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大叶蛇泡簕各提取部位解热镇痛作用的筛选研究



全 文 :大叶蛇泡簕各提取部位解热镇痛作用的筛选研究
梅全喜,胡莹,高玉桥,林 慧,戴卫波,张文霞,何骏青,王智亮,袁志华
(广州中医药大学附属中山医院药学部,广东 中山 528400)
摘要:目的 研究大叶蛇泡簕水提物、醇提物及各部位中不同成分的解热镇痛作用,筛选出活性物质。方法 提取大叶蛇泡簕醇提物,按
极性大小依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,用干酵母致热法观察其解热作用,用热板法和扭体法观察其镇痛作用。结果
大叶蛇泡簕各成分对干酵母引起的大鼠发热有一定的解热作用,对热板及扭体有显著的镇痛作用。结论 大叶蛇泡簕有较好的解热
镇痛作用。
关键词:大叶蛇泡簕;解热作用;镇痛作用
中图分类号:R285. 5 文献标志码:A 文章编号:1673 - 4610(2012)09 - 0534 - 03
作者简介:梅全喜,教授,主任中药师,硕士生导师,Tel:0760-89980306,E-mail:meiquanxi@ 163. com
大叶蛇泡簕,又名大破布刺,八月泡,老虎泡,虎掌
竻,牛尾泡。为蔷薇科植物粗叶悬钩子 Rubus alceaefo-
lius Poir.的干燥根。主要分布于广东、广西、贵州、云南
等地[1],其根、茎、叶及全草均可入药,其性甘、淡、平。
大叶蛇泡簕有清热利湿、止血、散瘀的作用;临床用于肝
炎,痢疾,肝脾肿大,跌打损伤,风湿骨痛等病症[1]。
《广西中草药》记载虎掌簕:“清热,消肿,止血,散瘀。”
本文针对大叶蛇泡簕各提取部位的解热、镇痛作用,进
行初步探讨,希望筛选出有效的活性物质。
1 试验材料
1. 1 药物、药品与试剂
大叶蛇泡簕购于广东致信药业有限公司,批号:
120201,经广州中医药大学附属中山市中医院曾聪彦主
任中药师鉴定为粗叶悬钩子 Rubus alceaefolius Poir. 的
干燥根。将药材打成粉,过标准检验二号筛得到粗粉。
大叶蛇泡簕水提物:取药材粗粉与蒸馏水先后按
1∶ 10、1∶ 8 的比例提取 2 次,每次 1 h,双层纱布过滤,合
并 2 次滤液,75 ℃条件下加热浓缩直至得到流浸膏(提
取率 59%,以下简称 RAP水提物)。
大叶蛇泡簕醇提物:取药材粗粉与 95%乙醇先后
以 1∶ 10、1∶ 8 的比例于 75 ℃水浴下回流 2 次,每次 1 h,
双层纱布过滤,合并 2 次滤液,75 ℃水浴挥醇直至得到
流浸膏。将大叶蛇泡簕醇总提取物(以下简称 RAP 醇
总提取物)流浸膏用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依
次按极性大小萃取,得到大叶蛇泡簕石油醚萃取物(提
取率 0. 24%,以下简称 RAP 石油醚)、大叶蛇泡簕氯仿
萃取物(提取率 0. 48%,以下简称 RAP 氯仿)、大叶蛇
泡簕乙酸乙酯萃取物(提取率 0. 81%,以下简称 RAP
乙酸乙酯)、大叶蛇泡簕正丁醇萃取物(提取率 2. 64%,
以下简称 RAP 正丁醇)、大叶蛇泡簕水层(提取率
1. 16%,以下简称 RAP 水层) ;以上各给药组均按各提
取浸膏 1. 5 g /kg体重的剂量,按 10 ml /kg的给药体积,
将浸膏匀浆混悬于水中配制而成,以下给药方式及药物
剂量均以相同方式处理。
药品与试剂:吲哚美辛(广东华南药业股份有限公
司,批号:110401) ,冰醋酸(广州化学试剂厂,批号:
20070902 - 2) ,高活性干酵母(燕山牌,河北马利食品
有限公司,批号:1669 1F)。
1. 2 动物
SPF级 KM小鼠,购自广东省实验动物中心,许可
证号:SCXK(粤)2008 - 0002;SPF级 SD大鼠,购自广东
省实验动物中心,许可证号:SCXK(粤)2008 - 0002。
实验动物饲养室在中山市中医院屏障级实验室,许可证
号:SYXK(粤)2010 - 0109,室温控制在(20 ± 2)℃,湿
度控制在 40% ~60%。
1. 3 仪器
JJ300 型电子天平(常熟双杰) ;CR·W11 水银体
温计(上海医用仪表厂) ;HWT 恒 - 6B 温水浴箱(天津
市恒奥科技发展有限公司) ;MS86603A 秒表(上海星钻
秒表有限公司)。
2 方法与结果
