全 文 ：基金项目:贵州省中药现代化科技产业研究开发专项(黔科合中药专字〔2004〕17号)作者简介:毛堂芬(1970-),女,副研究员 ,主要从事药用植物生物技术研究。*通讯作者:刘作易 , E-m ai l:liuzuoyi@ yahoo. com. cn。
栽培与育种
杜鹃兰离体快繁技术研究
毛堂芬 1 ,刘　涛 2 ,刘作易3* ,朱国胜 1, 3 ,黄永会 1, 3
(1.贵州省生物技术研究所 ,贵州贵阳 550006;2.贵州省柑橘科学研究所 ,贵州罗甸 550100;3.贵州省农
业生物技术重点实验室 ,贵州贵阳 550006)
　　摘要　以杜鹃兰的种子和假鳞茎作外植体均诱导获得原球茎及再生植株。原球茎增殖培养基以 B5 +2%白糖
+0. 1%活性炭较好 , 增殖系数可达 6 ～ 10倍;在原球茎继代增殖时分化出完整植株;移栽到全蛭石基质上 , 成活率
可达到 96.67%。
关键词　杜鹃兰;快速繁殖
中图分类号:R282.2　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2007)-09-1057-03
Rap id Propagation ofCrem astra appendiculata in V itro
MAO Tang-fen1 , L IU Tao2 , L IU Zuo-y i3 , ZHU Guo-sheng1, 3 , HUANG Yong-hui1 , 3
(1.Guizhou Bio techno logy Institute, Guiyang 550006, China;2.Gu izhou O range Institu te, Luodian 550100, Ch ina;3.The Key Labo-
ra to ry for Ag ri. Bio techno logy o fGu izhou, Gu iyang 550006, China)
Abstrac t　The pro to co rm s and regenerated plan t we re induced from the seeds and the pseudobu lbs ofCrem astra append icula ta
(D. Don) M akinow ith B5 +2% sugar+0. 1% ac tivated carbon. The coeffic ient o f reproduc tion range s can be achieved 6 to 10. The
optium transp lanta tion medium was verm iculite and the surv iva l rate w as 96. 7%.
K ey words　Crem astra appendicu lata (D. Don) M akino;Rapid propaga tion
　　兰科杜鹃兰 Cremastra append icula ta (D. Don)
M akino又名毛慈姑 、算盘七 ,以干燥假鳞茎作中药
山慈姑 ,主要产于贵州 、四川等地。其根茎含粘液及
葡配甘露聚糖 ,味甘微辛 、性寒 ,有小毒。具有消肿
化痰 、解毒散结等功效 ,主要用于治痈疽疔肿 、瘰疬 、
喉痹肿痛 、淋巴结结核及蛇 、虫 、狂犬伤等症 ,在临床
上亦作抗癌中药配伍使用 。
杜鹃兰主要靠分株繁殖 ,繁殖系数极低 。一般
一个假鳞茎 1年只生长一个新的球茎 ,而一个假鳞
茎种植 2年只能繁殖二株。种子非常细小 ,胚只是
一团细胞 ,在自然条件下很难发育成幼苗 。由于市
场需求较大 ,导致野生资源严重枯竭。本文报道杜
鹃兰快速繁殖技术 ,为组培苗工厂化生产提供技术
参考。
1 　材料与方法
试验用杜鹃兰成熟种子和假鳞茎由贵州信邦制
药公司黔东南药材种植基地提供。
1.1　外植体　(1)在超净工作台上 ,将采集的杜鹃
兰未开裂蒴果用 70%酒精棉球擦拭表面 ,再将蒴果
