全 文 ：[ 作者简介] 朱卫江 ,男 ,硕士 ,副主任药师 ,电话:0991-8564293 E-mail:w eijiangzhumd@126.com
驱虫斑鸠菊提取物对 C57BL小鼠毛囊的影响
朱卫江 ,蒋玉凤　(新疆自治区人民医院临床药学研究所 , 新疆 乌鲁木齐 830001)
[ 摘要] 　目的:探讨驱虫斑鸠菊提取物对 C57BL 小鼠皮肤毛囊生长周期及毛囊黑素细胞功能的影响。方法:驱虫斑鸠菊提取
物灌服 C57BL小鼠 , 采用 DOPA 、HE 、S-100 等多种染色方法 ,观察用药后皮肤的毛囊个数及生长周期状态和毛囊黑素细胞功
能的改变。结果:驱虫斑鸠菊提取物能引起毛囊生长周期的变化 , 并对毛囊黑素细胞功能有促进作用。 结论:驱虫斑鸠菊提
取物有防治斑秃脱发的应用前景。
[ 关键词] 　驱虫斑鸠菊;毛囊;黑素细胞
[中图分类号] R285.6　　[ 文献标识码] A　　[文章编号] 1001-5213(2010)07-0558-03
Effect of Vernonia anthelmintica extract on the hair follicle of C57BL mouse
ZHU Wei-jiang , JIANG Yu-feng(Institute o f Clinical Pha rmacy , People s Hospital o f Xinjiang Uygur Autonomous Re-
g ion , Xinjiang Wulumuqi 830001 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To explo re the efficacy of Vernonia anthe lmintica ex tract on the g row th cycle and the function of
me lanocy tes in hair fo llicle of C57 BL mouse.METHODS　By using Vernonia anthe lmintica ex tract to g avage feeding C57BL
mouse and using dyeing methods such as DOPA 、HE 、S-100 , the number of hair follicles、the state o f g row th cycle and the chan-
ges of melanocy tes function after the drug treatment were obserued.RESULTS　Veronica anthelmintica ex tract can induce the
changes of hair follicles g rowth cycle and promote the function of melanocy tes.CONCLUSION　Veronica anthelmintica extr act
ha s excited applied pro spect to prevent and cure A lopecia areata.
KEY WORDS:Veronica anthelmintica ex tract;hair fo llicle;melanocytes
　　毛发是周期性生长的 ,分生长期 、退行期和休止
期 3个阶段。生长期时 ,毛囊具有高度代谢活性 ,形
成有色素的高度分化的毛干 ,休止期时这些活动则
停止 。位于毛母质中的黑素细胞仅在生长期产生黑
色素 ,从而使毛发具有颜色[ 1-2] 。驱虫斑鸠菊(Ver-
nonia anthelmintica Willd)为菊科斑鸠属一年生草
本植物 ,主要分布于印度 、巴基斯坦及我国新疆等
地。收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·维吾
尔药分册》 ,维吾尔语称卡力孜然 ,药用部位为该植
物的成熟瘦果 ,具有清热 、消炎 、活血化淤 、杀虫祛斑
的作用 ,维吾尔族民间常用此治疗白癜风[ 3] 。新疆
