全 文 ：　　　　　第 22卷　第 3期
2007年 6月 　　　
川 北 医 学 院 学 报
JOURNAL OF NORTH S ICHUAN MED ICAL COLLEGE
Vo l. 22, No.3
Jun.2007
　作者简介:何效平(1972 -), 女 , 四川南部人 , 药师 , 主要
从事临床药物调剂工作。
　收稿日期:2007 -01 -26
高效液相色谱法测定雪胆中雪胆甲素的含量
何效平 1 ,杨琼芳 2 , 王贤英 3 ,刘兰英 1
(1.川北医学院附属医院 ,四川 南充　637000;2. 重庆市儿童医院药剂科 ,重庆　400010;3. 重庆市中药研究院制药厂 , 重
庆　400065)
摘　要:目的 应用高效液相色谱法(HPLC法)测定雪胆中雪胆甲素的含量。方法 采用 C18色谱柱 , 流动相为甲醇 -水(80
∶20),流速:1.0m l /m in,检测波长为 210nm。结果 雪胆甲素在进样量 0. 4994 - 2.497μg( r=0. 9999)范围内呈良好的线性关
系;平均加样回收率为 99. 80%, RSD=0.16%(n=5)。结论 本法操作简便 、准确 、灵敏度高 、重现性好 ,可用于雪胆药材中雪
胆甲素的含量测定。
关键词:雪胆;雪胆甲素;高效液相色谱法(HPLC法)
文章编号:1005-3697(2007)03-0264-03　中图分类号:R284. 1　文献标识码:A
Determ ination of Cucurb itacin in Xuedan by HPLC
HE X iao-ping1 , YANG Q iong-fang2 ,WANG X ian-y ing3 , LIU Lan-y ing4
(1. The A ffiliated Hospital of North S ichuan M edical College, Nanchong , S ichuan, 637000 China;2. Departmen t of Pharmacy,
Chongqing , 400010, Ch ina;3. Chongqing Academ y of ChineseM ateriaM edica Pharm aceutical Factory, Chongqing , 400065, Ch ina;4.
The Affilia ted Hospita l of North S ichuanM edical College, Nanchong , S ichuan, 637000China)
Abstrac t:Objective To estab lish am e thod fo r de term ination of cucurbitacin in xuedan by HPLC. M ethod HPLC ana lysis w as carried
out by u sing ODS co lumn (5μm , 250mm ×4. 6mm) and me thano l -w ater(80∶20) a s the mobile, flow ra te at 1. 0m l /m in, and the
detec tion w ave length w as 210nm. R esu lts Them e thod was linear w ithin the range o f 0. 4994 ～ 2. 497μg ( r =0. 9999), and the ave r-
age recovery w as 99. 80%, w ith the RSD of 0. 16% (n=5). Conclusion Them ethod w as simp le, accura te, h igh ly sensitive and repro-
duc ib le. It m ay be used for the quantitative dete rm ina tion o f cucurbitac in in xuedan.
K ey words:Xuedan;Cucu rbitac in;HPLC1
　　雪胆为葫芦科雪胆属植物长果雪胆 (Hemsleya
do lichocarpa W . J Chang)、峨眉雪胆 (Hemsleya
omeiensis L. T Shen e tW . J Chang)或巨花雪胆
(Hem sleya g iganthaW . J Chang)的干燥块根 。主要
含雪胆甲素及少量雪胆乙素和皂苷成分 , 主要用于
菌痢 、 肠炎 、支气管炎及急性扁桃体炎 , 具有抗菌
效价高 、 剂量小 、 副作用小等优点[ 1] 。了解其在
药材中的含量高低 , 对于合理用药及开发药物资
源 , 均有十分重要的意义 。曾有文献报道建立了雪
胆中雪胆甲素的反相高效液相色谱法含量测定
法 [ 2] , 但其峰形 、 峰高及分离度均较差 。本文重
新建立了雪胆中雪胆甲素的高效液相色谱法含量测
定方法 , 并对不同批次的雪胆中雪胆甲素含量进行
了比较 。
1　仪器 、试药与方法
1.1 仪器:岛津 LC -2010A高效液相色谱仪 ,岛津
AEG - 45SM 十万分之一电子分析天平 (日本 );
FA2004分析天平 (上海天平仪器厂制造);SK250LH
超声仪(上海科导超声仪器有限公司)。
1.2 试药:雪胆甲素对照品 (1518 - 200101 ,供含
量测定用 ,中国药品生物制品检定所 );甲醇 (色谱
纯);乙醇 (分析纯);雪胆 (药材市场购买 )。
