全 文 ：. 论 著 .
虎耳草颗粒的质量控制方法
郑 岩 王红 霞 陈随清 *
(河南中医学院 , 河南 郑州 4 5 000 8 )
【摘要」目的 建立虎耳草颗粒的质量控制方法 。 方法 色谱柱为 h y p er isl O D S ( 250 ~ x 4
.
0 m m
、
5 协 m)
, 流动 相 为甲醇 一 水 ( 20 : 80) ,
流速为 1 . o mL /皿 n
, 检测波长 275 n m , 柱温 30 c 。 结果 岩 白菜素的进样量在 0 . 0 2 0 2一 0 . 202 协 g 之间与峰面 积 呈 良好线性关 系 (留= 0 . 9 9 9 8 ) ,
平均回 收率为 10 0 . 3 % , R s D=l . 92 % 。 结论 本方法灵敏 、 准确 、 重现性好 , 可用于虎耳草颗粒的质量控制 。
【关键词】虎耳草颗粒 ; H PL C ; 质量控制 ; 岩 白菜素
中图分类号 : R g 文献标识码 : B 文章编号 : 1 6 7 1一8 1 9 4 ( 2 0 1 4 ) 2 3一 0 0 4 6一 0 2
A Q u a lit y c o n t r o l M e t h o d fo r t h e S a x if r a g a G r a n u le s
2 2刀 i刃G aY n, 环乃刀 (子 Zlo n g戎 ia 夕 C Z刀 i刃 uS i一 iq n g
(eH
n a n
nU i
v e sr i yt of Z h
之d i t i o n a l hC i
n e s e 月4召 d i e in e , hZ e gn z h o u 4 5 0 008, hC in a )
[A b s t r a e t ] o bj
e e t iv e oT
e s tab li
sh a q u a li ty e o n tr o l m e ht o d o f S a x ifr a g a g r a n u l e s
.
M
e th o d s Th e a n a ly si s w a s P e rof r m e d o n Ph e n o m e n e x h y id o C l、
e o l u
mn (
2 5 0
n
冰 4石
n
,
4 林m)
,
the mo b il
e Pha
s e w a s M
e
O H
一
H Z O ( 2 0
: 8 0 ) w it h
a fl o w r at e at l刀 n止 /nu n , a nd d e t e ct io na l w 即 e le n g 吐h at 2 7 5 nm u nd e r
e o lu m n t e哪 e r a t二 e 3 o c . R e s u 一t s The re w a s a 即 o d l ine a r re l at i o n shiP w he n the s a哪 le si z e o f b e塔 e血n w a s at a ra 雌 e o f o刀2 0 2 一 0 2 0 2 0 9 (扩= o , 9 9 8 ),
ht e r e e o v e ry w a s 10 0 3 3%
,
w i th R S D a t 1
.
9 2%
.
C o n e lu s i o n T h is m e ht o d w a s s e n s i t i v e
, e x a e t , a n d r e P r o du
e ib le t o b e u s e d ofr ht
e q u a li ty e o n t r o l o f ht e
S a x i fr a g a g r a n u le s
.
[K e y w o r d s ] S a x i fr a g a g r a n u le s : H PL C : Q
u a li ty e o n tr o l : B e gr e n i n
虎耳草 , 为虎耳草科虎耳草属植物虎耳草 (S ax ifr ag a s ot lon ife ar
C ur t
.
) 的干燥全草 , 微苦 、 辛 、 寒 、 有小毒 , 能祛风清热 , 凉血解
毒 , 用于治疗风热咳嗽 、 风疹 、 湿疹、 急性中耳炎等 l[] 。 收载于 《贵
州省中药材、 民族药质量标准》 20 03 年版 , 是常用的民族药 2[] 。 为贵
州省著名制剂 “ 咳速停胶囊” 、 “胆炎康胶囊 ” 和 “ 咳平胶囊 ” 等的
主要原料药 3[] 。 药理实验表明虎耳草有抗炎 、 抑菌、 镇咳等作用 4[] 。 虎
耳草中所含化学成分主要有岩白菜素 、 懈皮素 、 懈皮普 、 丹皮酚 、 没
食子酸等5[] 。 其中 , 岩白菜素具有镇咳祛痰作用 , 临床已应用于治疗
慢性支气管炎 6[] 。 虎耳草颗粒为河南中医学院三附院自制制剂 , 用于
治疗咳嗽痰多。 为保证虎耳草颗粒的质量及疗效 , 本文以岩白菜素含
量为指标 , 建立虎耳草颗粒的质量控制方法 , 为虎耳草颗粒进一步的
药理 、 药代动力学及临床疗效研究提供科学依据 。
1 仪器与试剂
1
.
1 实验仪器
高效液相色谱仪 (L C 一20 AT , S ih m a d z u) , 紫外检测器 ( S PD -
ZOA
,
S h i m a d z u )
, 色谱工作站 ( C B M 一 1 0 2 , S h im a d z u ) ; 循环水式
多用真空泵 (S H Z 一 9 5 B , 巩义市予华仪器有限责任公司 ) ; 分析天
平 (B S 2 2 4 2 5 , 北京赛多利斯仪器系统有限公司 ) ; 十万分之一天
平 (梅特勒 , M e t t l e r oT le d o A B 1 3 5 一 S ) ; 数控超声波清洗器 ( K Q -
,通讯作者
5 0 D V
, 昆山市超声仪器有限公司 ) 。
1
.
