全 文 ：［收稿日期］ 20110925(003)
［基金项目］ 贵阳市科技计划现代计划药业项目(筑科农合同
［2011201］大-3 号) ;贵阳市科技计划中药现代化
项目( ［2010］筑科合同字第 1-中 ～ 12 号)
［第一作者］ 徐昌艳，在读研究生，从事中药、民族药质量控制
及新药研究;Tel:15185098840，E-mail:happyxchy
@ 126． com
［通讯作者］ * 张丽艳，教授，从事中药、民族药质量控制及新
药研 究，Tel:13984870641，E-mail:zly1964 @
163． com
黔产苗药虎耳草的 HPLC指纹图谱研究
徐昌艳，张丽艳* ，李燕，余欣洋，杨玉琴，李健
(贵阳中医学院，贵阳 550002)
［摘要］ 目的:研究黔产苗药虎耳草的 HPLC 指纹图谱。方法:采用 HPLC 法，DiamonsiL C18柱(4. 6 mm × 250 mm，5
μm) ，甲醇-0. 1%磷酸水梯度洗脱，流速为 1. 0 mL·min －1，柱温 35 ℃，检测波长为 250 nm。结果:确定了 12 批黔产虎耳草的指
纹图谱共有模式，进行了相似度比较，不同产地虎耳草的主成分组成基本相同，但各组分的含量有较大的差异。结论:所建立
的方法可用于黔产虎耳草指纹图谱测定，并可对其今后规范药用资源及质量评价提供科学依据。
［关键词］ 苗药;虎耳草;高效液相色谱;指纹图谱
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2012)15-0073-04
Study on HPLC Fingerprint of the Miao Medicine
Saxifraga stolonifera from Guizhou
XU Chang-yan，ZHANG Li-yan* ，LI Yan，YU Xin-yang，YANG Yu-qin，LI Jian
(Guiyang College of Chinese Traditional Medicine，Guiyang 550002，China)
［Abstract］ Objective:To study the HPLC fingerprint of Saxifraga stolonifera from Guizhou． Method:
HPLC analysis was performed on a DiamonsiL C18 column (4. 6 mm × 250 mm，5 μm)with the gradient eluting
system consisted of methanol and 0. 1%H3PO4 ． The flow rate was 1. 0 mL·min
－1 ． The column temperature was
maintained at 35 ℃ and the detection wavelength was at 250 nm． Result:There were twelve characteristic peaks
indicated in fingerprints． The main composition of different origin S． stolonifera is basically the same． But there is
a large difference between each content of components． Conclusion:This method can be used to determine
fingerprint of S． stolonifera in different origin from Guizhou． And it helps to regulate the quality of medical
resources and provide scientific basis in the future．
［Key words］ Miao medicine;Saxifraga stolonifera;HPLC;fingerprint
虎耳草为虎耳草科植物虎耳草的全草，苗族称
“Vob bix seib”(汉语近似译音为“窝比省”) ，始见
于《履巉岩本草》，现收载于《贵州省中药材、民族药
质量标准》(2003 年版)［1］。其性寒，味辛、苦，具有
疏风、清热、解毒等功效，常用于风热咳嗽等。其含
岩白菜素、槲皮素、没食子酸、槲皮苷、原儿茶酸、琥
珀酸、儿茶酸、绿原酸、槲皮素-5-O-葡萄糖苷、去甲
岩白菜素等成分［2］，主要分布于华东、中南、西南南
部各省区以及河南和陕西的部分地区［3］。目前，虎
耳草是“咳速停胶囊”、“胆炎康胶囊”和“咳平胶
囊”等贵州省著名制剂的主要原料药材，而其质量
控制研究仅以岩白菜素、槲皮苷、原儿茶酸、没食子
