免费文献传递   相关文献

白背叶根提取物的急性毒性及抗炎作用研究



全 文 :2015年 第 18卷 第 1期 广西中医药大学学报
白背叶根提取物的急性毒性及抗炎作用研究
刘海燕 1,黄卓坚 2,夏 星 1,冯 桥 2,黄 欢 1,邓裕彦 1,王志萍 1
(1.广西中医药大学,广西高校中药制剂共性技术研发重点实验室,广西 南宁 530001;
2.广西壮族自治区民族医药研究院,广西 南宁 530001)
摘 要:[目的]研究白背叶根提取物的急性毒性及抗炎作用。[方法]白背叶根提取物最大溶解量为 0.233 g(药粉重)/ml,
一次给药后无小鼠死亡,无法测出 LD50,故以白背叶根提取物最大浓度及小鼠能承受的最大体积(40 ml/kg)灌胃,测定并评价白
背叶根提取物的最大给药量;采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀、棉球致小鼠肉芽肿胀、蛋清致小鼠足趾肿胀等模型观察白背叶根的
抗炎作用。[结果]白背叶根提取物最大给药量为 27.96 g/(kg·d),相当于小鼠有效给药量的 78倍。白背叶根提取物高、中剂量
均能显著减轻二甲苯致小鼠耳廓肿胀度(P <0.01);白背叶根提取物高剂量能显著减少棉球诱导小鼠肉芽肿重量(P <0.05);白
背叶根提取物高、中剂量均能显著降低蛋清致小鼠肿胀足的 1 h、2 h、3 h的肿胀率(P <0.05或 P <0.01)。[结论]白背叶根提
取物急性毒性低,对急、慢性小鼠模型炎症具有明显的抑制作用。
关键词:白背叶根;提取物;急性毒性;抗炎作用;实验研究
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:2095-4441(2015)01-0009-03
收稿日期:2015-01-26
基金项目:广西高校中药制剂共性技术重点实验室系统课题(编号:ZJGX201402001);广西壮族自治区卫生厅中医药科技专项
(编号:GZZJ14-08);广西自然基金项目(编号:2014GXNSFAA118182)
作者简介:刘海燕(1990-),女,硕士研究生,研究方向:中药民族药新制剂研发
通信作者:王志萍,E-mail:318007460@qq.com
白背叶根为广西民间常用草药,系壮药材之一,为大戟科
野桐属植物白背木 Mallotus apelta(Lour.)Muell. Arg. 的干燥
根,白背叶根含有三萜类[1]、香豆素类[2]、有机酸类[3]等化合
物。壮医药理论认为,其性平,微涩、微苦,具有通谷道、除湿
毒、清热毒的功效,可用于肝炎、脾肿大、降白呆(带下)、肉扭
(淋证)、白冻(泄泻)、兵嘿细勒(疝气)、火眼、中耳炎、子宫下
垂、脱肛[4]。中医药理论认为,其性平,味微苦涩,归肝、脾经。
具有清热解毒、收涩消瘀、抗肝纤维化、抗乙肝病毒、抗肝损伤
作用,对降低转氨酶和缩小肝脾也有一定作用[5-8],用于慢性
肝炎、肝脾肿大、子宫脱垂、脱肛、白带、妊娠水肿[9]。本课题
组曾对白背叶根提取物进行体外抑菌研究[10-11],现进一步对
白背叶根提取物的急性毒性及抗炎作用进行研究,为进一步
研究开发白背叶根提供理论及实验依据。
1 实验材料
1.1 药品与试剂 白背叶根采于广西南宁市郊老虎岭,经广
西中医药大学壮医药学院韦松基教授鉴定为大戟科野桐属植
物白背木 Mallotus apelta(Lour.)Muell. Arg.的干燥根。称取白
背叶根粗粉适量,置于圆底烧瓶中,按料液比 1∶8加入 50%乙
醇,用电热套加热,回流提取 2次,每次 1 h,过滤,合并滤液,
减压浓缩至无醇味,继续浓缩至浓度为 2 g/ml药液[10],喷雾
干燥,得提取物干燥粉末,再分别加蒸馏水配成所需相应浓度
