全 文 :小叶菝葜不同部位提取物抗炎镇痛活性比较
熊梅,杨敏娟,黄慧莲*,刘科兰,林涛,任刚,刘荣华,邵峰
(江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室,江西 南昌 330004)
摘要:目的 研究比较小叶菝葜不同部位提取物的抗炎、镇痛活性。方法 采用二甲苯致小鼠耳肿胀和蛋清诱发的大鼠足肿
胀实验以及醋酸致小鼠扭体法实验研究抗炎、镇痛药理作用。结果 小叶菝葜乙醇提取的总浸膏、石油醚部位和乙酸乙酯部
位均可降低二甲苯所致的小鼠耳肿胀度和蛋清诱发的大鼠足肿胀,乙酸乙酯部位效果最为显著;总浸膏和乙酸乙酯部位能明
显的减少小鼠的扭体次数。结论 小叶菝葜乙醇总浸膏具有抗炎、镇痛作用,萃取后乙酸乙酯部位的抗炎、镇痛作用最为明
显。
关键词:小叶菝葜;提取物;抗炎作用;镇痛作用
中图号:R285.5 文献标志码:A 文章编号:1672-0482(2013)02-0169-03
Comparision on Analgesic and Anti-inflammatory Actions of the Extracts from Different Parts of Smilax Microphylla
XIONG Mei,YANG Min-juan,HUANG Hui-lian* ,LIU Ke-lan,LIN Tao,REN Gang,LIU Rong-hua,SHAO Feng
(Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine,Key Laboratory of Modern Preparation of Chinese Traditional Med-
icine,Ministry of Education,Nanchang,330004,China)
ABSTRACT:OBJECTIVE To study and compare the analgesic and anti-inflammatory actions of the extracts from different
parts of smilax microphylla.METHODS Experiments,such as mice ear engorgement induced by dimethyl benzene and swel-
ing of feet in rats induced by albumen and twisting response of mice induced by acetic acid method,were performed to study the
pharmacological actions of analgesic and anti-inflammatory.RESULTS Smilax microphyla ethanol extract,petroleum ether
and ethyl acetate extract could reduce mice ear engorgement induced by dimethyl benzene and sweling of feet in rats induced by
albumen,especialy ethyl acetate extract for its significant effects.The ethanol extract and ethyl acetate extract induced the
number of the twisting response of mice obviously.CONCLUSION Smilax microphyla ethanol extract shows anti-inflammato-
ry and analgesic actions and the effect of the extracted ethyl acetate extract is the most significant.
KEY WORDS:smilax microphyla;extracts;anti-inflammatory effect;analgesic effect
小叶菝葜Smilax microphylla C.H.Wrigh
为菝葜科Smilax植物,其根茎又名乌鱼刺、地茯苓
藤,主产于华东及华南各省。该植物在江西省、湖南
省和湖北省境内野生资源丰富,其味甘苦,性平,《全
国中草药汇编》、《江西草药》、《湖南药物志》、《贵州
草药》等均记载有祛风活络,祛痰止咳的功效,临床
主要用于治疗痛风性关节炎、筋骨疼痛、跌打损伤、
腰肌劳损、支气管炎、肺结核等疾患,是一味应用广
泛、效果显著的民间草药。菝葜属中草药普遍具有
