全 文 ：第 19卷第 7期 中国现代医学杂志 Vol. 19 No. 7
2009年 4月 China Journal of Modern Medicine Apr. 2009
文章编号： 1005- 8982（2009）07- 1025- 03
·论著·
复方菝葜颗粒对非小细胞肺癌 A549细胞
P53基因、细胞周期的影响
胡灿红 1，李广诚 2，董克礼 2
（1 .江苏省中西结合医院 肿瘤科，江苏 南京 210028；2.中南大学
湘雅三医院 中医科，湖南 长沙 410013）
摘要：目的 观察复方菝葜颗粒对非小细胞肺癌 A549细胞 P53基因及细胞周期的影响，探讨复方菝葜颗
粒治疗非小细胞肺癌的部分作用机制。方法 雄性 SD大鼠 30只，随机分为两组，每组 15只。一组灌服复方菝
葜颗粒，2次 / d；另一组灌服等剂量蒸馏水，第 6次灌胃后 2h提取血清。A549细胞株随机分为中药实验组、西
药对照组、正常对照组，分别加入 10%的含药血清、顺铂 3μg/ mL和 10% SD大鼠血清，培养 48h后收集细胞，
RT- PCR 测定 P53 mRNA表达；流式细胞技术检测细胞周期。结果 中药实验组和西药对照组 G1期细胞数
及 P53 mRNA相对表达量高于正常对照组相（P<0.05）。 结论 A549细胞存在 P53 mRNA低表达，复方菝
葜颗粒能够上调抑癌基因 P53 mRNA表达，并将癌变的细胞阻滞在 G1期，这可能是复方菝葜颗粒治疗非小
细胞肺癌的作用机制之一。
关键词： 复方菝葜颗粒；非小细胞肺癌；细胞周期
中图分类号： R734.2 文献标识码：A
Effects of compound rhizoma smilacinus granule on the
expression of P53 gene in A549 cell lines and cell cycle of
non-small cell lung cancer
HU Canhong1, LI Guangcheng2, DONG Keli2
(1.Department of Tumor, Chinese-western Combined Medicine Hospital of Jiangsu, Nanjing,
Jiangsu 210028, P.R.China; 2.Department of Traditional Chinese Medicine, the Third Xiangya
Hospital, Central South University, Changsha, Hunan 410013, P.R.China)
Abstract: 【Objective】To approach the mechanism of compound rhizoma smilacinus granule (CRSG) on non-
small cell lung cancer through exploring its effects on the expression of P53 gene and cell cycle in A549 cell lines.
【Method】The SD rats were randomly divided into two groups, one group was administrated with CRSG (n=15), an－
other with same dose of distilled water (n =15), the herbage-containing serum was obtained two hours later of the
sixth treatment. Non-small lung cancer A549 cell lines were randomly divided into CRSG group, diamminedichloro－
platinum (DDP) group and normal control group, which were cultivated with 10% herbage-containing serum, DDP (3
μg/mL) and 10% SD rats serum respectively. The cultivated cells were collected after 48 hours, then RT-PCR tech－
nique was used to determine the expression of P53 mRNA, flow cytometry technique tests to determine the cell cycle.
【Result】Cell number in G1 phase of CRSG group and DDP group is higher than the normal control group. The ex－
pression of P53 mRNA is also higher than the normal group (P <0.05). 【Conclusions】Non-small cell lung cancer
A549 cell lines has a low expression of P53 mRNA, and CRSG can block the carcinogenesis cells at the phase of G1,
which probably is the part of molecular mechanism of CRSG in inhibiting the growth of non-small cell lung cancer.
