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大叶蛇泡簕各部位提取物对小鼠非特异性免疫功能的调节作用



全 文 :大叶蛇泡簕各部位提取物对小鼠非特异性
免疫功能的调节作用
胡 莹,梅全喜,高玉桥,戴卫波,林 慧
(广州中医药大学附属中山医院药学部,广东 中山 528400)
摘要:目的 探讨大叶蛇泡簕水提物、总醇提物及石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇提取部位对小鼠细胞免疫功能的调节作用。方法 通
过碳粒廓清实验观察大叶蛇泡簕各提取部位对正常小鼠多项免疫指标的影响。各部位均按浸膏浓度 1. 5 g /kg,连续灌胃 7 d,每天 1
次,测定免疫器官指数及碳廓清率。结果 与正常对照组相比,大叶蛇泡簕各部位对脏器指数无显著性影响,对碳廓清率有显著降低
的作用。结论 大叶蛇泡簕对小鼠的非特异性免疫功能有免疫抑制作用,且无免疫器官毒性。
关键词:大叶蛇泡簕;非特异性免疫功能;脏器指数;廓清指数;免疫抑制
中图分类号:R285 文献标志码:A 文章编号:1673 - 4610(2012)04 - 0206 - 02
作者简介:胡 莹,中药师,研究方向:广东地产药材研究与开发,Tel:0760-88815106;E-mail:huhuyingying@ hotmail. com。
通讯作者:梅全喜,教授、主任中药师,硕士生导师,研究方向:广东地产药材研究与开发,Tet:0760-89980306,E-mail:meiquanxi@163. com
大叶蛇泡簕,又名粗野悬钩子,大破布刺,老虎泡,
虎掌竻。为蔷薇科植物粗叶悬钩子 Rubus alceaefolius
Poir.的根。大叶蛇泡簕主要分布于江西、江苏、广东、
广西、贵州、云南等地[1]。其根、茎、叶及全草均可药
用。大叶蛇泡簕有清热利湿、止血、散瘀的作用;临床主
要用于肝炎,痢疾,肠炎,乳腺炎,口腔炎,外伤出血,肝
脾肿大,跌打损伤,风湿骨痛等病症[1]。本文采用大
叶蛇泡簕各提取部位观察其对正常健康小鼠多项免
疫指标的影响,旨在初步了解大叶蛇泡簕对小鼠免疫
系统的作用,为该药物的进一步研究和开发利用提供
理论依据。
1 材料与仪器
1. 1 药物、药品与试剂
大叶蛇泡簕购于广东至信药业有限公司,批号:
120201 经广州中医药大学附属中山市中医院曾聪彦主
任药师鉴别为粗叶悬钩子 Rubus alceaefolius Poir. 的干
燥根,将药材打成粉,过标准检验二号筛得到粗粉。
大叶蛇泡簕水提物:取药材粗粉与蒸馏水先后按 1
∶ 10、1∶ 8 的比例回流提取 2 次,每次 1 h,双层纱布过
滤,合并 2 次滤液,75 ℃条件下加热浓缩直至得到流浸
膏(提取率 59%,以下简称 S水提物)。
大叶蛇泡簕醇提物:取药材粗粉与 95%乙醇先后
以 1∶ 10、1∶ 8 的比例于 75 ℃水浴下回流 2 次,每次 1 h,
双层纱布过滤,合并 2 次滤液,75 ℃水浴挥醇直至得到
流浸膏。将大叶蛇泡簕醇总提取物(以下简称 S 醇总
提取物)流浸膏用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次
按极性大小萃取,得到大叶蛇泡簕石油醚萃取物(提取
率 0. 24 %,以下简称 S石油醚)、大叶蛇泡簕氯仿萃取
物(提取率 0. 48%,以下简称 S氯仿)、大叶蛇泡簕乙酸
乙酯萃取物(提取率 0. 81%,以下简称 S乙酸乙酯)、大
叶蛇泡簕正丁醇萃取物(提取率 2. 64 %,以下简称 S
正丁醇)、大叶蛇泡簕水层(提取率 1. 16 %,以下简称 S
水层)。
药品与试剂:醋酸地塞米松,药厂:天津药业焦作有
限公司,批号:11071311,Na2CO3,一得阁墨汁,生产厂
家:北京一得阁墨业有限责任公司,批号:P804。
1. 2 动物
SPF级 KM小白鼠(购自广东省实验动物中心,许
可证号为:SCXK(粤)2008 - 0002。小鼠饲养室温控制
在中山市中医院屏障级实验室(许可证:SYXK(粤)
2010 - 0109),室温控制在(20 ± 2)℃,湿度控制在