2. 1 蛇泡簕水提物、醇提物及不同萃取部位对酵母菌
致热大鼠的解热作用
取 180 ~ 220 g,SPF级 SD大鼠 90 只,雌雄各半,分
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Pharmacy Today ·2012 09 Vol. 22 No. 9·
成 9 组,每组 10 只。分别是正常对照组、吲哚美辛对照
组、RAP醇提组、RAP水提组、RAP石油醚组、RAP氯仿
组、RAP乙酸乙酯组、RAP 正丁醇组、RAP 水层组。每
日用水银体温表从肛内测体温 1 次,以使其适应体温测
量的操作,并可了解大鼠体温恒定与否。每次测量肛温
时均要在体温表的水银端沾少量液体石蜡,以减少对大
鼠肛门的摩擦。开始灌胃给药,除吲哚美辛对照组仅末
次给药外,其余各组均连续给药 7 d。正式实验前 8 ~
10 h禁食不禁水,实验当日注射酵母前测肛温,连续 2
次,记录数据,取其平均值作为其正常体温。给药后每
鼠立即皮下注射 10%的干酵母混悬液,6 ml /kg,并每隔
1 h测量 1 次肛温,待体温升高 1 ℃左右(大约 4 ~ 6
h) ,每隔 1 h 测定肛温 1 次,连续测 6 h,观察体温变化
情况。计录各时间点的体温 T,组间比较采用单因素方
差分析进行 t 检验,利用统计分析软件 SPSS19. 0 作统
计分析。结果见表 1。
表 1 大叶蛇泡簕各提取物对酵母菌致热大鼠解热的影响(n =10,珔x ± s)
组别
剂量
(浸膏 g /kg)
基础体温
(℃)
不同时间点的肛温值(℃)
4 h 5 h 6 h 7 h 8 h
RAP水提组 1. 5 36. 43 ± 0. 24 37. 17 ± 0. 86 38. 49 ± 0. 88 38. 71 ± 0. 42 38. 46 ± 0. 58 37. 54 ± 0. 75
RAP石油醚组 1. 5 36. 56 ± 0. 17 36. 65 ± 0. 67* 37. 74 ± 0. 93** 37. 92 ± 0. 93** 38. 07 ± 0. 77 37. 00 ± 0. 55**
RAP氯仿组 1. 5 36. 59 ± 0. 31 37. 62 ± 0. 59 38. 22 ± 0. 70 38. 61 ± 0. 46 38. 20 ± 0. 65 36. 82 ± 0. 61**
RAP乙酸乙酯组 1. 5 36. 40 ± 0. 23 37. 20 ± 0. 69 38. 38 ± 0. 71 38. 22 ± 0. 75* 37. 64 ± 0. 91** 36. 83 ± 0. 48**
RAP正丁醇组 1. 5 36. 57 ± 0. 32 37. 48 ± 0. 81 37. 74 ± 1. 08** 38. 24 ± 0. 41* 37. 47 ± 0. 72** 36. 72 ± 0. 45**
RAP醇提物组 1. 5 36. 54 ± 0. 39 37. 37 ± 0. 83 38. 10 ± 0. 89* 38. 29 ± 0. 48* 38. 01 ± 0. 49 37. 22 ± 0. 52**
RAP水层组 1. 5 36. 56 ± 0. 41 37. 43 ± 0. 72 38. 34 ± 0. 64 38. 54 ± 0. 40* 38. 31 ± 0. 71 37. 88 ± 0. 56
吲哚美辛组 0. 013 mg /kg 36. 50 ± 0. 31 37. 78 ± 0. 93 38. 41 ± 0. 62 37. 57 ± 0. 66** 37. 06 ± 0. 44** 36. 77 ± 0. 35**
正常对照组 蒸馏水 36. 39 ± 0. 23 37. 39 ± 0. 79 38. 85 ± 0. 43 38. 91 ± 0. 65 38. 51 ± 0. 65 37. 95 ± 0. 61
注:与正常对照组比较,**P < 0. 01,* P < 0. 05
从表 1 可以看出,注射完酵母 4 h各组体温开始回
升,至 6 h 时各组体温达到最高,RAP 乙酸乙酯组及
RAP正丁醇组注射酵母 6、7、8 h 表现出较好的抑制体
温升高的作用,与正常对照组相比有显著性差异 P <
0. 01 或 P < 0. 05;至 8 h时除 RAP水提组、RAP水层组
外其余各组体温均回落明显,且与正常组对比有极显
著性差异,P < 0. 01。
