６２．５、３１．３、１５．６、７．８ｍｇ／ｍＬ（ｍ／Ｖ）
的药液培养基，每种质量浓度的平板上均涂布菌体
密度１０３ｃｆｕ／ｍＬ的菌悬液０．１ｍＬ，倒置培养２４ｈ
观察，以完全无菌生长的平皿所对应的最小药液质
量浓度为 ＭＩＣ。设３次重复，设空白对照板（普通
培养基不接种细菌）、菌液对照板（普通培养基同法
接种细菌）、药液对照板 （最低质量浓度药液平板不
接种细菌）。
１．２．４　抑菌率的测定　同 ＭＩＣ的测定，首先制备
系列质量浓度的药液培养基，再取菌液０．１ｍＬ涂
布平板，倒置培养２４ｈ后观察。设３次重复，设空
白对照板。
抑菌率＝（对照菌落数－处理菌落数）／对照菌
落数×１００％。
１．２．５　数据分析方法　试验数据采用计算机统计
软件ＳＰＳＳ　１６．０进行分析。
２　结果与分析
２．１　大肠杆菌和金黄色葡萄球菌菌悬液合适稀释
度的确定
不同稀释度的菌悬液对应的菌落数调查结果见
表１。由于本试验用于测定抑菌率和 ＭＩＣ的菌悬
液的合适菌体密度为１０３ｃｆｕ／ｍＬ，所以由表１可知，
试验用菌液的合适稀释度为１０－４。
表１　大肠杆菌和金黄色葡萄球菌菌体稀释度与菌体密度
稀释度
菌体密度／（ｃｆｕ／ｍＬ）
大肠杆菌 金黄色葡萄球菌
１０－１　 ３．２×１０６　 ５．６×１０６
１０－２　 ２．９×１０５　 ５．８×１０５
１０－３　 ２．７×１０４　 ５．２×１０４
１０－４　 ３．１×１０３　 ５．３×１０３
１０－５　 ３．５×１０２　 ４．８×１０２
　注：表中数据为３次重复的平均值。
２．２　中草药犁头草对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌
的 ＭＩＣ
测定 ＭＩＣ时，为确保试验准确，设置了空白对
照板（普通培养基不接种细菌）、菌液对照板（普通培
养基同法接种细菌）、药液对照板 （最低质量浓度药
液平板不接种细菌）。经过２４ｈ培养后，观察到空
白对照板与药液对照板无任何细菌生长，说明培养
基及药液无污染；菌液对照细菌正常生长，说明２种
细菌及培养基均正常。
由表２可知，一定质量浓度的犁头草对２种致病
菌均表现出明显的抑制性，对大肠杆菌和金黄色葡萄
球菌的 ＭＩＣ分别为２５０ｍｇ／ｍＬ、６２．５ｍｇ／ｍＬ。
表２　犁头草对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的 ＭＩＣ
药液质
量浓度／
（ｍｇ／ｍＬ）
对大肠杆菌
抑制效果
重复Ⅰ 重复Ⅱ 重复Ⅲ
对金黄色葡萄球菌
抑制效果
重复Ⅰ 重复Ⅱ 重复Ⅲ
５００ － － － － － －
２５０ － － － － － －
１２５ ＋ ＋ ＋ － － －
６２．５ ＋ ＋ ＋ － － －
３１．３ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
１５．６ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
７．８ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
　注：“－”表示无菌生长；“＋”表示有菌生长。
７４１　第２期 赵锦慧等：中草药犁头草的体外抑菌作用研究
２．３　中草药犁头草对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌
的抑菌率
表３显示，与对照相比，７个质量浓度下的犁头
草药液均表现出抑菌效果，随药液质量浓度的增大，
抑菌率呈上升趋势。不同质量浓度的药液对２种致
病菌的抑菌效果差异显著，质量浓度≥２５０ｍｇ／ｍＬ
时能完全抑制大肠杆菌的生长，≥６２．５ｍｇ／ｍＬ时
能完全抑制金黄色葡萄球菌的生长，这与前面最小