的白背叶根提取物溶液。醋酸地塞米松片(浙江仙琚制药股
份有限公司,批号:1103120);二甲苯(天津市化学试剂厂,批
号:090516);水合氯醛(天津市光复精细化工研究所,批号:
20120728)。
1.2 动物 昆明种小鼠,18~22 g,雄性,由广西医科大学实验
动物中心提供,许可证号:SCXK桂 2009-0003。
1.3 仪器 L-600台式低速自动平衡离心机(长沙湘仪离心
机仪器有限公司);EL-204电子天平[梅特勒-托利多仪器(上
海)有限公司];GZX-9420 MBE电热恒温鼓风干燥箱(上海博
迅有限公司医疗设备厂);PV-200足趾容积测量仪(成都泰盟
科技有限公司)。
2 方 法
2.1 急性毒性试验[12] 经预试验,白背叶根提取物经过干
燥成粉末后,测得其最大溶解量为 0.233 g(药粉重)/ml,一次
给药后无小鼠死亡,无法测出 LD50,故进行最大给药量试验。
方法:选用昆明种小鼠 40只,雌雄各半,随机分为给药组、对
照组各 20只。给药组每次灌胃容积为 40 ml/kg,灌胃药液浓
度为 0.233 g/ml,24 h内灌胃 3次(每次间隔 6 h),累计剂量为
27.96 g/(kg·d),相当于有效给药量的 78倍。对照组给予等量
生理盐水。灌胃后 4 h内注意观察小鼠无中毒反应,随后每天
观察小鼠 1次。每 3天称重 1次,连续观察 15 d。第 16天将
所有供试鼠脱颈椎处死,剖检小鼠的心、肝、脾、肺、肾、胃等脏
器有无异常。
2.2 白背叶根提取物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响[13] 采
用随机方法将雄性小鼠昆明种 60只分为空白对照组,阳性对
9· ·
2015,Vol.18 No.1Journal of Guangxi University of Chinese Medicine
照组,白背叶根低、中、高剂量组,每组 12只,灌胃给药。空白
对照组灌胃等量生理盐水;阳性对照组用地塞米松灌胃给药,
剂量为 0.008 g/kg;白背叶根低、中、高剂量组给药剂量分别为
0.179 g/kg、0.358 g/kg、0.717 g/kg。各组连续给药 7 d,末次给药
后 45 min 在小鼠右耳背腹两侧均匀涂抹二甲苯各 10 μl,
15 min后颈椎脱臼处死,用 6 mm打孔器打下左右两耳同一
部位的组织块,分别称重,肿胀度(mg)=右耳耳片重(mg)-左
耳耳片重(mg)。
2.3 白背叶根提取物对棉球致小鼠肉芽肿胀的影响[13] 采
用随机方法将昆明种雄性小鼠 50只分为空白对照组,阳性对
照组,白背叶根低、中、高剂量组,每组 10只。每组小鼠用水
合氯醛麻醉,在腋下切开小口,用眼科镊将已称重为 10 mg的
灭菌棉球植于皮下,随即缝合皮肤,手术次日开始给药,连续
7 d。空白对照组用等量生理盐水灌胃;阳性对照组用地塞米
松灌胃给药,剂量为 0.008 g/kg;白背叶根低、中、高剂量组给
药剂量分别为 0.179 g/kg、0.358 g/kg、0.717 g/kg。于第 8天处
死小鼠,打开原切口,将棉球连同周围结缔组织一起取出,剔
除脂肪组织,放入烘箱中 60 ℃烘干 6 h,称重,减去棉球原重
量即得肉芽肿胀的重量。
2.4 白背叶根提取物对蛋清致小鼠足趾肿胀的影响 [13] 采
用随机方法将昆明种雄性小鼠 50只分为空白对照组,阳性对
照组,白背叶根低、中、高剂量组,每组 10只。空白对照组给
予等量生理盐水;阳性对照组用地塞米松给药,剂量为 0.006
g/kg;白背叶根低、中、高剂量组给药剂量分别为 0.179 g/kg、
0.358 g/kg、0.717 g/kg。每日灌胃给药 1次,在第 5天用足容积
