全 文 ：第 21卷第 22期 中国现代医学杂志 Vol. 21 No.22
2011年 8月 China Journal of Modern Medicine Aug. 2011
文章编号： 1005- 8982（2011）22- 2715- 04
·论著·
复方菝葜颗粒对 A549细胞生长状态的影响*
胡灿红 1，董克礼 2，李广诚 2
（1.江苏省中西结合医院 肿瘤科，江苏 南京 210028；2.中南大学
湘雅三医院 中医科，湖南 长沙 410013）
摘要：目的 观察复方菝葜颗粒对 A549细胞生长状态的影响。方法 雄性 SD大鼠 30只，随机分为两组，
每组 15只。一组灌服复方菝葜颗粒，2次 / d，另一组灌服等剂量蒸馏水，第 6次灌胃后 2 h提取血清。A549细
胞株随机分为中药实验组、西药对照组和正常对照组，分别加入 10%含药血清、顺铂 3μg/ mL和 10%SD 大鼠
血清进行培养，分别在培养 0 h、24 h、48 h和 72 h时进行细胞计数，绘制 A549细胞的生长曲线。结果 培养 0
h和 24 h时的 3组细胞数无明显差异（P <0.01）；培养 48 h后中药实验组和西药对照组的细胞数均有所增长，
但明显少于正常对照组，相比差异有显著性（P <0.01），中药实验组和西药对照组的细胞数无明显差异（P >
0.05）；培养 72 h后，正常对照组明显高于中药实验组和西药对照组，中药实验组和西药对照组比较无明显差
异。结论 复方菝葜颗粒能够抑制 A549细胞的增长速度。
关键词：复方菝葜颗粒；非小细胞肺癌；生长曲线
中图分类号：R- 332；R734.2；R96 文献标识码：A
Effects of compound rhizoma smilacinus granule on the
growth of A549 cells*
HU Can-hong1, DONG Ke-li2, LI Guang-cheng2
(1.Department of Tumor, Chinese-Western Combined Medicine Hospital of Jiangsu, Nanjing,
Jiangsu 210028, P.R.China; 2.Department of Traditional Chinese Medicine, the Third Xiangya
Hospital, Central South University, Changsha, Hunan 410013, P.R.China)
Abstract: 【Objective】To observe the effects of compound rhizoma smilacinus granule on the growth of A549
cells. 【Methods】30 male SD rats were divided into 2 groups at random. Group 1 was given compound rhizoma
smilacinus granule, twice/ day; the other group was given isodose of distilled water. The serum was extracted two
hours after feeding them for 6 times. A549 cell strains were divided into traditional Chinese medicine experiment
group, western medicine group and normal control group; 10% medicated serum, cisplatin 3 μg/mL and 10% SD rat
serum were added into them respectively for development. Cell counting at 0 h, 24 h, 48 h and 72 h and the growth
curve of A549 cells was drawn. 【Results】There was no distinct difference among the 3 groups of cells at 0 h and
24 h (P <0.01). After 48 h, the cells in both traditional Chinese medicine experiment group and western medicine
control group increase but the number was significantly less than that in normal control group; there was significant
difference (P <0.01); there was no significant difference between traditional Chinese medicine experiment group and
western medicine control group (P >0.05). After 72 h, the growth speed of normal control group was significantly
higher than that in traditional Chinese medicine experiment group and western medicine control group, and there
was no significant difference between the latter two groups. 【Conclusions】Compound rhizoma smilacinus granule
can inhibit the growth of A549 cells.