表３　犁头草对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌率
药液质量浓度／
（ｍｇ／ｍＬ）
对大肠杆菌的抑菌率／％
重复Ⅰ 重复Ⅱ 重复Ⅲ 平均值
对金黄色葡萄球菌的抑菌率／％
重复Ⅰ 重复Ⅱ 重复Ⅲ 平均值
５００　 １００　 １００　 １００　 １００．００±０．００ａ １００　 １００　 １００　 １００．００±０．００ａ
２５０　 １００　 １００　 １００　 １００．００±０．００ａ １００　 １００　 １００　 １００．００±０．００ａ
１２５　 ６０．２　 ５６．４　 ５７．６　 ５８．０７±１．９４ｂ １００　 １００　 １００　 １００．００±０．００ａ
６２．５　 ３５．３　 ３９．１　 ３２．３　 ３５．５７±３．４１ｃ １００　 １００　 １００　 １００．００±０．００ａ
３１．３　 ５．２　 ６．６　 ８．３　 ６．７０±１．５５ｄ ３２．５　 ３９．２　 ３６．７　 ３６．１３±３．３９ｂ
１５．６　 １．４　 １．１　 １．６　 １．３７±０．２５ｅ ８．７　 ７．４　 １０．５　 ８．８７±１．５６ｃ
７．８　 ０．６　 ０．４　 ０．３　 ０．４３±０．１５ｅ ２．６　 ４．１　 ３．４　 ３．３７±０．７５ｄ
０　 ０　 ０　 ０　 ０．００±０．００ｅ ０　 ０　 ０　 ０．００±０．００ｅ
　注：表中同列数据后标不同小写字母者表示差异显著（Ｐ＜Ｏ．０５），标相同字母者表示差异不显著（Ｐ＞Ｏ．０５）。
抑菌浓度测定的试验结果表现一致。
３　小结
本试验通过测定 ＭＩＣ值和抑菌率大小来研究
中草药犁头草对致病性大肠杆菌和金黄色葡萄球菌
的抑制效果。试验结果显示，２个测定指标反映出
的抑菌效果一致，犁头草能明显抑制大肠杆菌和金
黄色葡萄球菌的生长，ＭＩＣ值分别为２５０ｍｇ／ｍＬ、
６２．５ｍｇ／ｍＬ。在药液质量浓度分别不小于２５０
ｍｇ／ｍＬ和６２．５ｍｇ／ｍＬ时，犁头草对大肠杆菌和金
黄色葡萄球菌的抑菌率测定结果均为１００％。
目前，对于犁头草的研究尚未得到广泛开展，但
其临床疗效却较好。郑晓辉等［５］报道，犁头草内服
外敷可治疗化脓性关节炎；犁头草水提取物和乙醇
提取物可明显抑制疱疹病毒，有抗 ＨＢｓＡｇ的功
效［６］；用犁头草和黄柏等制成的犁头冰散治疗创伤
性溃疡，治愈达１００％［７］。本试验确定了犁头草的
另一个功效即抑菌作用。犁头草本身也含有一定的
营养物质，如粗蛋白、粗脂肪、维生素等，所以在生产
实践中，可以考虑将犁头草加入到动物饲料中，这样
在防病抗菌的同时，还能促进动物生长、增强免疫
力，提高机体抗病能力。
中草药杀菌剂的研究大多处于粗提物抑菌研究
阶段，缺乏对于抑菌有效成分的分析及其相互间效应
的研究，对抗菌活性物质的进一步分离纯化及其结构
解析将有助于人们更好地开发利用这一植物资源。
参考文献：
［１］　韩文瑜，冯书章．现代分子病原细菌学［Ｍ］．长春吉林
人民出版社，２００３：３４０－３４１．
［２］　赵恒章，李国旺，徐之勇，等．６０种中草药对猪源致病
性大肠杆菌体外抑菌试验［Ｊ］．河南农业科学，２００８
（１０）：１２９－１３１．
［３］　郑成江，吕世玺，张连洪，等．中草药饲料添加剂的研究
进展与展望［Ｊ］．天津农业科学，２０１０，１６（５）：５１－５４．
［４］　郑钧镛．药物微生物及检验技术［Ｍ］．北京：人民卫生
出版社，１９８５：３５１－３５２．
［５］　郑晓辉，沈泽培，黄枫．犁头草治疗化脓性关节炎［Ｊ］．
中医药学刊，２００５，２３（８）：１５２６－１５２８．
［６］　郑民实．犁头草水提取物和乙醇提取物抗Ⅰ型单纯疱
疹病毒研究［Ｊ］．微生物杂志，１９８７，７（４）：１３－１５．
［７］　张争鸣．犁头冰散治疗创伤性溃疡１２０例［Ｊ］．湖南中
医杂志，１９９６，１２（５）：２２－２３．
８４１ 河南农业科学 第４１卷