抗炎作用,并且治疗关节炎效果显著[1-2]。现代药理
研究表明,口服小叶菝葜提取物可以明显促进高尿
酸血症模型大鼠的尿酸排泄,降低血液中的尿酸水
平[3]。
本实验采用二甲苯致小鼠耳肿胀以及醋酸致小
鼠扭体法为实验模型,对小叶菝葜的抗炎镇痛药理
作用进行研究,为该民间草药的临床应用奠定科学
基础。
1 材料与方法
1.1 试验药物
小叶菝葜根茎由湖南吉首大学张代贵老师于
2009年10月采集并鉴定。取5kg药材用70%的
乙醇回流提取3次,提取液经回收乙醇后干燥得乙
醇总提取物400g。取300g小叶菝葜醇提物,依照
极性差异,采用系统分离法,分为石油醚部位、乙酸
乙酯部位和正丁醇部位。各部位提取物用前将提取
物以1%吐温-80溶液溶解配制药液。阿司匹林(每
片220mg),布洛芬片(哈药集团制药六厂)。
1.2 仪器及试剂
—961—
南京中医药大学学报2013年3月第29卷第2期
JOURNAL OF NANJING UNIVERSITY OF TCM Vol.29 No.2 Mar.2013
收稿日期:2013-01-12;修稿日期:2012-02-18
基金项目:国家自然科学基金(30960494,81160507);江西省青年科学家培养对象(20112BCB23012)
作者简介:熊梅(1989-),女,江西上饶人,江西中医学院2011级硕士研究生。*通信作者:huilianh@gmail.com
DOI:10.14148/j.issn.1672-0482.2013.02.022
打孔器(直径9mm),医用剪刀和镊子;二甲苯
由国 药 集 团 化 学 试 剂 有 限 公 司 提 供 (批 号:
20071018)。足趾容积测量仪(YLS-7B,淮北正华生
物仪器设备有限公司)。
1.3 实验动物
清洁级昆明种小鼠(20±2)g,雌雄各半,由江西
中医学院实验动物中心提供,许可证号:SCXK(赣)
2005-0001。合格证号:JZDW No:2011-0377。
1.4 实验方法[4]
1.4.1 小叶菝葜醇提总浸膏对二甲苯诱发小鼠耳
肿胀的实验
50只小鼠,雌雄各半,随机分为5组(n=15),
空白对照组灌胃等量的1%吐温-80溶液,阳性药物
组(阿司匹林0.2g/kg),小叶菝葜组(高剂量组:6
g/kg生药,中剂量组:3g/kg生药,低剂量组:1.5
g/kg生药)。各组动物每天分别灌胃给药1次,连
续7d,末次给药0.5h后将0.05mL二甲苯均匀涂
抹于小鼠左耳廓两面致炎,以右耳作对照,1h后颈
椎脱臼处死小鼠,沿耳廓剪下两耳,用打孔器(直径
9mm)分别在左右相同部位取下圆耳片,称质量,记
录耳壳质量,计算耳肿胀度和抑制率。计算公式:肿
胀抑制率=(对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀
度)/对照组平均肿胀度×100%。
1.4.2 小叶菝葜不同极性提取物对二甲苯诱发小
鼠耳肿胀的实验
依据醇提物总浸膏的实验结果,选择中剂量为
给药剂量,继续比较不同极性提取物的抗炎效果,筛
选有效部位。将60只小鼠,雌雄各半,随机分为6
组(n=10),空白对照组灌胃等量的1%吐温-80溶
液,阳性药物组(阿司匹林0.2g/kg),小叶菝葜总浸
膏组、石油醚部位组、乙酸乙酯部位组、正丁醇部位
组(给药量均为3g/kg生药)。各组动物每天分别
灌胃给药1次,连续7d。致炎、手术取耳片以及计
算耳肿胀率等方法均参照1.4.1项下所述方法。
1.4.3 小叶菝葜不同极性提取物对蛋清诱发的大
鼠足肿胀的实验
同样选择小叶菝葜中剂量为给药剂量,继续比
较不同极性提取物的抗炎效果,筛选有效部位。60
只大鼠,雌雄各半,随机分为6组(n=10),空白对
照组灌胃等量的1%吐温-80溶液,阳性药物组(阿
司匹林0.16g/kg),小叶菝葜总浸膏组、石油醚部位
组、乙酸乙酯部位组、正丁醇部位组(给药量均为3
g/kg生药)。各组动物每天分别灌胃给药1次,连
续7d。末次灌胃给药1h后,在右后足跖皮下注射
20%蛋清溶液0.10mL致炎。在致炎前和致炎后
1、2、4h分别用足趾容积测量器测量大鼠足容积并
计算足趾肿胀度:肿胀度=(致炎后足容积-致炎前
足容积)/致炎前足容积×100%。各组与空白、阿司
匹林组比较,求t值。结果见表3。
1.4.4 小叶菝葜不同极性提取物对小鼠醋酸扭体
的实验
昆明种小鼠60只随机分为6组,即空白对照
组,布洛芬组,醇提物总浸膏组,石油醚部位组,乙酸
乙酯部位组,正丁醇部位组。按组别连续灌胃7d,
空白组给予等量的1%吐温-80溶液,末次给药30
min后腹腔注射体积分数0.7%的冰醋酸0.01mL/
g,观察记录10min内小鼠的扭体次数,伸展后肢、
腹部内凹和臀抬高,计算镇痛率。
2 结果
2.1 小叶菝葜总浸膏对二甲苯所致小鼠耳肿胀的
影响
