全 文 ：　西北林学院学报　 2001, 16( 1): 53～ 55
Journal o f No rthw est Fo rest ry Univ ersity

杜仲叶中桃叶珊瑚甙测定方法的研究
董娟娥 1 ,　马柏林 2 ,　贾二红 1
( 1.西北农林科技大学 林学院 , 陕西 杨陵 , 712100; 2.西北农林科技大学 生命科学学院 )
摘　要: 对文献 [4, 5, 6]中介绍的实验室桃叶珊瑚甙测定方法进行了分析比较 ,结果认为“对
二甲氨基苯甲醛法” 简便易行 ,但却存在着测定液中出现聚沉现象 ,且所测含量偏大 ,因为
该方法不能将植物体中共存的京尼平甙和京尼平甙酸分离 ,测定结果为桃叶珊瑚甙与这些
同类环烯醚萜类化合物的含量之和。为此 ,研究出“改进对二甲氨基苯甲醛法” ,用该方法测
定桃叶珊瑚甙简便易行 ,测定数值较为精确。
关键词: 杜仲叶 ;桃叶珊瑚甙 ;改进对二甲氨基苯甲醛法
中图分类号: TP949. 751. 5　　 文献标识码: A　　 文章编号: 1001-7461( 2001) 01-0053-03
Study on Measuring Method of Aucubin in Eucommia ulmoids Leaf
DONG Juan-e
1 ,　MA Bai-l in2 ,　 JIA Er-hong1
( 1. Col lege of Forestr y, N W Sci-Tech Uni . of Ag r. and For. ,Yang ling , Shaanxi 712100, China;
2.Col lege of Lif e Sciences ,N W Sci-Tech Uni . o f Ag r. and For . , Yangl ing , Shaanxi 712100, China)
Abstract: Three labo rato ry determining methods int roduced in documents on aucubin w ere analysed. The result
of comparison show ed that the Epstahl method could be feasible. How ever, there remained an issue that precipi-
tate occurred in determining solution, and the determined content w as inclined to be beyond the real lev el, because
this method w as not effectiv e in separating geniposide and geniposide acid f rom coexisting i ridoids in E. ulmoids the
content is the sum. By determining and analy sis, improved epstahl method is advocated to solv e the mentioned is-
sue, which is proved to be simple, feasible and reliable.
Key words: Eucommia ulmoids leaf; aucubin; improved epstahl method
　　桃叶珊瑚甙 ( aucubin)、京尼平甙 ( geniposide)和
京尼平甙酸 ( g eniposide acid)等是杜仲叶中含量较高
且具有较强生物活性的环烯醚萜甙类物质 ,特别是桃
叶珊瑚甙 ,国内研究较多 [ 1]。其含量测定方法在不少
文献中均有报道。 其中高效液相色谱法 [2 ]、高效薄层
扫描法 [3 ]测定结果准确 ,但目前仪器未普及 ,一般实
验室不具备测定条件。 而简便易行、精确度高的简便
测定方法 ,却很少见报道。为此 ,对目前一般实验室采
用的测定方法进行了分析比较 ,试图研究出一种既简
便易行、又测定较精确的桃叶珊瑚甙含量测定方法。
1　材料及方法
1. 1　材料来源
本试验所用杜仲叶采自西北林学院杜仲优树试
