全 文 ：通讯作者:华小黎 Tel:(027)85261703 E-mail:
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stefenyhxl@ aliyun． com
A1B3C3，即甘草用量为 4%，拌炒时间为 15 min，煮
制锅温为 200℃。该工艺条件的技术参数既具有传
统的经验、主观的指标，又具有现代的、客观量化的
指标，用数字来刻画其工艺的技术参数，对确保中药
饮片的质量与临床疗效具有重要意义。但是，本试
验仅考虑了炮制工艺对单一指标即耐斯糖的影响，
因此其结果有一定的片面性，有待进一步的研究。
3． 3 中药炮制工艺研究
随着中药现代化在中药饮片生产行业的不断推
进，饮片生产实现机械化是历史的必然，这样就对饮
片生产工艺及工艺参数提出了更高的要求。因此，
研究中药饮片生产工艺势在必行。中药饮片炮制工
艺研究是中药饮片质量标准研究的重要组成部分，
也是当前中药研究的发展趋势之一，不但有利于中
药炮制工艺规范化、统一化、科学化，有利于炮制品
质量标准化，也有利于高标准地满足中医临床辩证
用药的需要，有利于提高中药的临床疗效。
参 考 文 献
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(2014-07-23 收稿 2014-12-09 修回)
菝葜不同提取部位对卵巢癌细胞的活性影响
于丽秀1 胡丽玲2 廖婧1 陈东生1 华小黎1 (1．华中科技大学同济医学院附属协和医院，武汉 430022;2．宜昌市
中心人民医院)
摘 要 目的:探讨中药菝葜不同提取物对卵巢癌细胞的活性影响。方法:采用溶剂法利用正丁醇和乙酸乙酯提取菝葜中
的有效成分，获得菝葜不同提取部位。采用 CCK-8 法检测菝葜不同提取物(0，50，100，150，200 μg·ml －1)对低侵袭力 A2780
及高侵袭力 HO-8910PM卵巢癌细胞存活率的影响，同时观察不同时间点 24，48，72 h 两种卵巢癌细胞的状态。结果:正丁醇
提取部位(SCＲ-B)对 A2780 和 HO-8910PM 卵巢癌细胞的 IC50分别为47． 5，69． 2 μg·ml
－1，乙酸乙酯提取部位(SCＲ-E)对
A2780 和 HO-8910 细胞的 IC50分别为147． 9，166． 0 μg·ml
－1;菝葜提取物对两种卵巢细胞 A2780 及 HO-8910PM 均有抑制作
用，并呈剂量及时间依赖性。结论:SCＲ-B对卵巢癌细胞活性的抑制率强于 SCＲ-E，且其对 A2780 细胞的抑制作用强于 HO-
8910 人卵巢癌细胞。SCＲ-B对卵巢癌细胞具有更好的抑制作用。
关键词 菝葜;不同提取物;卵巢癌
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-049X(2015)03-0373-03
Effect of Different Extracts of Smilax China L． on the Activity of Ovarian Cancer Cells
Yu Lixiu1，Hu Liling2，Liao Jing1，Chen Dongsheng1，Hua Xiaoli1(1． Union Hospital，Tongji Medical College，Huazhong University
of Science and Technology，Wuhan 430022，China;2． Yichang Center People’s Hospital)
ABSTＲACT Objective:To investigate the effects of different extracts of Smilax china L on the activity of ovarian cancer cells．
Methods:Solvent extraction method was used to extract the active ingredients of Smilax china L．，and CCK-8 assay method was ap-
plied to detect the influence of different Smilax china L． extracts (0，50，100，150 and 200 μg·ml －1)on the survival rate of ovarian
cancer cells including low invasiveness A2780 cells and high invasiveness HO-8910PM cells． At the same time，the status of the two