表1结果表明小叶菝葜醇提物总浸膏各剂量组
对二甲苯诱发的小鼠耳廓肿胀均有明显的抑制作
用,与空白对照组相比差异性极显著(P<0.01)。
表1 小叶菝葜醇提总浸膏对二甲苯所致小鼠
耳肿胀的影响(珚x±s)
组别 n
剂量/
(g·kg-1)
肿胀度/
mg
肿胀抑制率/
%
空白对照组 10 - 12.3±1.5 -
阿司匹林组 10 0.2 4.7±0.8** 61.4
醇提物低剂量组 10 1.5 8.4±1.2** 31.8
醇提物中剂量组 10 3 6.2±1.5** 49.8
醇提物高剂量组 10 6 6.2±0.8** 49.2
注:与空白对照组比较,**P<0.01。
2.2 小叶菝葜不同提取物对二甲苯所致小鼠耳肿
胀的抗炎作用比较
从表2中可见,小叶菝葜醇提总浸膏组、石油醚
部位组及乙酸乙酯部位组均具有抗炎效果,其中以
乙酸乙酯部位组的抗炎效果最好。正丁醇部位组与
空白对照组相比不具有显著性差异,不能说明它具
有抗炎作用。
2.3 小叶菝葜不同极性提取物对蛋清诱发的大鼠
足肿胀的影响
小叶菝葜醇提总浸膏组、石油醚部位组及乙酸
乙酯部位组均能明显抑制鸡蛋清诱导的大鼠足肿
胀,并以乙酸乙酯部位的抗炎效果最好,结果见表
3。
—071— 南京中医药大学学报2013年3月第29卷第2期
表2 小叶菝葜不同提取部位对二甲苯所致小鼠
耳肿胀的影响(珚x±s)
组别 n
剂量/
(g·kg-1)
肿胀度/
mg
肿胀抑制率/
%
空白对照组 10 - 11.4±1.4 -
阿司匹林组 10 0.2 5.3±1.0** 53.91
总浸膏组 10 3 6.2±1.3** 45.39
石油醚部位组 10 3 7.0±1.3** 38.45
乙酸乙酯部位组 10 3 5.9±0.8** 48.1
正丁醇部位组 10 3 10.7±1.4 6.2
注:与空白对照组比较,*P<0.05,**P<0.01。
2.4 小叶菝葜不同提取物对小鼠醋酸致扭体作用
的比较
与空白对照组相比,布洛芬组和小叶菝葜醇提
物总浸膏以及乙酸乙酯部位均能显著抑制醋酸引起
的小鼠扭体反应,提示小叶菝葜对外周化学性刺激
引起的疼痛具有明显的镇痛作用,结果见表4。
3 讨论
菝葜科中多种植物的抗炎作用已得到现代药理
研究的证实[5],小叶菝葜作为菝葜属植物的一种,民
间主要用于抗痛风性关节炎,显示了其独特的抗炎
特性。
表3 小叶菝葜不同提取部位对蛋清诱发的大鼠足肿胀的影响(珚x±s)
组别 n
剂量/
(g·kg-1)
肿胀度/%
1h 2h 4h
空白对照组 10 - 33.95±6.08 37.59±9.84 37.19±7.18
阿司匹林组 10 0.16 15.45±2.37** 25.26±4.51** 27.35±5.16**
总浸膏组 10 3 29.12±4.26* 30.15±5.64* 32.56±8.19*
石油醚部位组 10 3 28.85±5.83* 30.53±8.57* 34.58±7.07
乙酸乙酯部位组 10 3 22.56±6.54* * 25.07±7.8* * 27.85±9.01*
正丁醇部位组 10 3 32.42±8.2 35.42±9.42 34.55±11.3
注:与空白对照组比较,*P<0.05,**P<0.01。
表4 小叶菝葜不同提取部位对醋酸致小鼠
扭体反应的影响(珚x±s,n=10)
组别 n
剂量/
(g·kg-1)
扭体反应次数
空白对照组 10 29.0±3.1
布洛芬组 10 0.1 8.1±2.1* *
总浸膏组 10 3 16.4±2.1* *
石油醚部位组 10 3 25.6±3.2*
乙酸乙酯部位组 10 3 14.1±1.4* *
正丁醇部位组 10 3 27.5±1.3
注:与空白对照组比较,*P<0.05,**P<0.01。
为了验证其抗炎效果并确定药效物质,本实验
利用二甲苯可快速致炎和蛋清可致大鼠足肿胀的特
点,以耳肿胀度和足肿胀为考察指标,证实了小叶菝
葜的抗炎作用并确证乙酸乙酯部位具有较强的效
果;并通过醋酸致小鼠扭体反应实验,寻找到该中草
药镇痛作用的有效部位为乙酸乙酯层。根据课题组
化学成分分离的研究结果,推测乙酸乙酯部位的中
等极性成分,如黄酮苷类和茋类成分的抗炎镇痛效
果比较显著,而正丁醇部位的成分为大极性的薯蓣
皂苷类成分,这类成分在抗炎镇痛方面效果不显著。
本实验对小叶菝葜抗炎镇痛效果的验证和寻找
药效物质,用药理手段阐释民间用药的理论基础,为
开发利用这一珍贵的野生中草药提供技术支持。在
本实验的基础上,课题组正在研究小叶菝葜对高尿
酸血症模型小鼠尿酸水平的影响,进一步寻找和证
实抗痛风性关节炎药效物质,后续的研究将跟进报
道。
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—171—熊梅,等:小叶菝葜不同部位提取物抗炎镇痛活性比较 第2期