测量仪测定每只小鼠右足趾正常足趾容积后给药,给药 0.5 h
后,在每只小鼠右足趾部皮下注射 10%蛋清溶液 50 μl。用足
趾容量测定仪分别测定致炎后 1、2、3、4 h的足趾容积,计算
肿胀度。肿胀度=[(致炎后右足趾容积-正常右足趾容积)/正
常右足趾容积]×100%。
2.5 统计学处理 采用 SPSS 13.0统计分析软件,计量资料
以均数±标准差(x±s)表示,两组间均数差异采用 t检验,P <
0.05为有统计学意义。
3 实验结果
3.1 急性毒性试验结果 小鼠给药后行动略显迟缓,1 h后
恢复正常。在 15 d的观察期内,给药组小鼠进食、饮水、大小
便均正常,体重与对照组体重比较无显著性差异(P >0.05),
结果见表 1。整个试验过程无小鼠中毒及死亡现象出现。第
16 d将所有供试鼠脱颈椎处死,剖检小鼠,给药组小鼠与对照
组小鼠比较,内脏无异常。白背叶根醇提物最大耐受量为
27.96 g/(kg·d),相当于有效给药量的 78倍。
3.2 白背叶根提取物对二甲苯致小鼠耳郭肿胀的影响 见
表 2。
在表 2中,与空白对照组比较,白背叶根提取物高、中剂
量均能显著减轻二甲苯致小鼠耳廓肿胀度(P <0.01);地塞米
松亦能显著减轻二甲苯致小鼠耳廓肿胀度(P <0.01)。
3.3 白背叶根提取物对棉球诱导小鼠肉芽肿胀的影响 见
表 3。
在表 3中,白背叶根提取物高剂量能显著减少棉球诱导
小鼠肉芽肿胀重量(P <0.05);地塞米松亦能显著减少棉球诱
导小鼠肉芽肿胀重量(P <0.05)。
3.4 白背叶根提取物对蛋清致小鼠足趾肿胀的影响 见
表 4。
在表 4中,白背叶根提取物高、中剂量均能显著降低蛋清
致小鼠肿胀足的 1,2,3 h的肿胀率(P <0.05或 P <0.01);地塞
米松亦能显著降低蛋清引发的小鼠足 1,2,3,4 h的肿胀率(P
<0.01)。白背叶根提取物在 1 h时开始起效,2 h时作用达到
顶峰之后,3 h时药效有一定程度的减弱,4 h时药效消退。
4 结 论
炎症是机体对细菌、病毒、微生物等侵入物或损伤、过敏
反应等事件产生的保护性反应,但不被控制的、持续的炎症反
表 2 白背叶根提取物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响
(x±s,n=12)
组 别
剂量
(g/kg)
肿胀度
(mg)
肿胀抑制率
(%)
空白对照组 — 7.95±4.10 —
地塞米松组 0.008 2.20±1.60② 72.20
白背叶根高剂量组 0.717 3.40±2.12② 57.23
白背叶根中剂量组 0.358 3.79±2.42② 39.87
白背叶根低剂量组 0.179 5.60±4.10 29.43
注:与空白对照组比较,①P <0.05,②P <0.01;下同
表 1 白背叶根提取物给药前后体重变化 (x±s,n=10)
组别
时间
给药组 对照组
雌 雄 雌 雄
给药前 20.81±1.19 18.17±1.00 20.58±1.10 18.04±1.28
第 3天 23.30±1.95 21.23±1.83 23.68±1.90 21.81±1.66
第 6天 25.37±2.39 22.66±2.11 26.32±2.54 23.87±2.00
第 9天 26.48±2.29 23.46±2.07 27.41±2.54 24.86±2.24
第 12天 26.41±2.54 23.75±1.78 26.55±2.60 25.09±1.65
第 15天 27.92±2.42 25.44±1.85 29.30±3.31 26.53±1.94
表 3 白背叶根提取物对小鼠棉球肉芽肿胀的影响
(x±s,n=10)
组 别
剂量
(g/kg)
棉球肉芽肿胀
(mg)
肿胀抑制率
(%)