验林 ,为同龄、同一立地条件下生长的 30个杜仲优树
无性系。 1997年 6月 15日由树体同一部位 (树冠中
部 )东、南、西、北 4个方向分别采集叶片 ,杀青 (采下
叶片后 ,立即在烘箱内恒温 95℃烘 5 min) ,自然风干
备用。
1. 2　仪器和试剂
754紫外可见分光光度计 , Waters高效液相色谱
系统 ,包括 486紫外检测器 , 510型泵 (美国 Miford) ,
xw t-204型台式自动平衡记录仪 (上海大华仪表厂 ) ,
超声波发生器 (无锡超声电子设备厂 ) ,离心机 ,微量
进样器 ,硅胶 G(薄层层析用 ,青岛产 ) ,桃叶珊瑚甙标
样 (日本和光纯药工业株式会社 )。
1. 3　实验方法
精确称取杜仲叶 10 g ,以 75%乙醇于 75℃回流
收稿日期: 2000-07-15
　　 基金项目:陕西省重大科技项目 ( 97K04-G2)
　　 作者简介:董娟娥 ( 1968-) ,女 ,讲师 ,野生动植物保护与利用学科硕士研究生。
提取 3次 ,每次 30 min,合并滤液 ,浓缩定容至 100
mL,分 2份 ,一份为 A,一份为 B。
1. 3. 1　对二甲氨基苯甲醛法 [4 ]　 取 1 mL A稀释
液 ,依次加入 3 mL 95%乙醇、 1 mL对二甲氨基苯甲
醛溶液 ( Epstahl)、 1 mL 20%盐酸 ,用蒸馏水定容到
10 mL,摇匀 ,在 65℃水浴锅中加热 8 min, 中间摇动
2～ 3次 ,取出试管 ,室温冷却 15 min , 594 nm处用分
光光度计测定溶液吸光度 ,以标准曲线计算。
标准曲线方程为: Y= ( A- 0. 092 7) /0. 439 0[4 ]
1. 3. 2　薄层色谱分离 - 分光光度法 [5 ]　 取 A液和
桃叶珊瑚甙标准液各 100 mL,分别点样于两块薄层
板上 ,以氯仿∶甲醇∶石油醚∶乙酸乙酯= 2∶ 2∶ 1
∶ 4,同时展开。将点有标准液的薄板喷洒 Epstahl试
剂 , 110℃加热 10 min显色。以标准样的显色位置确
定样品中桃叶珊瑚甙在薄板上的位置。收集样品桃叶
珊瑚甙区域内的硅胶 ,加入 10 mL70%乙醇 ,溶解桃
叶珊瑚甙 , 超声处理 20 min,离心。取上清液 2 mL,
依次加入 95%乙醇 4 mL、 Epstahl 2 mL、冰乙酸 2
mL,于 80℃水浴保温 30 mim , 流水冷却 1 min ,
601 nm处测溶液吸光度。
标准曲线方程为: Y= 0. 754 3A+ 0. 002 1
(r= 0. 996 2)
1. 3. 3　硫酸铜 -分光光度法 [ 6]　取 B液加 2%活性
炭 ,于 50℃保温 30 min,抽滤 ,滤液放入冰箱中过夜 ,
再加入 2% 硅藻土 ,抽滤 ,加蒸馏水定容为 50 mL,取
1 mL于 25 mL容量瓶中加水稀释至刻度。 取 1 mL
稀释液依次加 2 mL水、 3 mL甲醇、 3 mL硫酸铜试
剂 ,混匀 ,于 85℃水浴加热 5 min,置流水冷却 1 min,
放置 30 min后 ,于 601 nm处测溶液吸光度。
标准曲线方程为: Y= 1. 577 4A+ 0. 000 65
(r= 0. 998 4)
1. 3. 4　高效液相色谱法 ( HPLC)　 同时测定桃叶珊
瑚甙、京尼平甙酸、京尼平甙。
色谱条件: Nova-Pak C18 ( 4μm, 3. 9 mm× 75
mm)
流动相:甲醇 - 水 - 冰乙酸 ( 10∶ 90∶ 1) ,　流
速: 1 mL /min,检测波长: 232 nm
2　结果与分析
2. 1　实验室测定方法的比较
采用上述方法分别对 4个样品中桃叶珊瑚甙含
量进行了测定 ,结果见表 1。
由于高效液相色谱法测定结果准确 ,就以其测定
结果为准 ,对其他几种方法的测定结果进行分析比
较。
由表 1可见 ,硫酸铜 - 分光光度法测定结果偏
小 ,这是由于该方法中加入的活性炭与硅藻土 ,除吸
附色素等杂质外 ,还吸附了部分桃叶珊瑚甙 (用水洗
脱活性炭 ,洗脱液与艾氏试剂反应呈阳性 ) ,而且中间
每转移一次 ,都会引起桃叶珊瑚甙的遗失 ,所以此法
误差较大。再者 ,加入活性炭后 ,滤液放入冰箱过夜后
才能测定 ,使测定时间延长。