自治区人民医院临床药学研究所通过动物和临床患
者的药效分析 ,发现驱虫斑鸠菊可以使动物毛囊黑
素细胞分泌的黑色素颗粒增加 ,临床患者大部分是
从皮损白斑内的毛囊形成色素岛而开始好转的[ 4] 。
本实验选用驱虫斑鸠菊提取物灌服 C57BL 小鼠 ,采
用 DOPA 、HE 、S-100等多种染色方法分析 ,观察用
药后皮肤的毛囊个数及生长周期的状态和毛囊黑素
细胞的功能的改变 ,筛选具有应用前景的中药有效
成分 。
1　材料
L-多巴(L-DOPA)、S-100 、ABC试剂盒均为美国
Sigma公司;驱虫斑鸠菊提取物(新疆自治区人民医
院临床药学研究所 ,批号 050325);复方甘草酸苷片
(日本米诺发源制药株式会社 ,批号 05047);试剂的制
备:(1)称取DOPA 1.10 g ,溶解于1 000 mL纯化水 ,
配制成0.005 6 mol·L-1的 DOPA缓冲液;(2)A 液:
取0.1 mol·L-1磷酸氢二钠35.8 g溶解于1 000 mL纯
化水;B液:磷酸二氢钾13.6 g溶解于1 000 mL纯化
水;取 A液 9份与 B液 1份混合 ,pH 调至7.4 ,配制
成0.1 mol·L-1磷酸盐缓冲液;其他试剂均为分析纯;
C57BL小鼠[(新疆地方病研究所动物中心 ,动物许可
证号:SCXK(新)2003-0002)] 。
2　方法
2.1　分组　实验分为 5组 ,分别为正常对照组(生
理盐水),驱虫斑鸠菊提取物高 、中 、低剂量组 ,阳性
对照组(复方甘草酸苷片),每组 10只 C57 BL 小鼠 ,
体质量 20 g 左右 , ♀♂不拘。
2.2　驱虫斑鸠菊水提取液的制备　称取驱虫斑鸠
菊成熟果实适量 ,置于圆底烧瓶中 ,加入 10倍量水 ,
浸泡 1 h ,回流提取 3 次 ,每次 1 h ,过滤 ,合并滤液 ,
按 1∶10 比例水浴浓缩 ,其紫铆素含量为14.42 mg·
g
-1 ,总黄酮含量为309.5 mg·g-1 ,浸膏含量为11.0
g·L -1 [ 5] 。水提物浓缩烘干 ,制成粉末状 。
·558· 中国医院药学杂志 2010年第 30卷第 7期 Chin H osp Pharm J , 2010 Apr , Vol 30 , No.07
2.3　灌胃溶液的配制　称取 4 g 驱虫斑鸠菊粉末 ,
用 10%淀粉糊 100 mL 溶解制成混悬液 ,小剂量灌
胃0.2 mL ,中剂量灌胃0.4 mL ,大剂量灌胃 1 mL;
称取复方甘草酸苷片 100 mg ,碾磨成粉末 ,用 10%
淀粉糊 100 mL 溶解制成混悬液 ,灌胃0.2 mL , tid 。
灌服 21 d后 ,取背部皮肤 ,进行染色观察。
2.4　染色方法[ 6-7]
2.4.1　DOPA 染色　黑素生成酶能将无色的 DO-
PA氧化为多巴黑素 ,只要有黑素生成酶(主要为酪
氨酸酶)存在 ,黑素细胞就被染成黑色。取小鼠背部
皮肤 ,冰冻切片 ,冰 PBS 洗 2次 ,丙酮固定 30 min ,
然后将盖玻片浸入 DOPA 缓冲液 30 min , 温度
37.5 ℃,更换染液 1次 ,镜下观察发现染液变为棕
色即可终止 , 水洗 ,乙醇脱水 ,二甲苯透明 , 封固 。
DOPA 阳性反应细胞浆呈灰色至黑色 。
2.4.2　S-100 染色　S-100 是抗黑色素瘤细胞抗
体 ,能和正常的黑素细胞发生反应 ,可用免疫组化的
方法鉴定正常的黑素细胞 ,如 S-100 能与黑素细胞
发生抗原抗体反应 ,即可证明此为黑素细胞 。取小
鼠背部皮肤 ,冰冻切片 ,冰 PBS 洗 2 次 ,丙酮固定 ,
行免疫细胞化学反应 ,一抗为抗 S-100蛋白单抗 ,按
ABC 试剂盒操作步骤进行染色 。
2.4.3　HE 染色　可观察表皮及其附属器的结构 。
冰冻切片切好贴附在载片上冷风吹 5 min;乙醇 、丙
酮混合液固定 15 min ,水冲洗;0.5%苏木素染 4 ～ 5
min;水冲洗后过0.5%盐酸酒精片刻;水冲洗后入
0.5%氨水片刻反蓝;水冲洗后入0.5%伊红 3 min;
水冲洗后梯度酒精脱水兼脱色 ,二甲苯透明;光学树
脂胶封固 ,显微镜观察。
2.5　光镜观察　观察每平方毫米的毛囊个数 ,200
