全 文 ：2014 年 8 月第 16 卷第 4 期
August 2014，Vol. 16，No. 4
湖北中医药大学学报
Journal of Hubei University of Chinese Medicine
基金项目:湖北中医药大学科研基金(20080012)。
作者简介:干国平(1965 － )男，湖北中医药大学教授，研究方向:中药药效物质基础及创新药物研究。
菝葜中 α －葡萄糖苷酶抑制活性成分的筛选
干国平，袁杰，钱凯
(湖北中医药大学，湖北 武汉 430065)
摘要:目的 探讨菝葜中对 α －葡萄糖苷酶抑制作用的活性成分。方法 在生物活性示踪下，对菝葜提取物进行
色谱分离。结果 从菝葜中筛选出 8 个酚类化合物对 a －葡萄糖苷酶具有明显抑制作用。结论 酚类化合物可能是
菝葜降血糖作用的主要成分。
关键词:菝葜;α －葡萄糖苷酶;活性成分;筛选
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A doi:10. 3969 / j. issn. 1008 － 987x. 2014. 04. 15
Sereening of α － Glycosidase Inhibitory Active
Constituents from Ｒhizome of Smilax China
GAN Guoping，YUAN Jie，QIAN Kai
(Hubei University of Chinese Medicine，Wuhan 430065)
Abstracts:Objective To explore the active composition of α － glycosidase’s inhibiting effect from the rhizome of Smilax china(ＲSC)．
Methods In organisms active spiking，to separate the extractive of ＲSC by chromatography． Ｒesult 8 phenols compounds screened from
the ＲSC have an obvious inhibiting effect on α － glycosidase． Conclusion Phenols compound may be the primary bases which has the faction
of reducing blood sugar in the ＲSC．
Key words:Ｒhizome of Smilax china;α － Glycosidase;active constituents;screen
菝葜为百合科植物菝葜 Smilax China L． 的干燥根茎［1］，临
床主要用于治疗妇科炎症、糖尿病和肿瘤，主要含有黄酮、皂苷
和鞣质等类型成分［2 － 4］。据《本草纲目》记载，菝葜有治疗消渴
症之功效。近年来的研究表明菝葜具有降血糖作用，并从中分
离得到一些活性化合物［5 － 6］。本研究在生物活性示踪下，对菝
葜中 α －葡萄糖苷酶抑制活性成分进行了筛选，为阐明其降血
糖作用和进一步开发利用奠定基础。
1 材料与方法
1． 1 主要仪器
酶标仪 (日本 Nippon InterMediate 公司生产)，恒温培养箱
(上海慧泰仪器制造有限公司生产)，96 －孔板 (丹麦 NUNC 公
司生产)。
1． 2 药物与试剂
菝葜药材(由湖北福人药业有限公司提供，产地湖南，经湖
北中医药大学吴和珍教授鉴定为 Smilax china L．)，α － D －葡萄
糖苷酶(AGH －211，日本 Nacalai tesque 公司提供)，4 －硝基苯
－ α － D －吡喃葡萄糖苷(PNPG，东京化工有限公司)，阿卡波糖
(大连美仑生物技术公司提供)，其余试剂均为分析纯。
1． 3 提取和分离
取菝葜饮片 5kg，用 8 倍量的 75%乙醇加热回流提取 2 次
(2min、1min)，合并提取液，减压浓缩，得乙醇提取物(提取物
A);提取物 A加入 4%明胶溶液，搅拌，静置过夜，滤过，滤液通
过 D101 大孔树脂吸附，依次用水、60%乙醇洗脱，洗脱液经浓
缩干燥，得水部位(提取物 B1)、乙醇部位(提取物 B2)。在活性
示踪下，采用 ODS层析柱对提取物 B2 进行分离，依次用 10% －
80%甲醇洗脱，分部收集，浓缩，得到 8 个流份 (C1 － C8)，其中
流份 C3、C4 具明显活性。取流份 C3、C4，分别上硅胶柱，用氯
仿 － 甲醇系统梯度洗脱，分段收集。反复过硅胶柱、Sephadex
LH － 20 凝胶柱或制备型 HPLC柱，分离得到 11 个化合物，经鉴
定，分别为:白藜芦醇、氧化白藜芦醇、山奈酚、槲皮素、槲皮素 －
3 － α － L －鼠李糖苷、3，4 －二甲氧基肉桂酸、Aiphanol、南方贝
壳杉双黄酮、南方贝壳杉双黄酮 － 4’－甲基醚、水飞蓟宾、3 －
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湖北中医药大学学报
Journal of Hubei University of Chinese Medicine
2014 年 8 月第 16 卷第 4 期
August 2014，Vol. 16，No. 4
脱氢水飞蓟宾。
1． 4 α －葡萄糖苷酶抑制活性测定方法
根据 Ma等［7］的方法，取 96 孔板，每孔加入 40μL 2mMol /L