蘸上 95%酒精 ,在酒精灯上点火燃烧灭菌。用无菌
解剖刀剖开蒴果 ,将细小的种子均匀地撒播在附加
NAA 0.5mg /L的 1 /2M S固体培养基表面 ,置于黑暗
条件培养 ,萌发后采用光照培养 。 (2)选取生长健
壮的假鳞茎 ,先用自来水冲洗附着的泥土 ,晾干装入
无菌三角瓶 ,倒入 70%酒精消毒处理 20 s,再用
0.1%升汞液浸泡 8m in,无菌水清洗 5次 ,每次 2 ～
3m in。用灭菌滤纸吸干水分 ,然后用无菌解剖刀切
取假鳞茎上的芽眼 ,接种于 MS固体培养基。
1.2　原球茎增殖培养　选用 MS、1 /2M S、N 6 、B5、
VW 、KC等 6种培养基 ,另设白糖 、激素及活性炭等
不同浓度试验 。接种的原球茎分别放置光照 12 h /d
和全黑暗条件下培养 。基本培养基均附加 2%白
糖 、0.8%琼脂粉和 0.2%活性炭 , pH5.8。用 1 /100
天平称量原球茎 ,每瓶接种 0.20 g左右 ,每个处理
接种 10瓶 。培养 45 d后 ,去除培养基 ,称取根状原
球茎的重量 ,计算增殖率 。
1.3　再生植株诱导　将增殖得到的根状茎分切成
0.5 ～ 1.0 cm大小 ,接种在 B5固体培养基上培养 。
1.4　炼苗移栽　选用苔藓 、蛭石 、珍珠岩和腐殖土
为炼苗基质 ,按照不同的体积比 ,混合配制成 7种移
栽基质。将选用的基质在太阳光下晒 2 d,然后按不
同比例混合分装于塑料盆内 ,用 500∶1的甲醛溶液
1057 中药材 Journa l o f Chine seM ed icina lM a teria ls　　第 30卷第 9期 2007年 9月
DOI牶牨牥牣牨牫牳牰牫牤j牣issn牨牥牥牨牠牬牬牭牬牣牪牥牥牱牣牥牴牣牥牬牱
喷洒淋透 ,再用塑料膜密封处理 1个月。使用前揭
开塑料膜透气 2 d后 ,装入营养钵 。移栽前将培养
瓶置室温自然条件下炼苗 2 ～ 3 d后揭去封口膜炼
苗 , 2 d后用镊子轻轻夹出瓶苗 ,自来水洗去根部的
培养基 ,用 800倍液的多菌灵消毒 10 m in,清水洗净
后栽入已消毒处理的基质 ,每个营养钵栽种 1株。栽
好后淋透水 ,置温室大棚内。 1星期后结合浇水喷施
营养液。栽种 40 d后统计成活率及生长情况。
1.5 　培养条件　培养温度 (25 ±2)℃,光照时间
12 h /d,光照强度 1 500 ～ 2 000 lx,特别说明除外 。
2 　结果与分析
2.1 　原球茎获得　杜鹃兰种子在黑暗条件下培养
半年后 ,极少数开始萌发形成白色的原球茎 ,初期为
圆球形 ,随后逐渐生长变长;移置光照条件下培养 ,
白色的原球茎开始增殖生长成绿色 ,形成类似桑果
状的凸起 ,呈丛生型原球茎;部分凸起生长较快 ,形
成条状的根状茎 ,其表面长有白色的根毛状物 。从
假鳞茎上切下的芽眼培养 10 d左右开始萌动 ,其上
长出新的球形原球茎 ,表面也长有白色的根毛状物 ,
随着生长 ,颜色逐渐转变成绿色 ,形成根状茎。
2.2 　不同培养基对原球茎增殖的影响　在 6种培
养基上原球茎增殖生长表现出较大差异 (表 1),在
B5培养基上原球茎增殖速度快 ,长势较好 ,形成又
粗又长的根状茎 ,色绿 ,其表面长有许多白色根毛状
物 ,增殖率达 518.18%;其次为 1 /2M S培养基的增
殖速度较快 ,长势亦较好 ,色绿;MS培养基上原球茎
的增殖速度慢 ,长势较差 ,有的色绿 ,有的成白色 ,后
变褐死亡;N 6培养基上原球茎增殖较少 ,有部分死
亡;VW和 KC培养基上的接种材料有的呈水渍状 ,
有的变白变褐 ,绝大多数死亡。
　表 1 　不同培养基对原球茎增殖的影响
培养基 接入原球茎重量(g) 培养后重(g) 增殖率(%) 生长势
M S 0.22 0. 87 295. 45 ++
1 /2MS 0.21 0. 99 371. 43 +++
B
5 0.22 1. 36 518. 18 ++++
N
6 0.21 0. 76 261. 90 +