1.3 色谱条件:色谱柱 D iamonsil(钻石 )柱 4.6mm
×150mm , 5μm (C18柱 ,迪马公司),柱温:25℃,流
动相:甲醇 -水 (80∶20),流速:1.0m l /m in, 检测波
长:210nm ,灵敏度 0.05AUFS,进样量为 10μl。
1.4 线性关系:精密称取经五氧化二磷减压干燥
至 12小时以上的雪胆甲素对照品适量 ,以甲醇为溶
剂 ,配成浓度为 0.427mg /m l的对照品溶液 ,用色谱
仪的自动进样器分别进样对照品溶液 1、2、4、6、8、
10μl,测定峰面积 ,以雪胆甲素 (μg)为横坐标 X ,峰
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面积为纵坐标 Y, 得回归方程为 Y =1230.65 +
380007.3012X , r =0.9999。 (见图 A)
1.5 样品测定:称取雪胆粉 (过 20目筛 )1g,精密
称定 ,置 50m l容量瓶中 ,加甲醇约 40m l,超声提取
30分钟 ,静置冷却 ,再用甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,即
得样品溶液。经 0.45μm微孔滤膜过滤。将样品分
别按上述色谱条件测定。每次进样 10μl,每份测定
2次 ,取其平均值 ,由回归方程计算出每份样品中雪
胆甲素的含量 。 (见图 B)
1.6 精密度试验:取对照品溶液 ,连续进样 5次 ,
测定雪胆甲素峰面积积分值 ,结果 RSD =0.39%。
1.7 稳定性试验:对同一对照品及供试品溶液分
别进样 ,每隔 0h r、3hr、5h r、7hr、11h r、16hr,测定雪胆
甲素峰面积 。结果 RSD分别为 0.50%、2.20%,表
明有良好的稳定性。
1.8 重复性试验:精密称取同一批样品 5份 ,同法
提取 、测定 ,测得其平均含量为 3.1521mg /g, RSD =
0.53%。
1.9 加样回收率试验:称取已知雪胆甲素含量的
样品约 1g,精密称定 ,精密加入 1.0m l雪胆甲素对
照品溶液 ,按样品溶液制备项下的方法提取 、测定 、
计算回收率。结果见表 1。
表 1　加样回收率实验结果
样品含量
(mg)
加入量
(m g)
测得量
(m g)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
相对标准偏差
(%)
3. 1535 3. 15 6. 3025 99.97
3. 1453 3. 15 6. 2848 99.67
3. 1726 3. 15 6. 3128 99.69 99. 80 0. 16
3. 1525 3. 15 6. 2926 99.68
3. 1368 3. 15 6. 2861 99.98
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2.0 样品测定:根据上述色谱条件 ,依法测定 5个
批号 ,每批测定 4次 ,结果见表 2。
表 2　雪胆中雪胆甲素含量测定结果(n=4)
批　号 雪胆甲素含量(m g /g) 相对标准偏差(%)
20040601 0. 8377 0. 64
20050801 2. 4297 0. 58
20051002 3. 5644 0. 81
20060401 3. 8186 0. 98
20061002 3. 1521 0. 75
2　结　果
雪胆甲素在 0.427 - 4.27ug间有良好线性关
系 ,在精密度试验 、稳定性试验 、重复性试验 、加样回
收率试验 、样品测定中均得到符合要求的相对标准
偏差 ,有较好的精密度 。
3　讨　论
3.1 提取方法的选择:本文作者曾试验过用乙酸
乙酯 、95%乙醇 、三氯甲烷 、丙酮超声提取样品中雪
胆甲素的含量 ,同时对提取溶剂的用量做了选择性
试验 ,对提取方法的选择先用了文献报道的用乙酸
乙酯回流提取方法[ 1] ,但需要的雪胆甲素峰较小 ,
杂质峰较大 ,后选用了本文中样品处理方法 ,使得雪
胆甲素峰较大。
3.2 检测波长的选择:本文作者曾试验过用文献
中报道的检测波长及流动相测定样品含量 ,雪胆甲
素在 288nm处的吸收值较小 ,使得峰高较低。对雪
胆甲素对照品在 190nm - 400 nm进行紫外扫描 ,发
现雪胆甲素在 210 nm处的吸收值大 ,是最大吸收 ,
在雪胆药材样品中响应值大 ,测出的雪胆甲素峰较
好。因此 ,本文选用了 210 nm作为检测波长。
3.3 流动相的选择:本文作者曾试验过用文献中
报道的及流动相甲醇∶水 (55∶45)测定样品含量 ,后
又选用了甲醇∶水 (60∶40)、甲醇∶水 (65∶35)、甲醇
∶水(70∶30)、甲醇∶水(75∶25)、甲醇∶水 (80∶20)、甲
醇∶水 (85∶15)、甲醇∶水(90∶10)、甲醇∶水(95∶5)作
为流动相 ,最后选定了甲醇∶水 (80∶20)作为样品测
定的流动相。
该方法简便 、稳定 、重现性好 ,可作为雪胆药材
的质量控制。
参 考 文 献 :
[ 1] 　施亚琴 ,杨培全 ,聂瑞麟 ,等.长果雪胆化学成分的研究 [ J] .中
草药 , 1991, 22(3):102
[ 2] 　施亚琴 ,杨培全 ,台云梅 .反相高效液相色谱法测定不同采收
期长果雪胆中雪胆甲素的含量 [ J] . 中国中药杂志 , 1996, 21
(5):276 -277
(学术编辑:尤厚成)
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