kinds of ovarian cancer cells at different time points (24，48 and 72 h)was observed． Ｒesults:The IC50 of N-butanol extracts (SCＲ-
B)on HO-8910 and A2780 ovarian cancer cells was 47． 5 μg· ml －1 and 69． 2 μg· ml －1，respectively，and that of ethyl acetate ex-
tracts (SCＲ-E)on A2780 and HO-8910 cells was 147． 9 μg· ml －1 and 166． 0 μg· ml －1，respectively． Smilax china L． extracts
had the inhibition against both A278 and HO-8910PM ovarian cells in a dose-and time-dependent manner． Conclusion:The inhibitory
activity of SCＲ-B against ovarian cancer cells is stronger than that of SCＲ-E，and SCＲ-B has stronger inhibition against A2780 cells
than against HO-8910 cells． SCＲ-B has better inhibition against ovarian cancer cells．
KEY WOＲDS Smilax china L．;Different extracts;Ovarian cancer
菝葜，又称金刚藤、金刚刺等，为百合科菝葜属 植(Smilax china L．)的根茎(Smilax china L． rhizo-
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中国药师 2015 年第 18 卷第 3 期 China Pharmacist 2015，Vol． 18 No． 3
me，SCＲ) ，具有消肿解毒、祛风利湿、抗炎镇痛、抗肿
瘤［1，2］。我院药学部在国内最早开展其中药制剂
的研究，自 20 世纪 60 年代即用其根茎制成院内自
制制剂“金刚藤糖浆”，用于治疗妇科盆腔慢性炎症
及炎性包块，取得了较好的临床效果。研究表明菝
葜除了对盆腔炎症有较好的抗炎作用外，还具有抗
肿瘤的作用，近年来一些学者对菝葜抑制肿瘤细胞
的作用有了深入的研究［3 ～ 5］，但尚未见对菝葜提取
物的对卵巢癌活性部位进行筛选的报道。本文通过
提取菝葜不同有效部位，研究其对不同活性人卵巢
癌肿瘤细胞(低侵袭力 A2780 细胞与高侵袭力人卵
巢癌细胞 HO-8910PM)的影响，以分别验证菝葜治
疗卵巢癌的活性部位，为深入研究菝葜抗肿瘤的作
用机制提供思路和实验基础。
1 材料与方法
1． 1 试药
菝葜(湖北福人有限公司提供，批号:090921) ，
ＲPMI 1640 培养基(Gibico 公司) ，胎牛血清(杭州四
季青生物工程材料公司) ，双抗(青霉素、硫酸链霉
素)、二甲亚砜(DMSO)、四甲基偶氮唑盐(MTT)
(Sigma公司) ，CCK-8 细胞计数试剂盒(Dojindo 公
司) ，PBS缓冲盐、结晶紫(博士德生物工程有限公
司) ，乙二醇双乙胺醚-N，N-四乙酸(EDTA，上海晶
纯试剂有限公司)。
1． 2 细胞
人卵巢癌细胞 A2780、人卵巢癌细胞 HO-
8910PM(华中科技大学同济医学院附属协和医院惠
赠)。
2 方法与结果
2． 1 菝葜有效部位的提取分离［6］
称取 500 g 药材于 60%乙醇中浸泡 2h 后冷凝
回流提取 3 h，重复 2 次，过滤，合并滤液，采用冷凝
回流、旋转蒸发后得到药材粗提物浸膏;浸膏再分别
用乙酸乙酯、正丁醇萃取后所得提取物，置-20℃冰
箱中备用，其中乙酸乙酯部位(SCＲ-E)每 g 相当于
原生药材104． 60 g，正丁醇部位(SCＲ-B)每 g 相当
于原生药材110． 38 g。
2． 2 菝葜不同提取部位浓度的配制
取菝葜不同提取物溶于 DMSO 中配制成浓度
为 400 mg·ml －1，分装于 EP 管中，置 － 20℃冰箱
中，备用;再用培养液逐级稀释至所需浓度(0，50，
100，150，200 μg·ml －1) ，DMSO 最大浓度不超过
0． 1%。空白对照组以0． 1% DMSO 作为对照，以去
除由 DMSO所造成的干扰。
2． 3 卵巢癌细胞培养
人卵巢癌细胞 A2780、HO-8910PM 培养于含
10%胎牛血清的 ＲPMI 1640 培养基中，置于 5% CO2
培养箱内，37℃培养。2 ～ 3 d 传代一次，维持细胞