60%。
1. 3 仪器
JJ300 型电子天平(常熟双杰)。UV-2550 型紫外
分光光度计(日本岛津)。
2 实验方法
2. 1 对免疫器官的影响:脾脏、肝脏、胸腺指数的变化
取 18 ~ 22 g 雄性 KM 小鼠 90 只,分成 9 组,每组
10 只。分别是正常对照组、醋酸地塞米松组、S醇提组、
S水提组、S 石油醚组、S 氯仿组、S 乙酸乙酯组、S 正丁
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Pharmacy Today ·2012 04 Vol. 22 No. 4·
醇组、S水层组,均灌胃给药,各给药组灌胃分别用不同
提取部位浸膏的 1. 5 g /kg浓度灌胃,用蒸馏水配制,以
下药物剂量均相同。醋酸地塞米松组给药剂量为 1. 56
mg /kg,除醋酸地塞米松组仅末次给药外,其余各组均
连续给药 7 d。末次给药 1 h后处死,取小鼠肝脏、脾脏
及胸腺于电子天平称重,计算其脏器系数。脏器指数 =
脏器重量(g)/体重(g)。
2. 2 对非特异免疫功能影响的试验:小鼠碳廓清试验
取 18 ~ 22 g 雄性 KM 小鼠 90 只,分成 9 组,每组
10 只。分别是正常对照组、醋酸地塞米松组、S醇提组、
S水提组、S 石油醚组、S 氯仿组、S 乙酸乙酯组、S 正丁
醇组、S水层组,灌胃给药,除醋酸地塞米松组仅末次给
药,其余各组连续给药 7 d。末次给药后 1 h,尾静脉注
射以生理盐水稀释 5 倍的一得阁墨汁。每 10 g 体重质
量注射 0. 1 ml。墨汁注射后立即计时。于 5、20 min 分
别从眼眶后静脉取血 20 μl,加入到 2 ml 0. 1% Na2CO3
溶液中,摇匀,于波长 570 nm处测光吸收度(OD),按公
式计算廓清指数 K,数据采用 t检验。
K =
logOD1 - logOD2
t2 - t1
3 结果
3. 1 大叶蛇泡簕各提取部位对小鼠各脏器指数的影响
结果见表 1。
表 1 大叶蛇泡簕各提取部位对小鼠各脏器指数的影响
组别 n 剂量 胸腺指数 脾指数 肝脏指数
S水提组 10 1. 5 g浸膏 /kg 0. 004 8 ± 0. 000 74 0. 126 ± 0. 032 4 1. 314 ± 0. 070 7
S石油醚组 10 1. 5 g浸膏 /kg 0. 005 4 ± 0. 000 87 0. 122 ± 0. 006 7 1. 332 ± 0. 074 12
S氯仿组 10 1. 5 g浸膏 /kg 0. 004 9 ± 0. 001 53 0. 123 ± 0. 007 5 1. 318 ± 0. 074 3
S乙酸乙酯组 10 1. 5 g浸膏 /kg 0. 004 7 ± 0. 001 00 0. 120 ± 0. 008 2 1. 428 ± 0. 077 9
S正丁醇组 10 1. 5 g浸膏 /kg 0. 005 2 ± 0. 001 43 0. 121 ± 0. 029 2 1. 321 ± 0. 074 9
S醇总提物组 10 1. 5 g浸膏 /kg 0. 004 6 ± 0. 000 97 0. 121 ± 0. 007 4 1. 415 ± 0. 066 9
S水层组 10 1. 5 g浸膏 /kg 0. 004 0 ± 0. 001 00 0. 136 ± 0. 023 7 1. 352 ± 0. 074 4
地塞米松组 10 1. 56 mg /kg 0. 004 9 ± 0. 001 00 0. 091 ± 0. 010 1* 1. 037 ± 0. 081 9*
正常对照组 10 等容积生理盐水 0. 004 9 ± 0. 000 72 0. 131 ± 0. 026 0 1. 379 ± 0. 069 4
注:* P < 0. 05,与正常对照组比较有显著差异
由表 1 可知,大叶蛇泡簕各给药组对胸腺指数、脾
指数及肝脏指数与正常对照组相比无显著性差异。地
塞米松组对胸腺无显著影响,对脾、肝指数与正常对照
组相比均有显著性差异(P < 0. 05)。
3. 2 大叶蛇泡簕各提取部位对小鼠巨噬细胞碳粒廓
