全 文 ：9 0 0 2第十一卷 第五期 v *o l . 11 No .5
杜 鹃兰 生物碱组织亿学定位初步研究 *
口彭斯文 * *(贵州大学生命科学学院
了贵州大学生命科学学院
、贵州大学中药材研究所
贵阳
张明生 * *
贵阳
贵阳
0 0 5 5 5 2 )
0 0 5 5 5 2、
0 0 5 5 5 2
(贵州省中药材繁育与种植工程实验室 贵阳 5 50 0 5 2 )
王玉芳 (贵州大学生命科学学院 贵阳 0 0 5 5 25 )
摘 要 :采用植物组织化学定位的方法 ,研究 了杜鹃兰各营养器官中生物碱的分布及大致含量 。
结果表明 , 杜鹃兰全株均含有生物碱 ,但其根 中所含的生物碱类型跟其它部位有所 不同 , 而假鳞 茎 、
叶片和叶柄 中的生物碱可能是同一类型 。 杜鹃兰 营养器官中生物碱含量 由高到低分别是 :假鳞茎 、 叶
柄和叶片 。
关键词 : 杜鹃兰 生物碱 组织化学定位
杜鹃兰 [c er ~ t ar 卿 e n汉i。 u lat a ( D . D o n ) K a k i n o ]又名算盘七 、 三道箍 、 朝天一柱香等 , 为兰科杜鹃兰
属 的多年生药用草本植物 , 以假鳞茎人药 ,药材称毛
慈菇或山慈菇 , 为重要紧缺中药材 l[ 一 3] 。 毛慈菇味甘微
辛 ,性寒 , 有小毒 , 具有清热 、解毒 、 消肿 、 散结 、 化痰
等功效 , 主要用于治疗凛病结核 、 咽喉肿痛 、 跌打损
伤 、 蛇虫咬伤 、黄疽及癫痛等症 。 现代医学研究表明 ,
毛慈菇内用于治疗乳腺癌 、食管癌 、 胃癌 、 子宫癌 、淋
巴肿瘤及 白血病等恶性肿瘤 ; 外用治疮毒 、 虫蛇咬
伤 、皮肤烫伤或烧伤等间 。
迄今为止 , 从杜鹃兰假鳞茎中已分离得到生物
碱 、菲类 、黄烷酮类和昔元等 or 余个化合物 7[ 一 l0] 。有人
从杜鹃兰植株中分离出几种对人类 6 种癌细胞有抑
制作用的活性成分 ;l0[ 另有人发现杜鹃兰提取物中的
毗咯里西陡类生物碱具有较强的阻断作用 〔;l0] 日本一
项专利报道了杜鹃兰中的两个化合物 C er m as t os in l
和 n L川 , 并从该植物中分离出一个具有活性的生物碱
C er m as itr n e
。 然而 ,有关杜鹃兰的成分在其植株各器
官中的分布尚未见报道 。 本实验采用组织化学定位
的方法 , 探索了药效成分生物碱在杜鹃兰植株内的
积累部位 , 以期为该药材的合理采收 、药用部位的科
学利用提供参考依据 。
一 、 材料与方法
收稿 日期 : 20 9 一 0 2一 2 6
修回 日期 : 2 0 9 一 07 一30
1
. 材 料
杜鹃兰 c . 卿。 dn i。 u alt a 采 自贵州省贵阳市花溪区高坡乡 , 由贵州大学熊源新教授鉴定 。
2
. 方 法
国 家自然科学基金 ( 3 09 4X() 1 1 ) :杜鹃兰的 生理生 态适应 性与人工种值适宜条件研究 , 负责人 : 张 明生 ; 贵州省优 秀青年科技人才培养计划
项 目 (黔科合人字[20 7 ]06 号 ) : 杜鹃兰的重要生物学特性及生理生态适应性研 究 , 负责人 : 张明生 。
联系人 : 彭斯 文 , 硕 士研究 生 , 主要研究方向 : 植物 结构与成分 ;张 明 生 , 博士 ,教授 , 主要研究 方向 : 药用植物 生理生化与生物技术 , eT l :
0 8 5 1一 3 8 5 6 3 7 4 , E一~ l
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世界科学技术一中医药现代化★中药研究
根据生物碱与碘化秘钾和浓硝酸产生颜色反应
的原理 ,本实验对杜鹃兰植株的根 、 假鳞茎 、 叶片及
叶柄分别做徒手切片 , 并将其用改 良的碘化秘钾
( D
r a g e n d o fr )试剂 , 由 0 . 8 5 9 次硝酸秘溶于 l onrL 冰
醋酸和 4 0m L蒸馏水后 , 再与 20 m L 40 %的碘化钾混
合而成 )处理 s m in 后 , 置于显微镜下观察并拍照 。 为
避免假阳性现象的出现 , 以浓硝酸处理的徒手切片
进行验证 [ , ’ 一 ` 2 ]。
切片上的维管束有明显深蓝色反应 , 其它部位则不
明显 (图 4一 l) ;叶柄经碘化秘钾处理后 , 除在维管束
上有明显的棕红色沉淀外 , 其它部位几乎无此表现
(图 4 一2 和图 4一 3 ) 。 用浓硝酸和碘化镑钾分别处理
叶柄的结果一致 , 说明杜鹃兰叶柄中生物碱集 中聚
集于维管束内。
三 、 讨 论
二 、 结果与分析
1
. 生物碱在根的分布
杜鹃兰根经浓硝酸处理后 , 以 中柱鞘为界 , 中柱
鞘内侧有明显的棕红色反应 , 而中柱鞘外侧却无此