表 1　桃叶珊瑚甙实验室测定结果的比较
Table 1　 Th e compari son of laboratory
determining result s on aucubin %
无性系
硫酸铜
-分光
光度法
对二甲
氨基苯
甲醛法
薄层色谱
分离 -分
光光度法
高效液
相　色
谱　法
X15
L43
X11
X16
1. 189
1. 115
0. 866
0. 925
2. 725
1. 510
1. 580
1. 463
1. 185
1. 576
0. 807
1. 191
2. 285
1. 493
1. 162
1. 409
薄层色谱分离 -分光光度法测定结果相对准确 ,
但每次测定前要制备一定数量的薄板 ,而薄板制备的
好坏直接影响着层析及测定的结果 ,所以测定者必须
具备良好的制板技术 ;加之硅胶的吸附作用 ,如果所
吸附的桃叶珊瑚甙不能完全洗脱下来 ,势必导致测定
结果偏低。
对二甲氨基苯甲醛法测定方法简单 ,人为误差较
小 ,但测定结果偏高 ,这是因为 Epstahl试剂对前述
的 3种环烯醚萜甙类物质均显蓝色 ,故所测含量是京
尼平甙、京尼平甙酸及桃叶珊瑚甙的总含量。另外 ,在
实验中还发现该方法显色液中加入盐酸后 ,由于桃叶
珊瑚甙在强酸性条件下不稳定 ,放置过程中 ,试管中
有聚沉现象 ,所以测定工作必须在很短时间内完成。
2. 2　“对二甲氨基苯甲醛法”的改进
在上述分析中 ,虽然对二甲氨基苯甲醛法存在一
定的缺点 ,但不失为一种简便易行的方法。为此 ,对该
方法进行了改进 ,弥补其自身的不足。
2. 2. 1　测定液中聚沉现象的消除　将对二甲氨基苯
甲醛法中加入的 1 mL20%盐酸改为醋酸 ,即取 1 mL
稀释液加入 1 mL Epstahl试剂 , 1 mL醋酸 , 2 mL
95%乙醇 , 85℃水浴中保温 30 min , 显色效果很好 ,
且在 2 h内吸光值保持不变。
2. 2. 2　测定值修正方程的建立　 高效液相色谱法
是目前国内外专家公认的准确测定植物有效成分的
先进方法 ,但仪器价格昂贵 ,一般实验室无条件购买。
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本研究中利用这一先进的方法 ,建立了对“对二甲氨
基苯甲醛法”测定值修正方程的简便方法 ,供一般实
验室测定桃叶珊瑚甙含量时应用。
为了求出桃叶珊瑚甙的准确含量 ,用 HPLC法
测定了 30株杜仲优树无性系的京尼平甙、京尼平甙
酸及桃叶珊瑚甙的含量 ,计算出 3者含量之总和 (表
2) ,并求出了桃叶 珊瑚甙含量与总和之间的关系式
(即测定值修正方程 ) ,利用该关系式达到分离出京尼
平甙和京尼平甙酸的效果 ,在以后的测定中 ,只需将
分光光度计上所测出的吸光度代入标准曲线方程求
出含量 (测定值 ) ,再代入测定值修正方程 ,即可求出
桃叶珊瑚甙的准确含量。其测定值修正方程为:
y= 0. 999 8x- 0. 144 9　　 (r= 0. 998 0) ( 1)
y为桃叶珊瑚甙真实含量 ; x为测定含量。
标准曲线方程为:
Y= 0. 000 33+ 0. 116 05A　　 (r= 0. 992 8) ( 2)
表 2　 HPLC法测定杜仲叶中京尼平甙酸、
京尼平甙、桃叶珊瑚甙含量
Table 2　 Contents of geniposidic acid、 geniposide and aucubin in
E. ulmoids leaves determined by HPLC %
无性 系 京尼平甙酸 京尼平甙 桃叶珊瑚甙 总　和
CK3 0. 061 0. 039 1. 246 1. 346
G10 0. 065 0. 074 1. 284 1. 423
G3 0. 122 0. 061 1. 308 1. 491
G9 0. 071 0. 035 2. 177 2. 283
L0 0. 102 0. 098 2. 586 2. 786
L10 0. 074 0. 092 2. 122 2. 288
L11 0. 110 0. 112 1. 948 2. 170
L14 0. 107 0. 441 1. 675 1. 823
L16 0. 067 0. 070 2. 115 2. 252
