全 文 ：73.53%。见表 3。
表 3　两种方法分离炭疽杆菌比较(n , %)
方　法 标本数 检出数 检出率
常规法 34 16 47.06%
处理法 34 25 73.53%
　　注:χ2 =3.93 , P<0.05
3　讨　论
皮肤炭疽病灶 ,因多种原因常造成严重混合感
染 ,导致炭疽杆菌检出率下降。为了克服病灶局部
的杂菌污染 ,人们主张选用选择性培养基 ,但有的选
择性培养基如丙烷脒与多黏菌素 B 的血细胞培养
基 ,虽能抑制杂菌生长 ,但对炭疽杆菌的生长也有一
定的抑制作用 ,因而又推荐一种含多黏菌素 、溶菌
酶 、乙二胺基四酯酸钠盐(EDTA)、醋酸亚铊的心浸
液琼脂(PLET)选择性培养基 ,能抑制杂菌生长 ,提
高分离阳性率 ,但选择性培养基制备复杂 ,价格昂
贵 ,多有不便。为此 ,我们采用增菌 、除杂菌方法分
离炭疽杆菌。本次研究结果显示 ,采用增菌 、除杂菌
方法分离炭疽杆菌其检出率显著高于常规法 ,可在
实际工作中有推广应用。
参考文献
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出版社 , 1995:196-198.
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贵州野生虎耳草全草中总黄酮含量测定
　　遵义医学院附属医院药剂科(563003)　杨　艳
　　遵义医学院药学院(563003)　徐应淑　李妍妍
　　注:本课题为遵义医学院硕士课题启动基金资助(f-302)
　　中图分类号:R927.2　　文献标识码:B　　文章编号:1000-744X(2010)09-0839-03
　　doi:10.3969/ j.ISSN.1000-744X.2010.09.033
　　虎耳草系虎耳草科植物虎耳草(Saxif raga
Stolonifera M eerb)的全草 ,属多年生草本植物 ,为
常用中草药 ,在山东 、河南 、江苏 、安徽 、浙江 、江西 、
湖南 、湖北 、四川 、云南 、贵州 、广东 、广西 、福建等地
均有分布。我国现有虎耳草属植物 190余种。
在古代的各种医书中记载了虎耳草可用于清
热 ,凉血解毒 ,治风热咳嗽 ,肺痛 ,吐血 ,风火牙痛 ,风
疹瘙痒 ,痛肿丹毒 ,痔疮肿痛 ,毒虫咬伤 ,外伤出血 ,
急性中耳炎 、风热咳嗽等 。现代医药文献中也有虎
耳草的乙酸乙酯提取物对抑制前列腺癌细胞有明显
的作用[ 1] ,虎耳草的乙醇提取物有明显抑菌效果等
报道[ 2] 。虎耳草作为一种常用中草药 ,因其具有较
好 、较广泛的生物活性 ,而被广为研究 。虎耳草中的
化学成分是多种多样的 ,所含的黄酮类化合物更是
具有广泛的生理活性其中槲皮素有降低血管脆性 、
降低血脂 、抗炎 、抗过敏 、抗病毒 、抗自由基 、抗肿
瘤[ 3] 、抗氧化[ 4] 、抗癌[ 5] 等作用。
由于中草药生长环境的不同 ,其药材中含有的
化学成分以及生物活性可能有较大的差异 。目前 ,
对虎耳草中总黄酮含量方面的研究报道很少 。因此
本课题以常用中草药虎耳草为研究对象 ,利用紫外
分光光度法测定其中总黄酮含量 ,为资源的合理应
用 、保护 ,及进一步对该植物开发和研究提供基础 。
1　仪器与试剂
样品野生虎耳草全草购于遵义市王记中药材店
(批号 1:20080914012;批号 2:20081215033);ZWF
三用紫外分析仪(上海兴亚有限公司);RE-52AA 旋
转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);SHB-B95A 循环