处于对数生长期。倒置显微镜下观察细胞形态变化
情况。
2． 4 CCK-8 法考察菝葜不同浓度提取物对卵巢癌
细胞存活率影响［7］
根据预实验结果:菝葜正丁醇提取物对 A2780
和 HO-8910PM细胞的 IC50分别为47． 5 μg·ml
－1、
69． 2 μg·ml －1，菝葜乙酸乙酯提取物对 A2780 和
HO-8910PM 细胞的 IC50分别为147． 9 μg·ml
－1、
166． 0 μg·ml －1。分别配制 0，50，100，150，200 μg
·ml －1不同浓度梯度的 SCＲ-B和 SCＲ-E 溶液，考察
其对两种卵巢癌细胞 A2780、HO-8910PM 存活率的
影响。取培养好的人卵巢癌细胞 A2780 及高转移
人卵巢癌细胞 HO-8910PM，制备细胞悬液，加入 96
孔培养板中，37℃，5% CO2 培养箱中培养。分别加
入不同浓度的 SCＲ-B 和 SCＲ-E 药物(0，50，100，
150，200 μg·ml －1) ，37℃培养箱中培养，加入 CCK-
8 溶液 10 μl，培养 3 h，用酶标仪在 450 nm 处测定
吸光度(A)值，计算细胞存活率。细胞增殖率 = 1 －
细胞存活率;即细胞增殖率 =(1 －实验组 A 值 /对
照组 A值)× 100%。
实验结果发现药物干预后细胞的存活率与空白
对照组相比，均有统计学意义(P ＜ 0． 05)。卵巢癌
细胞 A2780 对药物敏感性强于 HO-8910PM，SCＲ-B
对细胞活性的抑制率强于 SCＲ-E。结果见图 1。
2． 5 菝葜正丁醇提取物对卵巢癌细胞 A2780 不同
时间活性的影响
基于以上实验结果本实验选定 SCＲ-B 及
A2780 细胞为研究对象，观察对菝葜正丁醇提取物
(SCＲ-B)抑制 A2780 细胞活性的时间依赖性，同样
用 0，50，100，150，200 μg·ml －1的药物浓度干预细
胞，每个药物浓度设置调零孔作为空白对照组，采用
CCK-8 法检测，于 24，48，72 h 测 A 值，计算细胞存
活率，结果如图 2 所示。菝葜正丁醇提取物对卵巢
癌 A2780 细胞的活性抑制作用即呈剂量依赖性，也
呈时间依赖性。
3 讨论
本实验通过采用灵敏度、精确度较高且操作更
安全的 CCK-8 方法测定不同提取物分别对两种不
同卵巢癌细胞的活性影响，比较了菝葜不同提取物
对卵巢癌两种肿瘤细胞的敏感性，以及菝葜不同部
位对两种肿瘤细胞的抑制活性作用强弱。结果发现
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www． zgys． org 研究论文
注:与空白对照组比较，aP ＜ 0． 05，bP ＜ 0． 01，cP ＜ 0． 001。
图 1 SCＲ-B和 SCＲ-E对人卵巢癌细胞 A2780(1-A)
和 HO-8910 (1-B)存活率的影响
注:与空白对照组比较，aP ＜ 0． 05，bP ＜ 0． 01，cP ＜ 0． 001。
图 2 SCＲ-B对 A2780 细胞活性抑制的时间曲线
菝葜不同提取物对两种卵巢癌细胞低侵袭力的
A2780 及高侵袭力的 HO-8910PM均有抑制作用，其
中不同提取物对 A2780 细胞的敏感性均强于 HO-
8910PM 细胞，且对人卵巢癌细胞的敏感性较强的
部位为正丁醇提取部位，说明菝葜提取物对卵巢癌
细胞的作用有一定的选择性。可能主要由于其中的
有效成分有差异而导致的，有研究发现 SCＲ-E 的主
要成分是黄酮类化合物，SCＲ-B 的主要成分是甾体
皂苷类成分［8，9］，由此推测甾体皂苷类成分可能是
菝葜抗卵巢癌的主要活性成分，但有待进一步的实
验验证。
有研究表明卵巢癌的发生与机体的慢性炎症发
生及机体的免疫逃逸有着密切的联系［10，11］。如卵
巢癌中促炎症发生的因素包括自由基、细胞因子、信
号传导和转录激活因子-3 等，并通过促进慢性炎症
的发生而导致癌症的进展［12］，细胞因子在促进卵巢
癌环境中炎症的发生起着至关重要的作用，它能激
活促炎症的其他因素，共同促进卵巢癌进展［13］。本
课题组及相关实验发现:菝葜提取物具有治疗慢性
盆腔炎及佐剂性关节炎的作用，且参与机体抗炎作
用及免疫应答反应［14］。结合中药具有多靶点参与
机体的反应，推测菝葜提取物可能是通过多方面参
与机体的抗肿瘤作用，具体作用机制有待以后的深
入研究。
本课题的研究结果对于开发新的具备抗卵巢癌
活性同时兼具疗效好、毒性低的中药制剂提供了研
究基础和科学依据，随后将对菝葜正丁醇提取物中
的活性进一步分离分析，找出其中发挥疗效的活性
有效成分，并从细胞水平和分子水平上阐述其抗卵
巢癌作用机制，以期寻找疗效好、毒性低的中药活性
成分。
参 考 文 献
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