倍镜下观察毛囊的功能变化和毛囊黑素细胞的分泌
功能 。
3　结果
3.1　毛囊个数及功能　驱虫斑鸠菊组表皮毛囊个
数有增多的趋势 ,且大部分毛囊处于生长期(毛囊黑
染),阳性对照组表皮毛囊个数介于驱虫斑鸠菊中剂
量和高剂量之间 ,见表 1。
表 1　驱虫斑鸠菊对小鼠毛囊个数的影响
Tab 1 　The effect o f Vernonia anthelmintica willd ex tract
on the numbe r of hair folliclein mice
分组 剂量/ g·k g -1 毛囊数/个
生理盐水 21
驱虫斑鸠菊
低剂量 0.4 30
中剂量 0.7 51
高剂量 2 79
复方甘草酸苷片 0.01 64
3.2　毛囊黑素细胞的分泌功能　DOPA 染色观察
驱虫斑鸠菊组表皮毛囊黑素细胞的分泌功能活跃 ,
黑色素颗粒分泌增多 ,阳性对照组表皮毛囊黑素细
胞的分泌功能与驱虫斑鸠菊高剂量组相似 ,见图 1 。
图 1　驱虫斑鸠菊对C57 BL小鼠毛囊及黑色素代谢的影响(×200)
A.正常对照组;B.驱虫斑鸠菊提取物低剂量组;C.驱虫斑鸠菊提取
物中剂量组;D.驱虫斑鸠菊提取物高剂量组;E.阳性对照组
Fig 1 　The effect of Vernonia an thelmintica Willd ext ract on the
hair folli cles an d the changing of melan ocytes funct ion in mice(×
200)
A.normal cont rol s group;B.low d osage Vernonia anthelmint ica
Willd g rou p;C.midd le dosage Vernonia anthelmintica Willd group;
D.high dosage Vernon ia anthelmint ica Willd g rou p;E.p osi ti ve con-
t rol g rou p
3.3　其他染色观察　HE染色见表皮 、皮下组织及
皮肤的附属器结构完整 ,见图 2。
图 2　表皮 HE染色(×200)
A.正常对照组;B.驱虫斑鸠菊提取物低剂量组;C.驱虫斑鸠菊提取
物中剂量组;D.驱虫斑鸠菊提取物高剂量组;E.阳性对照组
Fig 2　HE staining of epidermal(×200)
A.n orm al con t rol s;B.low dosage Vernonia anthelmin tica Willd
group;C.middle dosage Vernonia anthelmint ica Wil ld g rou p;D.high
dosage Vernonia anthelm int ica Willd g rou p;E.posit ive cont rol group
　　S-100染色见驱虫斑鸠菊组的表皮黑素细胞增
大 ,其细胞表面的树突分支增多 ,阳性对照组表皮黑
素细胞增大 ,其细胞表面的树突分支增多 ,与驱虫斑
鸠菊高剂量组相似 ,见图 3。
4　讨论
C57BL 小鼠在 6 ～ 8周饲养良好的状态下 ,所有
毛囊均由生长期进入静止期 ,且生理状态下不再自
发进入生长期 ,经物理或化学刺激后可诱导其毛发
·559·中国医院药学杂志 2010年第 30卷第 7期 Chin H osp Pharm J , 2010 Ap r , Vol 30 , No.07
　图 3　表皮 S-100染色(×200)
A.正常对照组;B.驱虫斑鸠菊提取物低剂量组;C.驱虫斑鸠菊提取
物中剂量组;D.驱虫斑鸠菊提取物高剂量组;E.阳性对照组
Fig 3　S-100 staining of epiderm al(×200)
A.normal cont rol g rou p;B.l ow dosage Vernonia anthelmint ica w illd
g rou p;C.middle dosage Vernonia anthelmintica Willd group;D.high