水多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司);DZF-2
型真空干燥箱(北京市永光明医疗仪器厂);薄层层
析硅胶(青岛海洋化工有限公司);紫外分光光度计
(T U-1900)。所用试剂:丙酮(AR上海化学试剂总
厂)、石油醚(90-120AR 天津市化学试剂一厂)、三
氯甲烷(AR 成都市科龙化工试剂厂)、乙酸乙酯
(AR重庆九龙化学试剂厂)、甲醇(AR重庆北碚今
精细化工厂), 盐酸(AR 遵义师范学院化学试剂
厂),镁粉(中国江苏如皋市化学试剂厂),试剂用水
·839·贵州医药 2010年 9月第 34 卷第 9 期
均为重蒸水。
2　实验方法
2.1　黄酮的提取　准确称取不同批次的虎耳草全
草各 50 g ,粉碎。将粉碎的虎耳草放置于圆底烧瓶
中 ,分别加入 85%、80%、80%乙醇溶液 300 mL 加
热回流各 2 h 。将提取液合并 ,减压浓缩 ,至乙醇含
量为 40%,静置过夜 ,过滤 ,收集滤液备用 。将滤液
再次浓缩至浸膏 ,用适量水稀释 ,依次用石油醚 、氯
仿 、乙酸乙酯萃取 3 次 ,将乙酸乙酯萃取液减压蒸
干 ,加 60%的乙醇定容至 100 mL 。
2.2　黄酮的定性鉴别　盐酸—镁粉反应:移取一定
量的提取液于试管中 ,加入少量的 Mg 粉 ,再滴入几
滴浓盐酸 ,在水浴上加热 1 ～ 2 min ,显橙红色。三
氯化铝反应:取虎耳草提取溶液点在滤纸上 ,滴加
1%三氯化铝乙醇溶液 ,吹干 。在紫外光下呈一个黄
色荧光斑点。通过上述显色反应 ,表明虎耳草全草
中含有黄酮类化合物。
2.3　对照品溶液的制备　精密称取槲皮素对照品
20 mg ,置于 100 mL 量瓶中 ,加入 60%乙醇溶解 ,定
容于 100 mL。容量瓶中 ,所得浓度均为 200 μg/
mL ,备用。
2.4　测定波长的选择　用紫外分光光度计对槲皮
素对照品溶液和供试品溶液进行 190 ～ 500 nm 范
围的波谱扫描 ,结果见图 1和图 2。从图可看出 ,槲
皮素对照品溶液和供试品溶液在 368 nm 左右都有
一个比较明显且无干扰的独立峰 ,因此 ,将 368 nm
定为总黄酮含量的吸收波长。
2.5　绘制标准曲线　取上述槲皮素对照品溶液为
0.2 , 0.3 , 0.4 ,0.5 , 0.6 , 0.7 mL ,置于 10 mL 量瓶
中 ,加入 60%乙醇溶解 ,定容。在最大波长 370 nm
处 ,利用紫外分光光度法测槲皮素浓度 y 与吸光度
x 的关系 , y =0.057 24x -0.005 27 ,相关系数 r=
0.999 6 。结果表明 ,槲皮素溶液浓度在 0.004 ～
0.014 mg/mL 内 ,浓度 y 与吸光度 x 之间呈良好的
线性关系 。
2.6　精密度实验 　精密吸取对照品溶液 7 mL 置
于 100 mL 容量瓶中 ,用 60%乙醇定容 ,在最大波长
370 nm 处连续进样 6 次测吸光度 ,计算 RSD 为
0.102%,说明此方法的精密度较好 。
2.7　稳定性实验　精密吸取 2.6所得的虎耳草对
照品溶液 15 mL 置于 100 mL 容量瓶中 ,用 60%乙
醇定容 ,分别在 10 , 20 , 30 , 40 , 50 , 60 min 范围内测
吸光度 ,计算 RSD为 0.70%,说明用该方法制备的
总黄酮溶液在 40 min内基本稳定 。
2.8　重现性实验　精密吸取不同批次的供试品溶
液各 5份 ,在最大波长 370 nm 处连续进样 6次测吸
