全 文 ：第 29卷第 3期 总 162期 2009年 5月 25日出版
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状相关，同 IGF-Ⅰ相似，其在家禽的正常生长发育中发挥重要的
调控作用，其作用或可单独发挥，但更可能与生长激素紧密联系，
共同发挥表明该基因可能调控鸡生长、屠体性状的表达，或与控
制生长、屠体性状的主基因连锁[7]。
近年来 IGF-Ⅱ基因研究逐渐增多，并作为一个重要的生长
侯选基因来研究。老鼠、牛、猪、鸡等物种的胰岛素样生长因子基
因的序列都已经被克隆，并对其作用机理以及其多态性和变异与
生产性能的相关性作了进一步的研究分析。对老鼠、牛、猪、鸡等
动物大量研究表明，IGF-Ⅱ对生长有重要的作用。本试验虽然检
测出家鸽 IGF-Ⅱ基因的多态性，但发现 IGF-Ⅱ基因在试验群体
不同个体间的多态性与生长性状无相关性，认为可能由于检测群
体数目不足所造成。因此，IGF-Ⅱ基因与家鸽生长性状是否存在
相关性，还需要我们进一步的研究。
参考文献：
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高效液相色谱法测定山莓叶中齐墩果酸含量
董振生 * ，李孝文，李 丹，伍应松 ，程天印 **
(湖南农业大学，湖南 长沙 410128)
山莓(Rubus corchorifolius L. f)又名三月泡、悬钩子、龙船泡、牛
奶泡、树莓、泡儿刺，系蔷薇科(Rosaceae)蔷薇亚科悬钩子属(Rubus,
L)中的一种落叶灌木。广泛分布在我国除东北、内蒙古、新疆、西
藏外的其他各省、市、自治区，在海拔 300～1500 m的向阳山坡、
溪边、山谷、荒地和灌木丛中大量生长。
山莓叶性微苦，具有清热利咽、解毒、消肿、敛疮等作用，主治
咽喉肿痛、多发性脓肿、乳腺炎、湿疹、黄水疮等症。在湖南湘西
地区，群众常将嫩叶捣碎饲喂动物治疗腹泻。据资料报道，山莓
叶含黄酮类、香豆素、茶多酚等药。高效液相色谱法(HPLC)测定各
种三萜类化合物，如齐墩果酸、熊果酸、木栓酮等，近年来得到较
广泛的应用。本实验建立的 HPLC法测定山莓中齐墩果酸含量的
方法简便、灵敏、准确、重现性好,能够满足含量测定的需求。
1 实验材料
1.1 主要仪器
小型粉碎机(河北科仪)，HH- 501超级恒温水浴锅(上海浦东
物理光学仪器厂)，KQ- 300型超声波清洗器 (昆山市超声仪器有
限公司 )，低 温 烘 箱 ，瑞 士 Startorius 精 密 电 子 天 平 ，
ShimadzuUV- 2550 型紫外分光光度计，EV- 201 旋转蒸发仪
(LabTech)，LC- 10ATPV高效液相色谱仪(日本岛津)，超纯水机(重
庆艾科普)
1.2原料与试剂
原料：山莓叶，07年 5月采于吉首农校后山。
鉴定人姓名：程天印，职务：教授、硕士生导师，单位：湖南农业大
学动物医学院。
药品：乙腈(色谱纯)、甲醇(色谱纯)、超纯水、甲醇(分析纯)、
95 %乙醇、齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检定所)。
2 方法
2.1 色谱条件
色谱柱：betasil C18 (150×4.6 mm)，流动相：乙腈 - 水(95- 5)，
检测波长 210 nm，灵敏度：1.000 AUFS，柱温：35 ℃，进样量
10μL。此条件下色谱图见图 1。
2.2 对照品溶液配置
精密称取齐墩果酸对照品 15 mg，于容量瓶中用色谱甲纯定容
到 150 mL,齐墩果酸的浓度为 0.1 mg/mL。
2.3 供试样品预处理
精密称取山莓叶粗粉 2g，置于 50 mL容量瓶中，用甲醇 30
mL超声提取 20 min，过滤，滤渣用甲醇 30 mL超声提取 10 min，过
滤，合并两次滤液，残渣用少量甲醇洗涤，洗涤液并于滤液，用甲
醇定容至 100 mL备用。样品进样前以 0.45μm滤膜滤过。
摘 要：【目的】建立测定山莓叶中齐墩果酸含量的HPLC方法。【方法】采用C18柱(250×4.6mm),流动相为乙腈 - 水(95- 5)，检测波长为 210
nm，灵敏度为 1.000AUFS，柱温为 35℃，流速为 0.5mL/min，进样量 10μL。【结果】齐墩果酸对照品进样量在 0～2μg范围内与峰面积线性关