Key words: compound rhizoma smilacinus granule; non-small cell lung cancer; cell cycle
收稿日期：2008- 11- 10
[通信作者] 李广诚，E- mail:x7080@126.com
1025· ·
P53基因是一种对细胞周期和细胞凋亡具有重
要调节作用的核蛋白。其主要生物学功能是起到细
胞生长“监控器”的作用。野生型 P53活化片段 1
基因或称为依赖细胞周期素蛋白激酶（CDK）作用
的蛋白 1 基因，即 CIP1/WAF1 基因，Deiry 将
CIP1/WAF1 基因的 cDNA转导入肺腺癌细胞中，
CIP1/WAF1基因与 P53结合后可使细胞停滞于 G1
期而不进入 S期，抑制细胞增殖[1]。P53可抑制不含
有 P53反应元件的基因启动子的转录活性而抑制
细胞生长，也可激活含有 P53反应元件的基因启动
子的转录活性而诱导细胞的凋亡，清除异常细胞。
P53基因突变或缺失，细胞凋亡减弱，机体肿瘤的发
生率就会明显增加。本文主要观察复方菝葜颗粒对
非小细胞肺癌 A549细胞 P53基因及细胞周期的影
响，探讨复方菝葜颗粒治疗非小细胞肺癌的部分作
用机制。
1 资料与方法
1.1 实验动物与细胞
纯系 Sprague- Dawley（SD）雄性大鼠 30 只，清
洁级，体重（220±20）g，购于湖南农业大学动物实
验部 [实验动物合格证号：SCXK（湘 2003- 0003，
2005年 10月）]。随机分为两组，每组 15只。非小细
胞性肺癌 A549细胞株由中南大学湘雅医学院细胞
中心提供。
1.2 含药血清的提取
纯系 Sprague- Dawley（SD）雄性大鼠 30 只，体
重 200～250 g，随机分为两组（n =15）。一组灌服复
方菝葜颗粒，根据预实验结果，选择相当于成人临床
用药量的 10 倍剂量，即 CRSG给药剂量为 3.6 g/
次。CRSG由蒸馏水稀释为每毫升含 0.9 g，大鼠灌服
CRSG 4 mL/只，2次 /d；另一组灌服等剂量蒸馏水，
2次 /d。第 6次灌胃后的 2 h，水合氯醛 3.5 mg/kg腹
腔麻醉，无菌条件下自腹腔横向切口、破膈肌，自左
心室采血，分装。常温静置 2 h后 3 000 r/min离心
10 min取血清，水浴箱内 56℃、30 min，灭活补体，在
超净台内，无菌条件下，滤器（孔径为 0.22μm）过
滤血清，除菌。－20℃冰箱保存备用[2]。
1.3 细胞培养及处理
A- 549 细胞随机分为中药实验组、西药对照
组、正常对照组，分别加入含 10％的含药血清、
3μg/mL的 DDP [3]、10％正常 SD大鼠血清的培养
基 4 mL，培养 48 h后制成单细胞悬液，收集细胞，
流式细胞分析测定细胞周期。流式细胞术检测 细
胞培养 48 h后，收集细胞，按照 AnnexinV- FITC试
剂盒说明书方法用流式细胞仪检测细胞周期和凋
亡率。
1.4 RT- PCR、细胞周期和凋亡率检测
采用 Trizol试剂提取细胞总 RNA，PCR引物采
用 Primer Premier 5.0设计引物序列[4]（由上海英骏
生物技术公司产品合成），见表 1。PCR循环条件：
94℃预变性 150 s，94 ℃变性 40 s，60℃退火 40 s，
72℃延伸 40 s，循环 35次；72℃延伸 5 min，反应体
系为 40μL。PCR反应产物经琼脂糖凝胶电泳，用凝
胶成像系统扫描条带光度值，并以β- actin光度值
作为参考定量标准，求待测基因 /β- actin的比值作
为待测基因 mRNA的相对表达量。按照 Annex-
inV- FITC试剂盒说明书方法用流式细胞仪检测细
胞周期和凋亡率。
1.5 统计学处理
所有数据用均数±标准差（x±s）表示，采用
SPSS 11.5统计软件包对数据进行统计分析，检验
水准α=0.05。
表 1 PCR 引物序列