Key words: compound rhizoma smilacinus granule; non-small cell lung cancer; growth curve
收稿日期：2010- 12- 18
*基金项目：湖南省自然科学基金资助项目（No：03JJY4018）
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图 1 各组不同培养时间的细胞数折线图
近 50年来许多国家都报道肺癌的发病率明显
增高，在男性患者中肺癌已居首位，肺癌患者的 5年
生存率仅为 15%～20%[1]。肺癌的治疗以多学科的综
合性治疗为主，中医中药在肺癌的治疗领域发挥着
重要的作用。根据晚期非小细胞肺癌气虚、阴虚、气
滞、血瘀、痰凝和毒聚的病理变化，笔者将菝葜、鱼腥
草和猫爪草等药物组成的复方菝葜颗粒应用于临
床，取得了一定的疗效[2]。本研究主要观察复方菝葜
颗粒对非小细胞肺癌 A549细胞生长状态的影响，
现将结果报告如下：
1 材料与方法
1.1 预实验确定给药方案[3]
雄性（Sprague- Dawley，SD）大鼠 16 只，随机分
为 5倍剂量组、10倍剂量组、15倍剂量组和正常对
照组 4组，每组 4只，各剂量组分别灌服复方菝葜颗
粒 1.8 g、3.6 g和 5.4 g/次（2次 /d），正常对照组灌服
等剂量的蒸馏水。于第 6次灌胃后 2 h采取血清，经
灭活和除菌后备用。处于对数生长期的 A549细胞
随机分为 5倍剂量组、10倍剂量组、15倍剂量组、正
常对照组和空白对照组共 5组，每组 5瓶，分别加入
10%的 5倍剂量组、10 倍剂量组和 15 倍剂量组的
含药 SD大鼠血清、10%的 SD大鼠正常血清以及不
加血清的 1640培养基，观察细胞生长情况。细胞培
养 48 h后结果显示，10倍剂量组和 15倍剂量组的
细胞数较正常对照组和空白对照组均有显著性差异
（P <0.01），而 10倍剂量组与 15倍剂量组细胞数的
差异无显著性（P >0.05）。正常对照组与空白对照组
细胞数的差异无显著性（P >0.05）。结果表明 10倍
剂量和第 6次给药后 2 h制备含药血清是一种很好
的方案，与文献报道相符[3]。
1.2 动物喂养及含药血清的提取
纯系 SD雄性大鼠 30只，体重 200～250 g，随
机分为两组（n =15）。一组灌服复方菝葜颗粒，根据
预实验结果，选择相当于成人临床用药量的 10倍剂
量，即复方菝葜颗粒给药剂量为 3.6 g/次。复方菝葜
颗粒由蒸馏水稀释为 0.9 g/mL，大鼠灌服复方菝葜
颗粒 4 mL/只，2次 /d。另一组灌服等剂量蒸馏水，2
次 /d。第 6次灌胃后的 2 h，水合氯醛 3.5 mg/kg腹腔
麻醉，无菌条件下自腹腔横向切口、破膈肌，自左心
室采血，分装。常温静置 2 h后 3 000 rpm离心 10
min取血清，56℃水浴 30 min，灭活补体，在超净台
内，无菌条件下，滤器（孔径为 0.22μm）过滤血清，
除菌。- 20℃冰箱保存备用。
1.3 细胞实验
A- 549细胞随机分为中药实验组、西药对照组
和正常对照组，分别加入含 10%的含药血清、
3μg/mL的 DDP[4]和 10%正常 SD大鼠血清的培养
基 4 mL，分别在培养 0 h、24 h、48 h和 72 h时收集
细胞，进行细胞计数，绘制 A549细胞的生长曲线。
1.3.1 A549细胞的计数 用 70%的酒精清洁计数
板及专用盖玻片，然后用纱布轻轻拭干备用。用消
化液分散单层细胞，制成单个细胞悬液，吸管轻轻吹
打细胞悬液，使细胞分散均匀。取 10μL细胞悬液，
在计数板上盖玻片的一侧加细胞悬液，在显微镜下，
用 10倍物镜观察计数板四角大方格中的细胞数。细
胞压中线时只计左侧和上方细胞，不计右侧和下方
细胞。将计算结果代入公式中：细胞密度＝细胞数 /
原液体积（mL）=（4大格细胞数之和 /4）×104。
1.3.2 A549细胞生长曲线的绘制 在各组细胞培
养的 0 h，分别将各组消化好的细胞悬液计数后，精
确地将细胞分别接种于 36个 10 mL的培养瓶内，每
组各 12瓶，每瓶细胞的总数均为 104个，培养液均
为 2 mL。每天每组各取出 3瓶进行细胞计数，计算
均值，连续 3 d（24 h、48 h和 72 h）。以培养时间为横
轴，细胞数（对数）为纵轴，描绘在半对数坐标纸上，
各点连线成曲线，绘制细胞的生长曲线图。
1.4 统计方法
所有计量数据用均数±标准差（x±s）表示，采
用 SPSS 11.5统计软件包对数据进行方差分析。检
验水准α=0.05。
2 结果
2.1 细胞数及细胞生长曲线的测定