空白对照组 — 9.23±2.29 —
地塞米松组 0.008 5.81±3.96① 37.05
白背叶根高剂量组 0.717 6.62±2.11① 28.28
白背叶根中剂量组 0.358 7.17±4.56 22.32
白背叶根低剂量组 0.179 9.15±2.69 0.87
10· ·
2015年 第 18卷 第 1期 广西中医药大学学报
应会对组织产生损害,有的甚至可能导致功能丧失和死亡。
因此,及时中止炎症过程对维持生命是至关重要的。近年来,
中药抗炎作用已经受到广泛关注,白背叶根为广西民间常用
草药,属于地道的广西壮药材,本试验采用的二甲苯诱导小鼠
耳廓肿胀试验、棉球致肉芽肿胀试验、蛋清致小鼠足趾肿胀试
验为常规的急、慢性炎症模型。试验结果表明,白背叶根提取
物能减轻二甲苯致小鼠耳廓肿胀反应,抑制棉球致小鼠肉芽
组织的增生及蛋清致小鼠足肿胀的程度,显示出明显的抗炎
作用,这为今后开发白背叶根提供了科学依据。
参考文献
[1]单雪琴,冯廉彬,吴承顺.白背叶化学成分的分析[J].植物
学报,1985,7(2):192-195.
[2]程晓芳.白果内酯的结构修饰和化学性质的探讨、白背叶
化学成分的研究[D].上海:中国科学院上海药物研究所,
1999.
[3]李吉来,陈飞龙,吕志平.白背叶根挥发性成分的研究[J].
中药材,2003,26(10):723-724.
[4]韦浩明,蓝日春,滕红丽.中国壮药材[M].南宁:广西民族
出版社,2009:39-40.
[5]赵进军,吕志平,张绪富.白背叶根对肝纤维化大鼠的实
验研究[J].现代诊断与治疗,2002,13(5):257-259.
[6]徐舒,吕志平,蔡红兵,等.白背叶根抗鸭乙型肝炎病毒的
实验研究[J].中西医结合学报,2006,4(3):285-287.
[7]赵进军,吕志平,张绪富.白背叶根对过氧化氢所致大鼠
肝细胞损伤的保护作用[J].华西药学杂志,2003,18(4):
257.
[8]江苏新医学院.中药大辞典[M].上海:上海人民出版社,
1977:749.
[9]《全国中草药汇编》编写组.全国中草药汇编:上册[M].北
京:人民卫生出版社,1973:297-298.
[10]王志萍,冯桥,沈树虎,等.白背叶根提取物的体外抑菌
试验[J].广西中医药,2012,35(3):55-56.
[11]王志萍,黄燕,夏星,等.白背叶不同部位的体外抑菌效
果比较[J].广西中医药,2013,36(4):67-68.
[12]魏伟,吴希美,李元建.药理实验方法学[M].4版.北京:
人民卫生出版社,2010:383-391.
[13]陈奇.中药药理实验方剂学[M].北京:人民卫生出版社,
1993:765-770.
(编辑 陈明伟)
表 4 白背叶根提取物对蛋清致小鼠足趾肿胀的影响 (x±s,n=10)
组 别
剂量
(g/kg)
给药前足趾
体积(ml)
肿胀度(%)
1 h 2 h 3 h 4 h
空白对照组 — 0.16±0.03 48.72±22.25 63.79±24.67 53.01±20.96 34.53±18.97
地塞米松组 0.006 0.16±0.02 11.82±6.84② 34.78±12.36② 27.61±12.86② 8.85±3.73②
白背叶根高剂量组 0.717 0.18±0.02 23.00±11.54② 41.42±17.29② 34.55±18.77② 20.15±10.47
白背叶根中剂量组 0.358 0.16±0.02 21.42±8.34② 42.45±14.44① 34.96±13.64① 21.08±15.32
白背叶根低剂量组 0.179 0.17±0.03 32.14±11.49 48.07±15.28 37.78±10.66 25.35±13.20
11· ·