清率的影响,结果见表 2。
表 2 大叶蛇泡簕各提取部位对小鼠巨噬细胞碳粒廓清率的影响
组别 n 剂量 廓清指数
S水提组 10 1. 5 g /浸膏 kg 0. 005 08 ± 0. 004 05**
S石油醚组 10 1. 5 g浸膏 /kg 0. 006 53 ± 0. 003 86**
S氯仿组 10 1. 5 g浸膏 /kg 0. 009 76 ± 0. 005 80
S乙酸乙酯组 10 1. 5 g浸膏 /kg 0. 008 34 ± 0. 004 39*
S正丁醇组 10 1. 5 g浸膏 /kg 0. 008 47 ± 0. 006 51*
S醇总提物组 10 1. 5 g浸膏 /kg 0. 006 98 ± 0. 006 50**
S水层组 10 1. 5 g浸膏 /kg 0. 004 75 ± 0. 002 44**
地塞米松组 10 1. 56 mg /kg 0. 008 24 ± 0. 006 41*
正常对照组 10 等容积生理盐水 0. 014 28 ± 0. 006 68
注:* P < 0. 05,与正常对照组比较有显著差异;**P < 0. 01,与正常对照组比较有极显著差异
由表 2 可知,S 乙酸乙酯组、S 正丁醇组、地塞米
松组的廓清指数与正常对照组相比有显著性差异(P
< 0. 05),S水提组、S石油醚组、S醇总提物组、S 水层组
的廓清指数与正常对照组相比有极显著性差异(P <
0. 01)。
(下转第 225 页)
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·2012 年 04 月第 22 卷第 4 期· 今日药学
参考文献
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(收稿日期:2012 - 01 - 04
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4 讨论
大叶蛇泡簕为广东地产药材,有清热利湿、止血、
散瘀的作用;临床主要用于肝炎,痢疾,肠炎,乳腺炎,
口腔炎,外伤出血,肝脾肿大,跌打损伤,风湿骨痛[1]。
炎症反应是最原始的免疫反应,清热解毒药对感染性
炎症或过度的炎症反应都有负向调节能力,许多研究
表明[2],清热解毒药能增强抗感染免疫能力,抗炎、抗
过敏,抑制变态反应。本实验对小鼠非特异性免疫作
用进行初步研究,结果显示,大叶蛇泡簕各提取物组的
脏器指数与正常对照组相比无显著性差异,表明无免
疫器官毒性;地塞米松组与正常对照组相比对脏器指
数有显著抑制作用,S 水提组、S 石油醚组、S 醇总提物
组、S水层组、S乙酸乙酯组、S正丁醇组、地塞米松组与
正常对照组相比均能明显降低廓清指数,对巨噬细胞
的非特异性吞噬杀伤作用有显著的抑制作用。结果表
明,大叶蛇泡簕对机体非特异性免疫功能有抑制作用,
且对小鼠免疫器官无器官毒性作用,这与该药临床可
治疗肝脾肿大、风湿骨痛的作用是相符合的,说明该药
有良好的免疫抑制作用,且毒副作用较小。地塞米松
对机体非特异性免疫功能也有抑制作用,但表现出对
小鼠免疫器官的毒性作用,可使正常小鼠免疫机能低
下。清热解毒药具有与地塞米松削弱防御机制的过度
反应,所不同的是,激素是一个全面的免疫抑制剂,可
带来对身体其他功能危害的副作用。
近年来由于西药类的免疫抑制剂副作用多,给临
床的使用带来了不便,越来越多的人转向寻找更安全
有效的免疫抑制药物。因此,清热解毒类中药的免疫
作用也越来越受到研究者的重视。目前,中药免疫毒
理方面研究尚处于伊始阶段,中药免疫调节作用研究
极具开发前景,应作为中药研究的重要内容。大叶蛇
泡簕属广东地产药材,临床应用广泛,且来源可靠,产
量稳定,值得进一步深入研究,并加以开发利用。
参考文献
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(收稿日期:2012 - 03 - 31)
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·2012 年 04 月第 22 卷第 4 期· 今日药学