光度 ,计算 RSD%分别为 0.12 、0.098 ,说明样品的
重现性较好。
图 1　槲皮素对照品的波谱扫描
图 2　供试品的波谱扫描
·840· Guizhou Medical Journal , 2010 , Vo l.34 , No.9
2.9　加样回收实验 　精密吸取样品(7.774 μg/
mL)3 mL ,取 3份 ,分别加入 1 ～ 5 mL 的标准溶液
(0.8 μg/mL), 按其结果计算回收率平均值为
102.66%。测定结果见表 1。
表 1　加样回收率测定结果(μg)
测定值 加入量 测得量 回收率(%)
平均回收率
(%)
23.322 0.8 24.652 101.2
23.322 1.6 25.58 102.6
23.322 2.4 26.31 102.2 102.66
23.322 3.2 27.513 103.7
23.322 4.0 28.315 103.6
2.10　样品的含量测定　精密称取粉碎好的虎耳草
全草粉末6份 ,每份 50.0 g ,按 2.1方法制备虎耳草
全草供试品溶液 6 组 ,吸取溶液供试品 15 mL 至
100 mL 容量瓶中 ,用 60%乙醇定容 ,在最大波长
370 nm 处测量吸光度 ,然后根据标准曲线计算出黄
酮含量 ,样品 1中含槲皮素 5.22 mg ,样品 2中含槲
皮素5.20 mg 。见表 2。
表 2　虎耳草全草黄酮含量测定结果
样品批号 编号 浓度(μg/mL) Ab s
平均
含量 RSD(%)
1 7.841 0.447
2 7.841 0.447
20080914012 3 7.841 0.447 7.834 2 0.12
4 7.824 0.446
5 7.824 0.446
1 7.837 0.434
2 7.837 0.434
20081215033 3 7.837 0.431 7.831 4 0.098
4 7.823 0.426
5 7.823 0.425
3　讨　论
3.1　虎耳草中所含的黄酮类化合物极性较大 ,根据
“相似相溶”原理 ,我们选用乙醇作为提取溶剂。
3.2　对虎耳草全草中的黄酮进行定性鉴别 ,采用显
色反应鉴定证实虎耳草全草中含黄酮类化合物 。
3.3　将浓度为 4%和 7%的槲皮素对照品溶液在
250 ～ 500 nm 的范围内进行扫描 ,因都在 370 nm 处
有最大峰且杂质峰出现较少 ,确定它的最大吸收波
长为 370 nm 。
3.4　通过稳定性实验 ,结果表明该方法制备的溶液
在40 min内的 RSD%=0.7 ,在60 min内的 RSD%
=1.16 ,表明测试的时间应控制在 40 min 内。
3.5　通过对虎耳草全草中的黄酮进行含量测定 ,得
到样品中含有黄酮均为 5.2 mg ,可知 ,在贵州遵义
购买的不同批次的虎耳草其总黄酮含量并无太大区
别 ,质量较稳定 。
3.6　从稳定性 、重现性实验结果可知采用可见分光
光度法测定虎耳草全草中的总黄酮含量其稳定性 、
重现性良好 ,得到的加样平均回收率值为102.66%。
本次课题以贵州不同采集时期的虎耳草为样
品 ,槲皮素为对照品 ,利用紫外分光光度进行了总黄
酮的含量测定 ,经证实该方法其稳定性 、重现性良
好 ,简便 、可行。为虎耳草全草的质量控制提供了新
的评价指标。为资源的合理应用 、保护 ,为进一步对
该植物开发和研究提供理论基础。
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·841·贵州医药 2010年 9月第 34 卷第 9 期