全 文 ：蒙药材芹叶铁线莲对海虾幼虫的致死活性
付明海，阿丽沙，包保全，张 屏，赵德力格尔呼
（内蒙古民族大学，内蒙古通辽 028000）
〔摘 要〕海虾幼虫（brine shrimp）致死性生物活性测定法是一种简单、快速、准确的生物测定法。对蒙药材芹叶铁
线莲（Clematis aethusifolia）75%乙醇提取物的5个不同萃取部位和19个不同极性组分进行活性追踪研究。活性数
据结果显示蒙药材芹叶铁线莲乙酸乙酯层低压反相制备柱85%甲醇洗脱组分活性最强，LC50为6.7μg/mL。
〔关键词〕海虾幼虫；芹叶铁线莲；生物活性 LC50
〔中图分类号〕R931 〔文献标识码〕A 〔文章编号〕1008-5149（2011）02-0079-02
海虾幼虫致死性生物测定法, 是由R.F. Brown 于1969 年提出的, 是一种简单、易行、低成本的室内生物测定法, 用于检测
食物中的黄曲霉素等有毒成分〔1〕。这种方法还被广泛应用于监测真菌中毒性物质的分离、检测〔2〕。海虾幼虫还被应用于多
种生物测定系统, 在这些应用中, 包括对杀虫剂、真菌细胞毒性, 河流污染物、麻醉剂、吗啡类成分和海洋中的毒性物质等的
检测。1982 年, B. N .Meyer 等用海虾幼虫致死性生物测定法对已知的具有不同生物学活性的高等植物抽出物成分进行生物
测定, 结果表明, 这些成分对海虾幼虫大都显示了致死活性。美国purdue药学院Melaughlin教授经研究发现，具有生物活性
的天然化合物对简单动物海虾幼虫的致死率与对癌细胞的抑制率之间显示了相关性。这些资料表明, 海虾幼虫致死性生物
测定法作为一种快捷、方便对多种不同生物学活性都有效的低成本的室内生物测定法, 同样可以用来指导高等植物活性成
分的分离、检测。
蒙药材芹叶铁线莲为毛茛科植物芹叶铁线莲（Clematis aethusifolia）的干燥地上部位，是蒙医常用的破痞去 药，具有破
痞,调温,燥“协日乌素”、止腐、消肿、止泻之功效。临床上主治寒痞、消化不良、寒性“协日乌素”病、“吾雅曼”病、黄水疮、疮
疡、水肿、寒泻。根据记载，蒙药材芹叶铁线莲具有“祛寒性肿瘤的良药，味辛，微甘，自身有生热，祛肿瘤等功效”。因此采用
海虾幼虫（brine shrimp）致死性生物测定法，对内蒙古阿拉善地区芹叶铁线莲提取分离出来的24个样品作了抗癌活性的初步
筛选。
1 材料与仪器
芹叶铁线莲：于2009年 8月采自内蒙古阿拉善地区，原植物由内蒙古民族大学布和巴特尔教授鉴定为毛莨科铁线莲属
植物芹叶铁线莲（Clematis aethusifolia）干燥带花枝条部分。
海虾卵：（Artemia salina L.egg，产地：渤海湾盐田）。
人工海盐:（S9883, 由Sigma公司提供）;回流提取装置;低压制备柱（Agela Flash Column C18）;实验中有机溶剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 试药的提取分离 芹叶铁线莲干燥带花枝条部分10.6kg，粉碎，用75%乙醇回流提取3次，分别是3h，2h，2h。回收乙醇，
将浓缩的提取物悬浮于水中，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，测生物活性。将活性部位乙酸乙酯萃取部位
过低压反相制备柱，以5%、10% 、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、
100%甲醇水系统依次洗脱，回收测活性。
2.2 生物活性测定
2.2.1 海虾幼虫（brine shrimp）的孵化将人工海水（人工海水的配制：每升蒸馏水中加入35g海盐）加入试验水槽中,将实验水
槽置于恒温水浴中保持温度25℃，水槽一端倒入虾卵加盖,另一端以日光灯照射以吸引成长出的海虾幼虫聚集。24h后海虾
幼虫孵出，并聚集在灯光下。孵出的海虾幼虫禁食24h。
2.2.2 试验方法 将试验样品配制成浓度分别为1000、100、10μg/mL，每种浓度组平行样3个，人工海水为空白对照。将海
〔作者简介〕付明海，内蒙古民族大学蒙医药学院2008级硕士研究生。
2011年03月
第17卷 第2期
内蒙古民族大学学报
Journal of Inner Mongolia University for Nationalities
Mar.2011
Vol.17 No.2
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虾幼虫每10只一组加入样品浓度为1000μg/mL、100μg/mL和10μg/mL的混悬液中，终体积为5 mL。饥饿的海虾幼虫开始
食用待测样品。恒温25℃继续培养24小时后,记录存活海虾幼虫数量。经spss软件计算半数致死浓度LC50。
2.3 结果
2.3.1 不同部位生物活性测定 石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、水层提取物测生物活性。乙酸乙酯部位有较好活性，
lc50为286.9μg/mL。其它无显著活性（LC50 >1000）。对照组幼虫生长正常无一死亡。
2.3.2 不同组分生物活性测定 将活性较好的乙酸乙酯部位过低压反相制备柱，以5%、10% 、15%、20%、25%、30%、35%、
40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、100%浓度甲醇水依次洗脱，回收测活性。由表1 可看出6种组
分有较好活性（LC50<1000），其中85%甲醇部位活性最强LC50为6.7μg/mL。对照组幼虫生长正常无一死亡。
表1 19种不同组分海虾幼虫生物活性测定结果
各组分
5%
10%
15%
20%
25%
30%
35%
40%
45%
50%
55%
60%
65%
70%
75%
80%
85%
90%
100%
不同浓度24h后百分死亡率(%)
10
23
30
27
30
13
23
10
26
0
10
13
0
13
0
0
10
83
13
0
100
33
30
33
43
50
33
33
26
0
13
16
13
16
0
16
27
97
63
7
1000（μg/mL）
60
47
47
57
53
33
33
33
3
20
20
13
16
7
57
43
100
77
7
LC50（μg/mL）
410
>1000
>1000
187.9
368.4
>1000
>1000
>1000
>1000
>1000
>1000
>1000
>1000
>1000
824.3
>1000
6.7
94.4
>1000
3 讨论
本实验以海虾幼虫致死性生物测定法监测抗肿瘤蒙药材芹叶铁线莲干燥地上部位的分离，得到了具有抗肿瘤活性的有
效部位。海虾幼虫致死试验是蒙药提取分离过程中筛选抗肿瘤活性部位的一种快速简便，经济实用的新方法。
国内学者用海虾幼虫致死性生物测定法对合成的化合物和提取的单体进行了抗肿瘤活性筛选，结果均较为满意。
据报道，粗提取物LC50<1000，纯化合物LC50<50具有强的生物活性。实验结果表明，乙酸乙酯部位有较好活性LC50为
248.2μg/mL，进一步分离得到生物活性更强的组分，LC50为6.7μg/mL。
参 考 文 献
〔1〕R F Brown. The Effect of Some Mycotoxins on the Brine shrimp（Artemia salina. L .）〔J〕. Journal of the American
Oil chemists′ Society, February, 1969, 46（2）:119.
〔2〕J Harwig and P M Scott. Brine Shrimp（Artemia salina L.）Larvae as a Screening System for Fungal Toxins〔J〕.
Applied Uicrobiology，1971, 21（6）:1011-1016.
〔责任校对 僧 格〕
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