2 试剂
甲醇 (为色谱纯 , 天津四友精细化学品有限公司 , 2 0 1 10 9 0 9 ) ; 提
取用甲醇为分析纯 (北京化工厂 , 2 0 1 10 51 8 ) ; 水为娃哈哈纯净水。
1
.
3 对照品
岩白菜素为中国生物制品检定所提供 , 批号 ( 74 2一 2 0 001 1 1 ) , 经
H PL C检测 , 含量 > 9 % 。
1
.
4 样品
所用虎耳草颗粒样品为河南中医学院三附院自制。
2 方法与结果
2
.
1 色谱条件
色谱柱 : p h e n o m e n e x h y id o O D S C 18 ( 2 50 m m 火 4石 m m , 4 口 m )
色谱柱 , 流动相 : 甲醇一水 (20 8 0) , 流速 : 1 . 0 m Lm/ in , 检测波长 :
2 7 5 n m
, 柱温 : 3 0 0C 。
2 2 对照品溶液制备
精密称取岩白菜素对照品 , 置于容量瓶中 , 甲醇定容至刻度 , 摇
匀 , 得浓度为位01 01 m g角 I L的对照品溶液 。
2 3 供试品溶液制备
精密量取 1 9虎耳草颗粒 , 置具塞锥形瓶中 , 精密加人 50 % 甲醇
5 0 m L
, 浸泡30 m in , 超声提取 45 m in , 放置至室温 , 补足重量 , 摇
匀 , 用减压真空泵抽滤 , 取续滤液 , 用位45 口 m微孔滤膜滤过 , 作为
合和修复 ; ③止血作用 。 壳聚糖具有明显的膜形成作用 , 可加速伤 口
愈合和防止大出血 3[] 。 我院采用宫颈L e p术后应用壳聚糖抗菌膜 , 发
现阴道流血及流液时间及创面愈合时间减少 。
综上所述 , 壳聚糖宫颈抗菌膜可减少宫颈术后阴道流血及流液 、
促进愈合 , 可预防和治疗宫颈L E P术后并发症 , 值得推广利用 。
参考文献
[ l ] 朱雪洁 ,郑飞 云 ,朱雪琼 ,等 .宫颈电环切术对妊娠时限及分娩方
式的影响 J[] .实用妇产科杂志 , 2 008 , 2 4 ( 2) : 10 9 .
丰有吉 ,沈铿 .妇产科学 [M ]. 2版 .北京 :人民卫生出版社 , 2 01 0 : 2 7 6 -
2 7 8
.
孟桂珍 ,张淑珍 .宫颈环形电极切除术联合壳聚糖抗菌膜治疗宫
颈病变临床观察 J[] .军事医学科学院院刊 , 2 009 , 3 (5 ): 4 9 .
DOI : 10. 15912 /j . cnki . gocm. 2014. 23. 002
. 论 著 .
1 0浮卫二茎 1鱼山鱼
岩白菜素标准品 H P L C图
尸\ {
\一 /八“ _ -一户 吸少 、沪一 _ _ _ 一
_、 、
{
。 、、 一、 一 、一图 2 供试品溶液 H P L C图 图 3 阴性对照 溶液 H PL C图
表4 虎耳草颗粒中岩 白菜素加样回收率实验结果
取样量 (g ) 岩白菜素含量 (m )g 加人岩白菜素量 (m )g 岩白菜素检出量 (m )g 回收率 (% ) 平均回收率 (% ) R S D (% )
05 0 0 1
0
.
5 0 0 3
0
.
5 0 0 2
0
.
5 0 0 4
0
.
5 0 0 2
0
.
5 0 02
1
.
9 2 8
1
.
9 2 8
1
.
9 2 8
1
.
9 2 8
1
.
9 2 8
1
.
9 2 8
1
.
9 2 8
1
.
9 2 8
1
.
9 2 8
1
.
9 2 8
1
.
9 2 8
1
.
9 2 8
3
.
8 5 4
3
.
8 7 7
3
.
9 0 8
3
.
89 5
3
.
8 2 3
3
.
8 1 8
9 9名 9
1 0 1
.
0 8
1 0 2石 7
1 0 2刀 3
9 8 2 7
9 8刀 2
1 0 0 3 3
供试品 , 备用 。
2 4 阴性对照溶液的制备
按处方比例配成不含虎耳草的阴性对照样品 , 按2 3项下供试品溶
液制备方法 , 制成阴性对照溶液 , 分别精密吸取阴性对照溶液 、 供试
品溶液及对照品溶液各10 禅L , 按 2 . 1项下色谱条件进样测定 , 结果表
明 , 阴性对照溶液色谱图中与对照品相 同保留时间处无吸收峰干扰。
对照品 、 供试品及阻险对照对照溶液色谱图见图1一 3 。
2
.
5 方法学考察
2
.
5
.