3组细胞培养的 0 h和 24 h细胞数的差异无显
著性（P >0.05）；培养 48 h后中药实验组和西药对照
中药对照组
西药对照组
正常对照组
细
胞
数
（
×
10
4
个
）
350
300
250
200
150
100
50
0
0 h 24 h 48 h 72 h
中国现代医学杂志 第 21卷
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A B C
A：中药实验组细胞培养 0 h后；B：西药对照组细胞培养 0 h后；C：正常对照组细胞培养 0 h后
图 2 相差显微镜下培养 0 h时的各组细胞图（×100）
A B C
A：中药实验组细胞培养 24 h后；B：西药对照组细胞培养 24 h后；C：正常对照组细胞培养 24 h后
图 3 相差显微镜下培养 24 h时的各组细胞图（×100）
A B C
A：中药实验组细胞培养 48 h后；B：西药对照组细胞培养 48 h后；C：正常对照组细胞培养 48 h后
图 4 相差显微镜下培养 48 h时的各组细胞图（×100）
表 1 各组细胞分别在培养 0 h、24 h、48 h和 72 h时细胞数的比较 （x±s）
注：1）与正常对照组比较，P >0.05，2）与正常对照组比较，P <0.01，3）与西药对照组比较，P >0.05
组别 例数 /例
A549细胞数 /（×104个 /10倍物镜）
0 h 24 h 48 h 72 h
中药实验组 12 2.3±0.11）3） 16.2±4.81）3） 143.0±8.22）3） 159.3±15.32）3）
西药对照组 12 2.2±0.21） 14.2±1.81） 119.3±9.32） 145.7±15.32）
正常对照组 12 2.3±0.1 17.6±6.8 238.7±16.4 260.3±38.1
第 22期 胡灿红，等：复方菝葜颗粒对 A549细胞生长状态的影响
组的细胞数均有所增长，但明显少于正常对照组，相
比差异有显著性（P <0.01），中药组实验和西药对照
组细胞数差异无显著性（P >0.05）；培养 72 h后，3
组细胞仍有所增长，但增长速度减慢，正常对照组明
显高于中药实验组和西药对照组，中药实验组和西
药对照组比较差异无显著性（见表 1和图 1~5）。
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A B C
A：中药实验组细胞培养 72 h后；B：西药对照组细胞培养 72 h后；C：正常对照组细胞培养 72 h
图 5 相差显微镜下培养 72 h时的各组细胞图（×100）
3 讨论
肺癌是常见的恶性肿瘤之一，其临床表现为咳
嗽、咯血、胸痛、发热和气急等。因肺癌早期症状不
明显，所以患者确诊时为多为晚期。近年来，肺癌已
位居城市人口所患肿瘤的首位。历代医家认为，肺癌
是由于正虚、邪热、痰浊和瘀血等原因所致。然而同
是肺癌患者，其病因、患病性质、患病部位及正邪关
系却各有不同。中医讲究辨证论治，因证处方。从中
医的角度，肺癌主要有 4种证型：热毒蕴肺型、气血
瘀滞型、痰浊蕴肺型和气阴两虚型。复方菝葜颗粒
主要适应于热毒蕴肺型，此型肺癌的临床表现是：发
热气急，咳嗽咯痰，痰黄而粘，痰中带血，甚至咯血不
止，咯吐不爽，口苦而干，口渴欲饮，心烦不寐，大便
干结，小便短赤，舌红苔黄，脉弦滑数（快）或数大（快
而有力）。复方菝葜颗粒以菝葜、鱼腥草、猫爪草、土
鳖虫、冬花、枸杞、白参和大枣等药物组成，其中以菝
葜和土鳖虫为君药，具有清热解毒和软坚散结之作
用；以鱼腥草、猫爪草和白参为臣药，协助君药益气、
解毒和散结；佐以冬花止咳化痰，使以枸杞和大枣养
阴、润肺和益气。全方具有清热解毒、化痰散结和润
肺益气等功效。临床上治疗中晚期非小细胞肺癌能
够改善患者的生存质量和延长生存期 [2]。实验研
究[5- 6]发现，复方菝葜颗粒具有可使 Bax mRNA的表
达量显著增加，使 Bcl- 2 mRNA的表达及 Bcl- 2/Bax
的比例显著降低，减慢细胞增殖速度，并诱导 A549
细胞凋亡的作用；还能将 A549细胞阻滞在 G1期，
延缓细胞的生长速度；增加 P53 mRNA的表达，诱
导细胞凋亡[7]。本实验研究发现，复方菝葜颗粒能够
抑制 A549细胞的生长速度，根据以往实验的结果，
笔者认为复方菝葜颗粒可能是通过诱导细胞凋亡来
发挥治疗作用。
参 考 文 献：
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（谭 亮 编辑）
中国现代医学杂志 第 21卷
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