2. 2 蛇泡簕水提物、醇提物及不同萃取部位对小鼠的
镇痛作用
2. 2. 1 热板法 取 18 ~ 22 g,SPF 级 KM 小鼠,雌性,
置于(55 ± 0. 5)℃热板上,记录小鼠的痛阈值(自放在
热板上至出现舔后足所需的时间) ,测 2 次取平均值作
为该鼠给药前痛阈值。凡痛阈值 < 5 s或者 > 30 s者弃
之。取合格小鼠 90 只,按药前痛阈值将小鼠随机分成
9 组,每组 10 只。分别是正常对照组、吲哚美辛对照
组、RAP醇提组、RAP 水提组、RAP 石油醚组、RAP 氯
仿组、RAP乙酸乙酯组、RAP正丁醇组、RAP水层组,均
灌胃给药,除吲哚美辛对照组仅末次给药外,其余各组
均连续给药 7 d。末次给药后分别于 30、60、90、120、
150 min测各组小鼠给药后不同时间下的痛阈值。组
间比较采用单因素方差分析进行 t检验,利用统计学分
析软件 SPSS19. 0 作统计分析处理。结果见表 2。
表 2 大叶蛇泡簕各提取物对小鼠的镇痛作用(热板法)(n =10,珔x ± s)
组别 剂量(浸膏 g /kg)基础时间(s)
不同时间点的痛域值(s)
30 min 60 min 90 min 120 min 150 min
RAP水提组 1. 5 14. 53 ± 4. 01 9. 80 ± 4. 62 14. 07 ± 5. 86 15. 26 ± 6. 86 15. 00 ± 5. 41 17. 46 ± 6. 44
RAP石油醚组 1. 5 14. 53 ± 4. 42 14. 21 ± 7. 81 16. 16 ± 6. 21* 16. 16 ± 6. 21 18. 81 ± 9. 45 17. 04 ± 6. 00
RAP氯仿组 1. 5 14. 11 ± 3. 76 12. 68 ± 4. 24 19. 41 ± 7. 30** 18. 58 ± 8. 55 26. 73 ± 7. 51** 21. 33 ± 7. 43*
RAP乙酸乙酯组 1. 5 16. 28 ± 2. 68 19. 06 ± 7. 04** 13. 08 ± 6. 37 18. 36 ± 8. 19 26. 80 ± 8. 02** 20. 58 ± 6. 76*
RAP正丁醇组 1. 5 15. 54 ± 3. 83 10. 53 ± 4. 92 15. 85 ± 7. 54* 20. 09 ± 8. 04* 21. 93 ± 7. 60 19. 71 ± 7. 01*
RAP醇提物组 1. 5 14. 13 ± 4. 36 10. 80 ± 4. 80 14. 56 ± 5. 77 19. 75 ± 8. 09 21. 75 ± 9. 48 23. 01 ± 7. 24
RAP水层组 1. 5 15. 64 ± 4. 58 12. 67 ± 4. 08 12. 16 ± 3. 61 14. 87 ± 7. 82 13. 65 ± 6. 10 18. 62 ± 6. 63
吲哚美辛对照组 0. 013 mg /kg 15. 73 ± 1. 91 12. 08 ± 3. 12 14. 09 ± 4. 59 27. 27 ± 9. 26** 19. 35 ± 7. 53 18. 73 ± 5. 31
正常对照组 蒸馏水 14. 20 ± 3. 01 10. 71 ± 2. 70 10. 18 ± 3. 23 13. 20 ± 4. 76 15. 27 ± 7. 44 13. 79 ± 5. 75
注:与正常对照组比较,**P < 0. 01,* P < 0. 05
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从表 2 可以看出,给药后 30 min,RAP乙酸乙酯组
耐热时间延长,与空白对照组相比有极显著性差异,P
< 0. 01;给药后 60 min,RAP 石油醚组、RAP 氯仿组和
RAP正丁醇组耐热时间延长,与空白对照组相比有显
著性差异,P < 0. 05 或 P < 0. 01;给药后 90 min,RAP正
丁醇组和吲哚美辛对照组耐热时间延长,与空白对照
组相比有显著性差异,P < 0. 05 或 P < 0. 01;给药后 120
min,RAP氯仿、RAP乙酸乙酯组耐热时间延长,与空白
对照组相比有显著性差异,P < 0. 01;给药后 150 min,
RAP氯仿组、RAP乙酸乙酯组和 RAP 正丁醇组耐热时
间延长,与空白对照组相比有显著性差异,P < 0. 05。