的 PNPG 溶液［100 mMol /L 磷酸盐缓冲液(pH7． 0)溶解］和
5μL不同浓度样品溶液(DMSO溶解)，以 DMSO溶液为空白对
照液，每组设 3 个平行孔，在自动酶标分析仪上，405nm 为测定
波长，630 为参比波长，测定背景组光密度(O． D．)值。再加入
5μL 0． 667 μu /mL的 α －葡萄糖苷酶溶液［100 mMol /L磷酸盐
缓冲液(pH7． 0)溶解］，置于恒温培养箱中在 37℃恒温 30min，
测定。计算样品的 α －葡萄糖苷酶活性抑制率。
抑制率% =(ΔA空白 － ΔA样品)?偍 iΔA空白 × 100 %
ΔA =［试验组 O． D．平均值 －背景组 O． D．平均值］
2 结果
2． 1 菝葜提取物对 α －葡萄糖苷酶活性的影响
取上述 3 种提取物 A、B1、B 2、及 8 个流份 C1 － C8，依法测
定。在实验浓度下，提取物 A 和 B2、流份 C3 和 C4 对 α －葡萄
糖苷酶活性抑制率高。结果见表 1。
表 1 菝葜 11 种提取物对 α －葡萄糖苷酶活性的影响 (珋x ± s，n = 5)
提取物 浓度 抑制率(%)
提取物 A 0． 05g /mL 96． 8 ± 1． 84
提取物 B1 1． 00mg /mL 18． 6 ± 3． 62
提取物 B2 1． 00mg /mL 52． 3 ± 2． 57
流份 C1 0． 10mg /mL 57． 6 ± 1． 98
流份 C2 0． 10mg /mL 59． 8 ± 2． 23
流份 C3 0． 10mg /mL 87． 3 ± 2． 16
流份 C4 0． 10mg /mL 70． 5 ± 2． 32
流份 C5 0． 10mg /mL 39． 9 ± 3． 84
流份 C6 0． 10mg /mL 57． 9 ± 2． 08
流份 C7 0． 10mg /mL 24． 8 ± 4． 26
流份 C8 0． 10mg /mL 51． 1 ± 3． 17
2． 2 11 种化合物对 α －葡萄糖苷酶活性的影响
取分离得到的 11 种化合物，分别用 DMSO溶解并稀释制成
0． 5μg /mL、1μg /mL、5μg /mL、10μg /mL、25μg /mL、50μg /mL 一
系列浓度的药物溶液，依法测定。以药物的不同浓度和 α －葡
萄糖苷酶活性抑制率做出曲线图，确定其半数抑制浓度
(IC50)。11 种化合物中，白藜芦醇、3，4 －二甲氧基肉桂酸对 α
－葡萄糖苷酶的抑制作用弱;而槲皮素 － 3 － α － L －鼠李糖苷、
Aiphanol、南方贝壳杉双黄酮 － 4’－甲基醚等 3 种化合物具有
显著的活性。结果见表 2。
表 2 11 种化合物对 α －葡萄糖苷酶活性的影响 (珋x ± s，n = 5)
化合物 IC50(μmol /L)
白藜芦醇 285． 09 ± 4． 5%
氧化白藜芦醇 51． 23 ± 3． 8%
山奈酚 20． 91 ± 4． 1%
槲皮素 20． 00 ± 3． 1%
槲皮素 － 3 － α － L －鼠李糖苷 6． 45 ± 1． 7%
3，4 －二甲氧基肉桂酸 154． 33 ± 5． 4%
Aiphanol 8． 87 ± 2． 9%
南方贝壳杉双黄酮 15． 52 ± 3． 3%
南方贝壳杉双黄酮 － 4’－甲基醚 5． 22 ± 1． 7%
水飞蓟宾 21． 10 ± 2． 7%
2，3 －脱氢水飞蓟宾 12． 65 ± 1． 3%
阿卡波糖(阳性对照物) 0． 11 ± 2． 4%
3 讨论
菝葜中主要含有黄酮、皂甙和鞣质等类型化合物。试验结
果表明，从该药材中分离得到的多种酚类化合物对 α －葡萄糖
苷酶有明显的抑制活性，提示菝葜的降血糖活性可能来自这些
化合物的作用。
槲皮素 － α －鼠李糖苷对 α －葡萄糖苷酶抑制活性强于槲
皮素，但进一步的分析结果表明，反应中槲皮素 － α －鼠李糖苷
并没有被酶解。也许是因为这种化合物的 α －鼠李糖苷与底物
的 α －葡萄糖苷具有相似的糖基链，该化合物更容易与 α －葡
萄糖苷酶结合，从而产生抑制酶的活性。或许，由于结构中的 α
－鼠李糖苷与 α －葡萄糖苷不尽相同，前者只是绑定在酶上，但
不能被其水解。这一结果提示，化合物中添加鼠李糖苷以合成
更强有力的 α －葡萄糖苷酶抑制剂，也许是一个可行的策略。
参考文献:
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2010:290．
［2］ 干国平，于伟，刘焱文．菝葜化学成分的研究［J］． 时珍国医国药，
2007，18(6):1404 － 1405．
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［4］ 干国平，于伟，刘焱文． 菝葜化学成分研究［J］． 湖北中医杂志，
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［5］ 沈忠明，丁勇，施堃，等． 菝葜降血糖活性成分及对相关酶的抑制
作用［J］．中药材，2008，31(11):1717 － 1720．
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Glucosidase Inhibitors［J］． J Med Chem，2008，51(19):6188 － 6194．
(收稿日期:2014-04-05 编辑:熊斌)
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