L2 0. 052 0. 052 2. 023 2. 127
L24 0. 080 0. 033 1. 556 1. 669
L25 0. 087 0. 077 1. 737 1. 901
L27 0. 123 0. 082 1. 435 1. 640
L28 0. 067 0. 041 1. 928 2. 036
L3 0. 066 0. 066 3. 066 3. 198
L33 0. 088 0. 086 1. 984 2. 158
L39 0. 095 0. 050 2. 783 2. 928
L41 0. 095 0. 085 2. 100 2. 280
L43 0. 064 0. 040 1. 493 1. 597
L45 0. 088 0. 082 1. 515 1. 685
L7 0. 052 0. 039 2. 312 2. 403
Q1 0. 067 0. 048 1. 288 1. 403
Q11 0. 082 0. 051 2. 303 2. 436
Q3 0. 073 0. 045 1. 741 1. 859
X 11 0. 098 0. 077 1. 162 1. 337
X 15 0. 106 0. 046 2. 285 2. 437
X 16 0. 092 0. 045 1. 409 1. 546
X 18 0. 126 0. 083 1. 819 2. 028
X3 0. 107 0. 044 1. 301 1. 452
X5 0. 125 0. 057 1. 335 1. 517
2. 3　用改进的对二甲氨基苯甲醛法对杜仲叶中桃叶
珊瑚甙的测定
　　对 4个样品中桃叶珊瑚甙的含量用改进对二甲
氨基苯甲醛法进行了测定。 由结果 (表 3)可知 ,改进
对二甲氨基苯甲醛法的测定结果与高效液相色谱法
测定结果非常接近。
表 3　杜仲叶中桃叶珊瑚甙的含量
Table 3　 Content of aucubin in E.ulmoids leaves %
无性系 改进对二甲氨基苯甲醛法
高效液
相色谱法 差　　值
X15
L43
X11
X16
2. 347
1. 406
1. 173
1. 387
2. 285
1. 493
1. 162
1. 4 0 9
0. 062
- 0. 087
0. 011
- 0. 022
3　结论
高效液相色谱法及高效薄层扫描法测定结果准
确 ,但一般常规实验室不具备条件 ;薄层色谱分离 -
分光光度法测定结果较为准确 ,但受人为因素影响较
大 ,且操作复杂 ;硫酸铜 -分光光度法测定结果偏低又
费时 ;对二甲氨基苯甲醛法测定结果偏高 ,测定工作
不及时进行 ,则有聚沉现象。 而改进对二甲氨基苯甲
醛法方法简便易行 ,且测定结果比较准确 ,不仅一般
条件的实验室可以应用 ,还可作为企业产品质量的简
易检测方法。
测定值修正方程 ,是在 30株杜仲优树无性系测
定值基础上建立的 ,并且是用现代化仪器测出的 ,故
所建方程有较高的应用价值。
参 考 文 献
[1 ]　马希汉 ,张康健 ,王蓝 ,等 . 富含生理活性物质的杜仲叶提取物
的研究 [ J] . 西北林学院学报 , 1997, 12(3) : 86～ 89.
[2 ]　张华宣 ,程斐 . 高效液相色谱法测定海滨车前中桃叶珊瑚甙含
量 [ J] . 四川师范大学学报 (自然科学版 ) , 1997, 20( 6 ): 102～
106.
[3 ]　程军 ,陈玉仁 . 高效薄层扫描法测定车前草中桃叶珊瑚甙 [ J] .
中草药 , 1992 , 23( 9): 459～ 460, 473.
[4 ]　邓勇 ,彭明 . 杜仲叶有效成分提取 [ J ]. 农业工程学报 . 1997, 13
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[5 ]　马柏林 ,梁淑芳 ,张康健 . 薄层色谱分离 -分光光度计测定桃叶
珊瑚甙 [ J] . 分析化学 , 2000, 28( 3): 346～ 348.
[6 ]　李家实 ,阎玉凝 . 杜仲皮与叶化学成分初步研究 [ J ]. 中药通报 ,
1986, 11( 8): 41～ 42.
55第 1期　　　　　　　　　　　　　　　董娟娥等　杜仲叶中桃叶珊瑚甙测定方法的研究