现象 (图 1一 1 ) ;碘化秘钾处理结果显示 ,在根的中柱
鞘内侧有明显的血红色沉淀 ,其颜色较深 , 而中柱鞘
外侧沉淀不明显 (图 1一 2 和图 1一 3 ) 。 浓硝酸处理与
碘化秘钾处理的结果基本一致 , 说明杜鹃兰根部的
生物碱集中分布在中柱鞘以内 。
2
. 生物丛在韭乳鳞茎的全左
杜鹃兰的假鳞茎经浓硝酸处理后 , 其皮层和维
管束有明显的深蓝色发应 , 而中间的薄壁细胞颜色
较浅 (图 2一 1 ) ;碘化秘钾处理的假
鳞茎则表现为皮层细胞和维管束
有棕红色沉淀 ,而薄壁细胞中沉淀
较少 (图 2一 2 和图 2一 3 ) 。 浓硝酸和
碘化秘钾的处理结果基本一致 , 表
明假鳞茎中生物碱主要积累在皮
本实验的结果表明 , 生物碱在杜鹃兰的全株都
有分布 。 用同样的试剂处理 ,根部产生的效果与其它
部位的完全不同 , 说明根中生物碱的类型与其他部
位不一致 。 从对假鳞茎 、 叶片和叶柄处理产生的效果
(颜色深浅或沉淀多少 )可以判断其生物碱含量由高
到低的顺序为 : 假鳞茎 、 叶柄和叶片 。 由此我们初步
推断 , 杜鹃兰假鳞茎中的生物碱极有可能不是假鳞
茎本身产生 , 而是由叶片产生后通过叶脉汇集到叶
柄的维管束 , 最后转运到假鳞茎中贮存所得 。 由于杜
鹃兰植株中生物碱含量以假鳞茎最多 , 故通常把假
鳞茎作为该药用植物的药材 。
植物组织化学定位方法能够直观 、 快速地反映
药用植物的药效成分在其各器官中的分布情况 , 但
层和维管束中 。
3
. 生物碱在叶片的分布
杜鹃兰 叶片经浓硝酸处理后
显示 出浅蓝色反应 ,侧脉的颜色较
主脉浅 , 叶肉细胞中则更浅 (图 3 -
1 ) ; 同样 ,用碘化秘钾处理叶片后 ,
主脉有明显的棕红色沉淀 ,侧脉的
较浅 , 而叶肉细胞中沉淀更不明显
(图 3一 2 和图 3一 3 ) 。 浓硝酸处理的
结果与碘化秘钾处理的基本一致 ,
证 明杜鹃兰叶片中生物碱主要在
叶脉内积累 , 尤其是主脉 , 而在叶
肉细胞中很少分布 。
4
. 生物碱在叶栖的分布
用浓硝酸处理杜鹃兰叶柄 , 其
图 1 根横切
1
.浓峭酸处理的根横切 x4 ;0 2 .碘化秘钾处理的根横切 x4 0 ; 3 .碘化秘钾处理的根横
切 x 10
( C C
: 中柱 ; R e : 浓峭酸处理呈棕红色反应部位 ; R eB : 碘化秘钾处理呈血红色沉淀
部位 , 示生物碱分布 )
图 2 假鳞茎横切
1
.浓峭酸处理的假鲜茎横切 xl o ; .2 碘化秘钾处理的假鳞 茎横切 x4 o ; 3 .碘化秘钾处
理的假鳞茎横切 xl o
( B
: 浓峭酸处理呈蓝色反应部位 ; B T : 基本组织细胞 ; :P 周皮 ; R B :B 碘化秘钾 处理
呈棕红色沉淀部位 , 示生物碱分布 ; v :B 维管束 )
〔W o lr d cS ic cn 。 吧矶己 eT ch no lo邵乃人Jde nr 众at 衍 n of rT ad it io 耐 hC ine 、 。 Me d ic ne an d 肘以 e ir a Me d ic 司 72 9
20 09 第十一卷 第五期 * V o l一 1 N o . 5
图 3 叶片横切
1 浓峭酸处理的叶片横切 x 40 ; 2 .碘化秘钾处理的叶片横切 x 40 ; 3 .碘化秘钾处理的
叶片横切 x l OO
( B
: 浓峭酸处理呈蓝色反应部位 ; R B B : 碘化秘钾处理呈棕红 色沉淀部位 , 示 生物
碱分布 ; V : 叶脉 ; v B : 维管束 )
图4 叶柄横切
1
.浓稍酸处理的 叶柄横切 x 40 ; 2 .碘化秘钾处理的 叶柄横切 x4 0 ; 3 .碘化韧钾处理的
叶柄横切 xl o
( B
: 浓峭酸处理呈蓝 色反应部位 ; B T : 基本组织细胞 ; R B B : 碘化秘钾处理呈棕红色
沉淀部位 , 示生物碱分布 ; v B : 维管束 )
该方法也存在一定缺陷 , 它只能定性地反映药效成
分的积累并粗略估计其含量 , 而且用单一的化学试
剂有时会产生假阳性 , 因此 , 做组织化学定位时往往
要用多种试剂相互验证 。 杜鹃兰药用部位是否合理
在于其所含活性成分 。 研究显示 ,秋水仙碱为其活性
生物碱之一 ! 13] ,笔者正在对该植物各器官的生物碱进
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K ey w o r ds : C er ~
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(责任编辑 : 崔建华 李沙沙 ,责任译审 : 张立咸 )
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