酸、丹皮酚等成分进行含量测定［4-8］，并未见其
HPLC 指纹图谱研究的相关报道。本实验采用
HPLC梯度洗脱法构建贵州地区不同来源虎耳草药
材的指纹图谱，对 12 批样品进行了相似度评价，旨
在为今后规范药材资源及质量评价提供科学依据。
1 材料
1. 1 仪器 Agilent 1100 型高效液相色谱仪，包括
·37·
第 18 卷第 15 期
2012 年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 15
Aug．，2012
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2012.15.005
DAD 检测器，Agilent Chemstation 色谱工作站;
AG135 型电子天平(梅特勒-托利多公司) ，CH-250
型超声波清洗机(天津恒奥科技公司，功率 250 W，
频率 33 kHz) ，HH-4 型数显恒温水浴锅(常州澳华
仪器有限公司)。
1. 2 试药 岩白菜素(批号 111532-200202)、没食
子酸(批号 110831-200302)、绿原酸(批号 0753-
200111)、延胡索乙素(批号 0726-200107)、槲皮苷
对照品(批号 111538-200403)均由中国药品生物制
品检定所提供，供含量测定用。实验用水为娃哈哈
纯净水，甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯。12 批
虎耳草药材自采于贵州各地，经贵阳中医学院魏升
华副教授鉴定为虎耳草科植物虎耳草 Saxifraga
stolonifera Curt． 的全草。样品来源详见表 1。
表 1 虎耳草药材来源
No． 来源 No． 来源
S1 贵州贵阳花溪 S7 贵州黔东南红阳寨
S2 贵州凯里炉山 S8 贵州清镇
S3 贵州凯里湾水 S9 贵州台江县施洞
S4 贵州铜仁松桃 S10 贵州施秉黑冲
S5 贵州黔南龙里 S11 贵州赤水
S6 贵州毕节亮岩 S12 贵州安顺鸡场
2 方法与结果
2. 1 对照品溶液的制备 分别精密称取干燥至恒
重的岩白菜素、没食子酸、绿原酸、延胡索乙素、槲皮
苷对照品适量，分别加甲醇制成0. 100 7，0. 029 2，
0. 647 1，0. 100 2，0. 100 5 g·L －1的对照品溶液。
2. 2 供试品溶液的制备 取干燥至恒重的样品粉
末(过 60 目筛)约 1. 0 g，精密称定，置 100 mL 具塞
锥形瓶中，加 25%甲醇 25 mL，称重，加热回流 1 h，
放冷，称重，补足减失的质量，滤过，取续滤液适量，
以 0. 45 μm微孔滤膜滤过，即得。
2. 3 色谱条件 DiamonsiL C18色谱柱(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm) ，以甲醇(A)-0. 1%磷酸(B)为流动
相梯度洗脱(0 ～ 90 min，5% ～ 55% A) ，流速 1. 0
mL·min －1，柱温 35 ℃，进样量 20 μL，检测波长
250 nm。
2. 4 方法学考察
2. 4. 1 精密度试验 取同一份虎耳草药材供试品
溶液，按 2. 3 项下色谱条件进行测定，连续进样 6
次，以岩白菜素为参照峰，计算相对保留时间及相对
峰面积，各共有峰相对保留时间的 RSD为 0. 03% ～
0. 09%，相对峰面积的 RSD为 0. 25% ～1. 1%，表明
仪器的精密度良好。
2. 4. 2 重复性试验 分别取 1 号样品 6 份，按 2. 2
项下方法制备供试品溶液，按 2. 3 项下色谱条件进
行测定，以岩白菜素为参照峰，计算相对保留时间及
相对峰面积，各共有峰相对保留时间的 RSD 为
0. 53% ～ 1. 1%，相对峰面积的 RSD 为 0. 50% ～
1. 8%，表明该方法的重复性良好。
2. 4. 3 稳定性试验 取同一份供试品溶液，分别于
0，3，6，9，12，24 h 进行测定，以岩白菜素为参照峰，
计算相对保留时间及相对峰面积，各共有峰相对保
留时间的 RSD 为 0. 04% ～ 0. 10%，相对峰面积的
RSD为 0. 57% ～ 2. 0%，表明供试品溶液在 24 h 内
稳定。
2. 5 结果
2. 5. 1 虎耳草样品 HPLC 指纹图谱测定 分别将
12 批虎耳草样品按 2. 2 项下方法制备供试品溶液，
在 2. 3 项下色谱条件测定，记录 HPLC 图。比较不
同来源样品的色谱图，其中 18 个峰为 12 批样品的
共有指纹峰。通过对照品试验，考察对照品保留时
间，鉴别了虎耳草药材 HPLC 指纹图谱中的没食子
酸、岩白菜素、绿原酸、延胡索乙素、槲皮苷等 5 个成
分。其中 9 号峰为岩白菜素峰，选作参照峰，设其保
留时间和峰面积分别为 1，其他各共有峰的保留时