VW 0.21 0. 54 157. 14 -
KC 0.21 0. 51 142. 86 -
　　注:“ - ”为生长势极差 , “ +”为生长势差 , “ ++”为生长势较
差 , “ +++”为生长势较好 , “ ++++”为生长势最好。下表同
2.3 　白糖浓度对原球茎增殖的影响　从表 2可以
看出 ,培养 45 d后 ,在 B5培养基中添加 2%白糖 ,原
球茎增殖速度快 ,长势最好 ,色绿 ,表面白色根毛状
物多;1%白糖浓度的原球茎增殖最慢 ,生长细弱 ,根
毛状物少。
　表 2 　白糖浓度对原球茎增殖的影响
白糖浓度(%) 接入原球茎重量(g) 培养后重(g) 增殖率(%) 生长势
1. 0 0. 22 0.78 254. 55 +
2. 0 0. 21 1.43 580. 95 ++++
3. 0 0. 22 1.32 500. 00 +++
4. 0 0. 21 1.00 376. 19 ++
2.4　激素对原球茎增殖的影响　激素对杜鹃兰原
球茎增殖茎增殖有较大差别 。单独添加细胞分裂素
6-BA 3.0mg /L时 ,形成的丛生型原球茎较多 ,但有
的生长不正常;附加 NAA 0.5 mg /L的培养基上原
球茎增殖形成的细条状较多 ,顶端及侧端有较多分
化成芽;添加 6-BA 2.0mg /L+NAA 0.5 mg /L,只有
分化趋势;而不加激素(对照 )的原球茎的增殖速度
快 ,生长正常 ,色绿 。
2.5　活性炭浓度对原球茎增殖的影响　图 1显
示 ,在 B5培养基中添加 0.1%活性炭 ,原球茎增殖
速度最快 ,色绿 ,较粗壮 ,增殖率达到 1065.00%,且
有利于形成根状茎直接栽种出苗;附加 0.2%活性
炭 ,原球茎增殖较快 ,多呈丛生型 ,色绿 ,表面长有许
多白色根毛状物 ,适合继代增殖培养;活性炭浓度增
加到 0.8 ～ 1.0%,原球茎增殖生长较差 ,大部分呈
细条状;在没有添加活性炭的培养基上 ,原球茎多变
褐死亡。
图 1　活性炭浓度对原球茎增殖的影响
2.6　pH值对原球茎增殖的影响　pH值为 5.0 ～
6.0时 ,原球茎增殖速度快 (图 2),长势好 ,色绿 ,增
殖倍数达 10倍左右;而 pH 5.0以下和 pH 6.0以
上 ,原球茎增殖速度较慢 ,长势差 ,生长不正常。
图 2　pH值对原球茎增殖的影响
1058 中药材 Journa l o f Chine seM ed icina lM a teria ls　　第 30卷第 9期 2007年 9月
2.7 　光照及培养方式对原球茎增殖的影响　在每
天 12 h的光照培养条件下 ,原球茎增殖速度快 ,长
势好 ,色绿 ,表面有许多白色的根毛;全黑暗条件下
原球茎增殖较少 ,色白 ,多分化成芽。
2.8 　根状茎诱导成苗及生根培养　增殖的根状茎
顶端及侧端分化出芽;芽生长过程中 ,也同步分化生
　表 3 　不同基质对组培苗生长的影响
基质 栽种株数 成活率(%) 生长情况
全蛭石 30 96.67 叶色绿;根 1-5条 , 并长出新的根尖
蛭石 +珍珠岩(1∶1) 30 96.67 叶色绿 , 但较多叶尖萎蔫;根 1-5条 ,并长出新根尖
蛭石 +腐殖土(1∶1) 29 93.10
叶色绿;根 1-5条 , 较多根变黑死亡 ,少数根尖发出新根
蛭石 +苔藓(2∶1) 30 93.33 叶色绿 , 部分叶尖萎蔫;根1-5条 ,部分根生长
蛭石 +腐殖土(1∶1) 30 93.33
叶色绿 , 部分叶尖萎蔫;根
1-5条 , 多数根尖变黑死亡 ,少数长新根
蛭石 +苔藓(2∶1) 30 96.67 叶色绿 , 部分叶尖萎蔫;根1-5条 ,部分根尖伸长
蛭石 +腐植土 +苔藓(1∶1∶1) 29 86.21
叶色绿 , 部分叶尖萎蔫;根
1-5条 , 多数根变黑死亡 ,极少数生长
长。培养约 30 d后 ,芽长成 1.0 cm左右高的小苗 ,
基部陆续长出辐射状小根 ,且长有白色根毛 ,生根率
达 100%。待组培苗根长到 1.0 ～ 2.0 cm时可炼苗
处理 。