2. 2. 2 扭体法 取 18 ~ 22 g,SPF 级 KM 小鼠 90 只,
雄性,随机分成 9 组,每组 10 只。分别是正常对照组、
吲哚美辛对照组、RAP 醇提组、RAP 水提组、RAP 石油
醚组、RAP氯仿组、RAP 乙酸乙酯组、RAP 正丁醇组、
RAP水层组,均灌胃给药,除吲哚美辛对照组仅末次给
药外,其余各组均连续给药 7 d。末次给药后 1 h,腹腔
注射 0. 7%冰醋酸 10 ml /kg,观察 20 min内小鼠扭体次
数。组间比较采用单因素方差分析进行 t检验,利用统
计学分析软件 SPSS19. 0 作统计分析处理。计算镇痛
百分率,公式:(对照组平均扭体次数 -实验组平均扭
体次数)/对照组平均扭体次数 × 100%。结果见表 3。
表 3 大叶蛇泡簕各提取物对小鼠的镇痛作用(扭体法)
(n =10,珔x ± s)
组别
剂量
(浸膏 g /kg)
20 min
内扭体次数
镇痛百分率
(%)
RAP水提组 1. 5 20 ± 5. 46** 28. 57
RAP石油醚组 1. 5 19 ± 4. 16** 32. 14
RAP氯仿组 1. 5 23 ± 3. 89* 17. 86
RAP乙酸乙酯组 1. 5 22 ± 4. 86* 21. 43
RAP正丁醇组 1. 5 9 ± 4. 63** 67. 86
RAP醇提物组 1. 5 27 ± 5. 24 3. 57
RAP水层组 1. 5 26 ± 5. 42 7. 14
吲哚美辛对照组 0. 013 mg /kg 17 ± 8. 15** 39. 29
正常对照组 蒸馏水 28 ± 6. 89 - -
注:与正常对照组比较,**P < 0. 01,* P < 0. 05
从表 3 可以看出,除 RAP 醇提物、RAP 水层组以
外,RAP氯仿组、RAP乙酸乙酯组与空白组相比均有显
著性差异,P < 0. 05;其中 RAP 水提组、RAP 石油醚、
RAP正丁醇、吲哚美辛组与空白组相比有极显著性差
异,P < 0. 01。镇痛程度依次是:RAP 正丁醇 >吲哚美
辛 > RAP 石油醚 > RAP 水提 > RAP 乙酸乙酯 > RAP
氯仿 > RAP水层 > RAP醇提物。
3 讨论
大叶蛇泡簕为广东地产药材,有清热利湿、止血、
散瘀的作用[1]。本实验选用的干酵母菌致热大鼠、小
鼠扭体法、小鼠热板法均是经典的评价药物解热镇痛
作用的模型,可明确反映出药物解热镇痛的作用。
解热试验中,大叶蛇泡簕各提取部位体温于注射
酵母混悬液 8h 后有所降低,其中 RAP 石油醚组、RAP
氯仿组、RAP乙酸乙酯组、RAP正丁醇组和吲哚美辛对
照组降温幅度较大,体温与其他给药组相比有明显的
降低,与正常对照组相比有极显著性差异(P < 0. 01)。
热板法实验中,RAP 氯仿组、RAP 乙酸乙酯组和 RAP
正丁醇组均表现出了较好的镇痛作用,可明显延长小
鼠于热板的添足时间,且 RAP氯仿和 RAP乙酸乙酯的
镇痛作用较为持久;小鼠扭体法实验中,除 RAP 水层、
RAP醇提组外,其余各给药组与正常对照组相比均可
有效降低小鼠扭体次数(P < 0. 01,P < 0. 05)。结果表
明,大叶蛇泡簕起解热镇痛作用的主要成分,可能来自
于石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇这 4 种溶剂所萃取
的部位,而水提、水层等其他部位解热镇痛作用较弱,
初步判断大叶蛇泡簕解热镇痛的主要活性成分集中于
醇提物的各萃取部分。
疼痛是临床多种疾病的常见症状,疼痛产生的原
因和机制各有不同,甘露等人从粗叶悬钩子正丁醇部
位分离出 3 个三萜类化合物[2]及 3 个其他类别化合
物[3],可能是正丁醇部位起解热镇痛作用的主要成分,
但大叶蛇泡簕具体是通过哪种途径来实现镇痛作用
的,尚待研究人员进一步研究发现。
参考文献
[1]梅全喜主编.广东地产药材研究[M].广州:广东科技
出版社,2011:413 - 414.
[2]甘露,赵玉英. 粗叶悬钩子三萜类化合物的分离鉴定
[J].中国中草药杂志,1998,23(6) :361.
[3]甘露,梁鸿,赵玉英,等.粗叶悬钩子化学成分的分离
鉴定[J].北京医科大学学报,2000,32(3) :226.
(收稿日期:2012 - 07 - 20)
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