间及峰面积分别与参照峰的相比，计算各样品指纹
图谱中共有峰的相对保留时间及相对峰面积，结果
见图 1，2，表 2，3。
4. 没食子酸;9. 岩白菜素;10. 绿原酸;
13. 延胡索乙素;14. 槲皮苷
图 1 虎耳草药材的共有模式
图 2 12 批虎耳草样品 HPLC指纹图谱
2. 5. 2 相似度计算 运用国家药典委员会推荐的
中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A 版)对
12 批虎耳草药材的指纹图谱进行相似度分析，通过
中位数矢量计算得出虎耳草样品指纹图谱的共有模
式，进行整体相似度评价，12 批黔产不同产地虎耳
草药材的相似度分别为 S1 (0. 932) ，S2 (0. 909) ，
S3 (0. 952) ，S4 (0. 953) ，S5 (0. 906) ，S6 (0. 908) ，
·47·
第 18 卷第 15 期
2012 年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 15
Aug．，2012
表 2 12 批虎耳草药材的相对保留时间
峰号
样品号
S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12
RSD
/%
1 0. 202 0. 202 0. 202 0. 202 0. 203 0. 201 0. 200 0. 202 0. 204 0. 200 0. 199 0. 200 0. 716
2 0. 235 0. 234 0. 231 0. 231 0. 235 0. 234 0. 235 0. 235 0. 234 0. 233 0. 230 0. 231 0. 814
3 0. 288 0. 288 0. 288 0. 288 0. 289 0. 289 0. 290 0. 287 0. 290 0. 290 0. 287 0. 288 0. 376
4 0. 383 0. 382 0. 382 0. 382 0. 382 0. 383 0. 382 0. 382 0. 385 0. 386 0. 383 0. 384 0. 352
5 0. 430 0. 430 0. 430 0. 429 0. 430 0. 430 0. 435 0. 430 0. 433 0. 434 0. 433 0. 431 0. 455
6 0. 587 0. 587 0. 590 0. 594 0. 588 0. 592 0. 590 0. 593 0. 587 0. 596 0. 591 0. 593 0. 512
7 0. 619 0. 613 0. 623 0. 617 0. 620 0. 618 0. 619 0. 618 0. 618 0. 618 0. 626 0. 616 0. 530
8 0. 661 0. 662 0. 665 0. 649 0. 659 0. 661 0. 665 0. 656 0. 652 0. 666 0. 651 0. 657 0. 872
9* 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0
10 1. 216 1. 216 1. 215 1. 215 1. 215 1. 209 1. 209 1. 210 1. 218 1. 225 1. 221 1. 225 0. 449
11 1. 354 1. 354 1. 354 1. 354 1. 353 1. 354 1. 359 1. 358 1. 359 1. 361 1. 349 1. 354 0. 246
12 1. 577 1. 554 1. 557 1. 553 1. 553 1. 558 1. 553 1. 556 1. 562 1. 564 1. 561 1. 560 0. 437
13 1. 627 1. 622 1. 622 1. 622 1. 621 1. 626 1. 627 1. 623 1. 630 1. 637 1. 623 1. 628 0. 283
14 1. 706 1. 705 1. 705 1. 705 1. 704 1. 711 1. 706 1. 705 1. 713 1. 716 1. 705 1. 714 0. 252
15 2. 007 2. 005 2. 006 2. 005 2. 004 2. 010 2. 009 2. 001 2. 016 2. 017 2. 012 2. 018 0. 276
16 2. 046 2. 044 2. 044 2. 044 2. 042 2. 048 2. 048 2. 043 2. 052 2. 060 2. 048 2. 054 0. 259
17 2. 460 2. 457 2. 455 2. 457 2. 455 2. 460 2. 458 2. 453 2. 463 2. 472 2. 460 2. 469 0. 231