2.9　基质种类对组培苗生长的影响　组培苗在不
同混合基质中的生长情况见表 3。在全蛭石基质
中 ,苗生长得最好 ,叶色绿 ,并长出新根 ,成活率达
96.67%;而蛭石 +腐殖土 +苔藓 ,根生长差 ,死亡较
多 ,成活率仅为 86.12%。
3　讨论
杜鹃兰假鳞茎和种子均能诱导获得原球茎 ,但
假鳞茎易采集易诱导。原球茎的增殖是杜鹃兰快速
增殖的关键。在 B5培养基上增殖速度快 ,原球茎又
粗又长 ,且色绿;不加激素的培养基对原球茎的增殖
生长较好 ,色绿 ,对保持原球茎继代扩繁的遗传稳定
性具有重要意义;添加适宜浓度活性炭 ,能明显促进
增殖生长 ,且长势良好。
由原球茎增殖的完整再生植株 ,可直接炼苗移
栽。移栽采用全蛭石基质较好。
(2006 - 12 - 19收稿
2007 - 04 -02修回)
基金项目:陕西省科学技术计划 [ 2004K18-G12(8)] ;陕西省教育厅自然科学专项课题(06 JK199)作者简介:赵银萍(1963-),女,副教授 ,硕士 ,主要从事植物生理及植物组织培养研究, E-mai l:yinping019@163. com , Tel:029-81209922。
杂交景天组织培养和植株再生
赵银萍 ,胡　洁 ,张九东
(西安文理学院生命科学系 ,陕西西安 710065)
　　摘要　以杂交景天子叶 、胚轴为外植体 , 接种在附加不同激素组合的 MS培养基形成的愈伤组织有红 、绿两种
类型。子叶在 MS+6-BA 1 mg /L+2, 4-D 0. 5 m g /L和 MS+6-BA 1m g /L+NAA 0.5 mg /L培养基上的愈伤组织诱
导率高达 80% ～ 82%。愈伤组织用 M S+6-BA 2 mg /L+NAA 0.5 m g /L可诱导产生丛生不定芽 ,壮苗生根培养基
为 1 /2 MS。组培苗移栽成活率达 80%。
关键词　杂交景天;组织培养;快速繁殖
中图分类号:R282.2　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2007)09-1059-03
T issue Culture and Regeneration ofSedum hybridum
ZHAO Yin-ping, HU Jie, ZHANG Jiu-dong
(Department o f L ife Science, Xi’ an Co llege of A rts and Sciences, Xi’ an 710065, China)
Abstrac t　The co ty ledons and hypeco ty l o fS edum hybridum we re used as exp lant to induce ca lluse on MS m edia supp lemented
w ith differen t concentra tion o f ho rm one.The re we re fo rm ed tw o kind of ca lluses, one was red w hile o the rw as g reen.The co ty ledon w as
the idea l exp lant fo r the ca llus induc tion, its induc tion ra te could be reached 80% ～ 82% e ithe r onM Sm edium w ith 6-BA 1mg /L and
2, 4-D 0. 5 mg /L orw ith 6-BA 1mg /L and NAA 0. 5 mg /L.Num erous adventitious buds cou ld fo rm ed from calluses on theMSm edium
1059 中药材 Journa l o f Chine seM ed icina lM a teria ls　　第 30卷第 9期 2007年 9月