1 线性关系的考察
取浓度为位01 01 m g /mL 的岩白菜素对照品溶液 , 分别进样 2 、 4 、
6
、
1 0
、
14
、
20 口 L , 按2 . 1项下色谱条件测定。 以岩白菜素的峰面
积 ( 火 10 E , ) 为纵坐标 , 进样量 ( 口 g ) 为横坐标进行线性回归 , 回
归方程为 : y = 14 . 7 2 x+0 . 0 10 6 , R Z = 住 9 998 , 表明岩白菜素的进样量在
Q02 02
一位20 2 口 g之间与峰面积线性关系良好 。
2
.
5 2 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液 , 分别于 O、 2 、 4 、 8 、 12 、 24 、 48 h进
样测定岩白菜素峰面积 , 计算R S D =l . 67 % 。 结果表明 , 供试液在本实
验条件下48 h内较为稳定 , 试验结果见表 1 。
表 1 虎耳草颗粒稳 定性试验结果
序号 时间 (h) 岩白菜素峰面积 R S (D % )
1 0 1 13 6 6 94乡
2 2 1 12 9 8 54石
3 4 1 10 7 6 2 5刀
4 8 10 9 2 4 0 5名 1 .6 7
5 12 1 10 3 9 5 5 2
6 24 10 9 5 5 8 6 4
7 4 8 10 8 9 4 6 9乡
2
.
5 3 精密度试验
精密吸取 同一供试品溶液 , 重复进样 5次 , 分别测定岩白菜素峰
面积 , 计算R S D = 位68 % , 表明本方法精密度良好。 试验结果见表 o2
表 2 虎耳草颗粒精密度实验结果
序号 岩白菜素峰面积 R S (D %)
1 18 7 16 3
.
9
1 18 0 9 13
.
6
1 19 7 1月4 名
1 19 7 7 6 9刀
1 18 19 3 4 2
O石8
2
.
5 4 重现性试验
按供试品溶液制备方法平行制备 5份供试品溶液 , 分别测定岩白
菜素平均峰面积 , 计算R S D =l . 78 % , 表明本方法重现性良好。 试验结
果见表 3 。
表 3 虎耳草颗粒重现性实验结果
序号 岩白菜素峰面积 R s (D % )
1 1 14 9 7 7 2 7
2 1 15 2 3 6 5 2
3 1 18 4 5 6 1
.
6 1
.
7 8
4 1 15 3 7 4 8月
5 1 19 4 0 5 6 3
2
·
5
·
5 加样回收率试验
取六份已知岩白菜素含量的虎耳草颗粒各0 . 5 9 , 精密称定后 , 分
别精密加人每 1 们 IL含岩白菜素 3 . 8 57 m g的标准品溶液位5 们I L , 其余按
照2 3 项下供试品溶液的制备方法制备 , 进样测定 , 计算回收率 , 平均
回收率 10 Q 3 % , R S D =l . 92 % , 表明本方法回收率较好。 结果见表o4
2石 样品含量测定
按上述方法 , 制备供试品溶液 , 测定 3批虎耳草灌注剂中岩白菜
素的含量 , 结果见表 5 。
表 5 虎耳草颗粒含量测 定结果
样品号 取样量 (g) 岩白菜素峰面积 岩白菜素含量 (m g/ g)
1 1
.
0 0 2 8 1 10 0 9 7 1
.
2 3
.
7 4
2 1
.
0 0 24 1 0 8 8 0 77 5 3
.
6 9
3 1
.
0 0 2 6 1 12 0 3 6 7 3 3
.
8 0
3 讨 论
测定结果表明 , 本实验建立的H PL C法测定虎耳草颗粒中岩白菜
素的含量方法 , 快速 、 灵敏 、 准确 、 重现性好 , 可有效控制虎耳草颗
粒质量 , 保证其临床疗效 , 并为今后虎耳草的药理 、 药代动力学及临
床疗效研究提供科学依据 。
参考文献
l[] 江苏新医学院 .中药大辞典阿工上海 :科学技术出版社 , 19 97 : 1 3 35 .
2[ ] 贵州省药品监督管理局 .贵州省中药材 、 民族药质量标准 [M ] .
贵阳 :贵州科技出版社 , 2 003 : 2 35 .
【3] 徐昌艳 ,张丽艳 ,李燕 ,等 .黔产苗药虎耳草的 H P L C指纹图谱研究
[J ]
· 中国实验方剂学杂志 , 2 0 12 , 1 8 ( 15 ) : 7 3 一7 6 .
4[ ] 李亨东 ,李英伦 ,范巧佳 ,等 .四月}宝兴虎耳草活性部位筛选 J[] . 中
草药 , 2 0 0 9 , 4 0 ( 5 1) : 1 8 7 一 1 8 9 .
5[ 」 罗厚蔚 ,吴葆金 ,陈节庵 ,等 .虎耳草有效成分的研究 J[] . 中国药科
大学学报 , 19 8 8 , 19 ( 1 2 ) : l 一3 .
6[ 」 国家药典委员会 .中国药典 (一部 )【5] . 2 0 10 版 .北京 :中国医药科
学出版社 , 2 01 0 .