18 2. 721 2. 718 2. 717 2. 718 2. 717 2. 721 2. 720 2. 714 2. 725 2. 735 2. 722 2. 731 0. 224
表 3 12 批虎耳草药材的相对峰面积
峰号
样品号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
RSD
/%
1 0. 255 0. 423 0. 263 0. 262 0. 424 0. 350 0. 334 0. 348 0. 356 0. 349 0. 323 0. 333 16. 537
2 0. 148 0. 126 0. 146 0. 147 0. 126 0. 089 0. 091 0. 089 0. 089 0. 090 0. 088 0. 090 23. 899
3 0. 020 0. 019 0. 019 0. 021 0. 019 0. 017 0. 018 0. 019 0. 017 0. 018 0. 020 0. 020 6. 560 8
4 0. 316 0. 336 0. 316 0. 316 0. 335 0. 365 0. 363 0. 367 0. 361 0. 361 0. 365 0. 365 6. 242 8
5 0. 189 0. 341 0. 184 0. 186 0. 344 0. 317 0. 313 0. 310 0. 317 0. 316 0. 309 0. 308 21. 420
6 0. 086 0. 050 0. 083 0. 082 0. 050 0. 038 0. 037 0. 037 0. 036 0. 037 0. 037 0. 037 40. 192
7 0. 231 0. 158 0. 233 0. 232 0. 158 0. 166 0. 164 0. 165 0. 164 0. 164 0. 166 0. 168 17. 173
8 0. 184 0. 237 0. 175 0. 175 0. 235 0. 212 0. 211 0. 213 0. 211 0. 210 0. 210 0. 212 9. 653 8
9* 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0
10 1. 182 0. 837 1. 169 1. 158 0. 820 1. 228 1. 243 1. 214 1. 243 1. 236 1. 228 1. 226 13. 255
11 0. 097 0. 108 0. 114 0. 116 0. 123 0. 067 0. 121 0. 112 0. 071 0. 064 0. 107 0. 107 21. 105
12 0. 171 0. 180 0. 175 0. 173 0. 180 0. 171 0. 173 0. 174 0. 170 0. 172 0. 171 0. 170 2. 004
13 0. 287 0. 272 0. 342 0. 332 0. 160 0. 217 0. 217 0. 331 0. 311 0. 309 0. 229 0. 214 22. 113
14 0. 101 0. 159 0. 115 0. 112 0. 126 0. 157 0. 154 0. 176 0. 159 0. 175 0. 161 0. 150 17. 402
15 0. 463 0. 315 0. 457 0. 454 0. 312 0. 806 0. 806 0. 805 0. 803 0. 804 0. 802 0. 805 33. 579
16 0. 500 0. 752 0. 474 0. 465 0. 724 0. 963 0. 887 0. 945 0. 975 0. 976 0. 823 0. 872 25. 478
17 1. 176 0. 717 1. 156 1. 153 0. 713 1. 174 1. 168 1. 166 1. 168 1. 174 1. 108 1. 110 15. 984
18 0. 164 0. 097 0. 165 0. 166 0. 099 0. 086 0. 086 0. 086 0. 080 0. 082 0. 085 0. 084 33. 371
S7 (0. 920) ，S8 (0. 911) ，S9 (0. 906) ，S10
(0. 905) ，S11 (0. 963) ，S12 (0. 962)。
3 讨论
比较 25% 甲醇，25% 乙醇，50% 乙醇，75% 乙
醇，95%乙醇等提取溶剂，25%甲醇分别加热回流、
超声提取，及加热回流 0. 5，1，1. 5，2 h 的提取效果，
结果以 25%甲醇加热回流 1 h 效果较好，包含了其