2 结果
2.1 细胞周期
各组细胞周期分布时相见表 1所示，中药实验
组和西药对照组 G1期细胞增多，S期和 M期细胞
相对较少，与正常对照组差异有显著性（P <0.01），
中药实验组和西药对照组差异无显著性（P >0.05）。
表 2 各组肺癌细胞细胞周期时相分布 ％
注：覮与正常对照组比较，P <0.01
2.2 P53 mRNA的相对表达量
各组细胞培养 48 h后，中药实验组和西药对照
组 P53mRNA相对表达高于正常对照组，差异有显
著性（P <0.05）；中药实验组与西药对照组无明显
基因 序列 产物长度（bp）
P53
上游 5- TTGGATCCATGTTTTGCCAACTGGCC- 3
510
下游 5- TTGGATCCATGTTTTGCCAACTGGCC- 3
β-
actin
上游 5- GCGGGAAATCGTGCGTGCGTGACATT- 3
230
下游 5- GCGGGAAATCGTGCGTGCGTGACATT- 3
组别 例数 G0/G1 S G2/M
中药实验组 5 62.64±4.89覮 20.16±1.53覮 17.19±4.27覮
西药对照组 5 65.61±9.80覮 20.37±4.19覮 14.22±5.49覮
正常对照组 5 41.03±2.40 52.86±2.07 6.09±1.61
中国现代医学杂志 第 19卷
1026· ·
第 7期 胡灿红，等：复方菝葜颗粒对非小细胞肺癌 A549细胞 P53基因、细胞周期的影响
差异 （P >0.05）。提示复方菝葜颗粒能够上调
A- 549细胞 P53mRNA的表达，见表 3。
表 3 各组细胞 p53mRNA相对表达量的比较
注：覮与正常对照组比较，P <0.013
3 讨论
历代医家对肺癌的论述颇多，归纳认为肺癌
是由于正气虚损，邪毒乘虚入肺，邪滞于肺，宣降
失调，肺气膹郁，气机不利，血行受阻，津液失于输
布，津聚为痰，痰凝气滞，瘀阻脉络，于是瘀毒胶
结，日久形成肺部积块。因此，肺癌系本虚标实，其
虚以气虚、阴虚为多见，实则不外乎气滞、血瘀、痰
凝、毒聚之病理变化。复方菝葜颗粒根据肺癌正气
内虚，邪毒外侵，痰浊内聚，气滞血瘀，阻结于肺，
肺失宣降的发病机制，气虚、阴虚、气滞、血瘀、痰
凝、毒聚的病理变化，以菝葜、鱼腥草、猫爪草、土
鳖虫、冬花、枸杞、白参、大枣等药物组成，其中以
菝葜、土鳖虫为君药，具有清热解毒、软坚散结之
作用；以鱼腥草、猫爪草、白参为臣药，协助君药益
气解毒散结；佐以冬花止咳化痰，使以枸杞、大枣养
阴润肺益气。全方具有清热解毒、消肿散结、润肺益
气、止咳化痰等功效。临床上治疗中晚期非小细胞
肺癌能够改善患者的生存质量、延长生存期[5]。实验
研究发现复方菝葜颗粒可使 Bax mRNA表达量显
著增加，Bcl- 2 mRNA表达及 Bcl- 2/Bax比例显著
降低、减慢细胞增殖速度，并诱导 A549 细胞凋亡
的作用 [6，7]。本实验研究发现复方菝葜颗粒能将
A549细胞大部分阻滞在 G1 期，延缓细胞生长速
度；增加 P53mRNA的表达，诱导细胞凋亡，这可能
是复方菝葜颗粒治疗非小细胞肺癌的又一作用机
制。
参 考 文 献：
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smilacinus granule induces apoptosis in non- small cell lung can-
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579- 582. Chinese
（曾文军 编辑）
组别 例数 p53mRNA
中药实验组 5 0.920±0.115覮
西药对照组 5 1.027±0.123覮
正常对照组 5 0.532±0.137
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