系良好，r=0.9996,平均回收率为 99.52%，RSD=2.64%(n=6)。【结论】HPLC法可用于山莓叶中齐墩果酸含量的测定，方法准确、灵敏、可靠。
关键词：高效液相色谱法；苗药；山莓；齐墩果酸；含量测定
*作者简介：董振生（1982-），男，山东临朐人，在读硕士，研究方向：中
兽药研发。邮箱：3150436@163.com。
**通讯作者:程天印（1964-），男，教授，硕士生导师。
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第 29卷第 3期 总 162期 2009年 5月 25日出版
3 结果与分析
3.1 标准曲线绘制
精密吸取 2.2中对照品溶液 5、10、15、20μL，进样检测，以
峰面积为横坐标，进样量为纵坐标作标准曲线(图 2)。得回归方程
为 y=6×10- 5x- 0.0227,相关系数 R=0.9994。实验表明，齐墩果酸对
照品溶液浓度在 0～0.02mg/mL范围内，线性关系良好。
3.2 精密度实验
2.2中对照品溶液重复进样 5次，每次进样 10μL,得齐墩果酸平
均峰面积为 155397(mv·s)，相对标准偏差(RSD)=0.61%，说明使用的仪
器性能良好，随机误差小，所采用的色谱分析方法适宜，结果峰面积分
别为 156941、154468、155547、154863、155168(mv·s)RSD为 0.61%。
3.3 重现性实验
2.3中供试样品 5份，在 2.1色谱条件下进行测定，根据测得的
峰面积，计算齐墩果酸的 RSD为 1.26 %，说明此方法对山莓叶中
齐墩果酸的检测，具有很好的重现性。结果峰面积分别为 58192、
56277、57391、57854、57371(mv·s)，RSD为 1.26 %。
3.4 稳定性实验
取 2.3中供试样品，室温放置 1、2、4、6、8 h后，分别进行测
定，供试样品在 8 h内没有明显变化，齐墩果酸峰面积 RSD为
1.51 %，说明供试样品溶液在 8 h内稳定，结果峰面积分别为
56036、55249、57193、56618、57297(mv·s)，RSD为 1.51 %。
3.5 加样回收率实验
精密吸取已知含量(0.1875 mg/g)的样品溶液 6份，分别加入
对照品溶液(0.1 mg/mL)1 mL，按照 2.1条件测定峰面积，计算回收
率，如表 1所示。
结果表明本方法对样品的定量分析结果准确度高。
3.6 样品测定
表 1 回收率实验结果
样品量
(mg)
0.0375
0.0375
0.0375
0.0375
0.0375
0.0375
加入量
(mg)
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
测得量
(mg)
0.1382
0.1388
0.137
0.1364
0.1358
0.1369
回收率
(% )
100.51
100.95
99.64
99.2
98.76
99.56
平均回收率
(% )
99.77
RSD(% )
0.82
取山莓叶样品 3批，精密称取 2 g，依 2.3方法处理制备供试
样品溶液，取供试样品及对照品 10μL进样，按照峰面积计算山
莓叶中齐墩果酸的含量，结果测得样品含量为 0.187 mg/g。
4 讨论
4.1 检测波长的确定
取一定量的齐墩果酸标准品用无水乙醇溶解，以无水乙醇作
空白，紫外分光光度计进行扫描。检测结果紫外光区有吸收，最大吸
收波长为 205.7 nm，结合文献资料[10]，选择 210 nm为检测波长。
4.2 流速的选择
采用 betasil C18 (150×4.6 mm) 色谱柱，流动相：乙腈 - 水
(95- 5)，检测波长 210 nm，灵敏度：1.000 AUFS，柱温：35℃，进样量
10μL, 选择进样量分别为 0.3、0.5、0.7、1.0 mL/min. 检测结果 0.5
mL/min时，峰形良好，杂峰少，故选择 0.5 mL/min为本实验流速。
4.3 结论
采用薄层扫描测定山莓中齐墩果酸含量，样品须经过大孔吸
附树脂洗脱，处理程序较复杂，且结果的重现性较差。经过对山莓
样品处理方法和 HPLC条件进行试验，发现用 HPLC法测定山莓
中齐墩果酸含量时，样品处理方法简单，易操作，重现性及稳定性
好，可以用于山莓质量控制。
参考文献：
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