水溶性成分及脂溶性成分，色谱峰较多，能整体反映
虎耳草的化学信息。
对供试品进行 190 ～ 400 nm 三维图谱扫描，
并对 240，245，250，255，370 nm 等波长进行了比
较，结果在 250 nm 检测波长时峰数最多且响
·57·
徐昌艳，等:黔产苗药虎耳草的 HPLC指纹图谱研究
檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
应灵敏度高，故选用 250 nm 作为检测波长。
在色谱条件优化时，分别比较了甲醇-水，乙
腈-水，甲醇-0. 1% 冰醋酸水溶液，甲醇-0. 1% 磷
酸水溶液 4 种流动相，考察了 25，30，35 ℃柱温
及流速为 0. 8，1. 0，1. 2 mL·min － 1，结果以甲醇-
0. 1%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱，柱温 35
℃，流速 1. 0 mL·min － 1，检测波长 250 nm 时色谱
峰较多且达到基线分离，峰型对称，分离较好，保
留时间适中。
12 批虎耳草样品的相似度均 ＞ 0. 90，说明各地
区的样品化学成分一致性较好，所得出的指纹图谱
共有模式具有代表性，可以反映贵州虎耳草药材的
指纹特征。但 18 个共有峰的峰面积差异较大，初步
说明贵州不同产地的虎耳草主成分基本相同，但组
分含量的差异较大;虎耳草药材的质量受地理环境
和气候条件影响较大，因此固定的产地来源对保障
虎耳草药材质量的稳定性极为重要，同时也为今后
研究虎耳草环境因子与药材质量相关性提供了一定
的参考基础。
［参考文献］
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术出版社，1997:1335．
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草中丹皮酚的含量［J］． 天然产物研究与开发，2009
(21) :428. ［责任编辑 顾雪竹］
［收稿日期］ 20111219(003)
［基金项目］ 国家科技富民强县专项行动计划试点县及科技项目 (国科发农〔2008〕471 号)
［第一作者］ 林海霞，硕士，从事生药学研究和中草药资源开发利用工作，Tel:13890625706，E-mail:153327789@ qq． com
［通讯作者］ * 王书林，教授、博士生导师，从事中药品种、质量研究，Tel:13508142598，E-mail:wslgap@ tom． com
HPLC测定竹叶柴胡中黄酮类成分的含量
林海霞1，王书林2* ，王砚1，孙翠萍1
(1．成都中医药大学， 成都 610075;2．成都中医药大学峨眉学院，四川 峨眉山 614201)
［摘要］ 目的:建立竹叶柴胡中黄酮类成分(芦丁、槲皮素、山奈素和异鼠李素)HPLC的含量测定方法，为该药材的开发
利用提供科学依据。方法:采用 C18柱，流动相为甲醇(A)-0. 1%磷酸(B)梯度洗脱，流速 0. 8 mL·min
－1，检测波长 360 nm，柱
温 35 ℃，进样体积 10 μL。结果:芦丁在 667. 8 ～ 33 390 ng(r = 0. 999 8) ，槲皮素在 216. 0 ～ 10 798. 4 ng(r = 0. 999 9) ，山奈素
在 27. 5 ～ 1 372. 8 ng(r = 0. 999 9) ，异鼠李素在 130. 6 ～ 6 528. 0 ng(r = 0. 999 8)线性关系良好，平均加样回收率分别为
100. 3%(RSD 0. 78%) ，94. 5%(RSD 1. 13%) ，94. 5%(RSD 1. 15%) ，94. 1% (RSD 1. 09%)。结论:该法在同一色谱系统中同
时测定芦丁、槲皮素、山奈素和异鼠李素的含量，操作简便、准确性高、重复性好，用于竹叶柴胡药材的质量评价。
［关键词］ 竹叶柴胡;黄酮;高效液相色谱法
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2012)15-0076-04
Determination of Flavonoid of Bupleurum marginatum by HPLC
LIN Hai-xia1，WANG Shu-lin2* ，WANG Yan1，SUN Cui-ping1
(1. Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Chengdu 610075，China;
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第 18 卷第 15 期
2012 年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 15
Aug．，2012