d osage Vernon ia anthelmintica Wil ld group;E.p osi ti ve con t rol group
进入生长期 ,并可自发经过退行期再进入休止期 ,这
个周期活动与自然周期差异无显著性[ 8] 。驱虫斑鸠
菊在维吾尔族民间用于治疗白癜风 ,在细胞和动物
实验中发现驱虫斑鸠菊对黑色素的生成有促进作
用 ,本实验观察其能否引起 C57BL 小鼠的毛囊由静
止期向生长期转化。
关于驱虫斑鸠菊对 C57 BL 小鼠皮肤毛囊生长
周期及毛囊黑素细胞功能的影响尚未见报道 。本实
验自驱虫斑鸠菊提取物总黄酮 ,通过 HE 、DOPA 和
S-100这 3种染色方法 ,观察不同浓度的驱虫斑鸠
菊提取物总黄酮对 C57 BL 小鼠皮肤毛囊生长周期
及毛囊黑素细胞功能的影响 ,结果驱虫斑鸠菊提取
物总黄酮对 C57BL 小鼠皮肤无刺激性 、提高毛囊黑
素细胞酶活性 、促进毛囊黑素细胞功能 ,且有药物剂
量依赖性的趋势 ,驱虫斑鸠菊中剂量和高剂量组的
效果与阳性对照组相似 。本实验采用了新的研究手
段 ,发现驱虫斑鸠菊提取物可引起小鼠毛囊生长周
期发生变化 ,促进黑素细胞的生理功能 ,为其防治斑
秃脱发提供了实验依据 。
参考文献:
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[收稿日期] 2009-04-05
[ 作者简介] 吴珍 ,女 ,硕士 ,主治医师 ,电话:0719-8801431 , E-mai l:w z330@sina.com 　[ 通讯作者] 陈永顺 ,男 , 硕士 , 主管药师 ,电话:0719-
8801107 , E-mail:cy s1222cys@sin a.com
草豆蔻挥发油对大鼠醋酸性胃溃疡的影响
吴珍1 ,陈永顺2 ,杜士明2 ,王启斌2 ,童强1 　(郧阳医学院附属太和医院 , 1.消化内科 , 2.药学部 ,湖北 十堰 442000)
[ 摘要] 　目的:研究草豆蔻挥发油对大鼠醋酸性胃溃疡的影响 , 探讨其可能的作用机制。方法:用醋酸涂抹法建立大鼠胃溃
疡模型 ,实验设正常对照组 , 模型组 ,雷尼替丁组 , 草豆蔻挥发油高 、中 、低剂量组 ,术后连续给药 14 d ,评价溃疡抑制率 , 测定
胃液酸度及胃蛋白酶活性;测定大鼠血清的超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果:草豆蔻挥发油高 、中剂
量组能显著提高溃疡抑制率及降低胃液酸度和胃蛋白酶活性 , 明显升高大鼠血清的 SOD 活性 ,亦显著下调 M DA 的含量。结
论:草豆蔻挥发油对大鼠醋酸性胃溃疡有较好的治疗作用 ,其作用机制可能为清除自由基。
[ 关键词] 　草豆蔻挥发油;胃溃疡;SOD;MDA
[中图分类号] R282　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213(2010)07-0560-04
Effect of volatile oil of Alpinia Katsumadai on gastric ulcer induced by acetic acid in rats
WU Zhen
1 , CHEN Yong-shun2 , DU Shi-ming2 , WANG Qi-bing2 , TONG Qiang1(Taihe Hospital A ffiliated to
Yunyang Colleg e , 1.Deparement of g astroenternolog y;2.Depa rtment of pha rmacy , Hubei Shiyan 442000 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To study the effects o f v olatile o il of Alpinia Katsumadai on gastric ulce r induced by acetic acid in
·560· 中国医院药学杂志 2010年第 30卷第 7期 Chin H osp Pharm J , 2010 Apr , Vol 30 , No.07