全 文 ：文山红柱兰快速繁殖技术的研究
丁长春1　张　铁1　刘方媛2
(1.文山师范高等专科学校 生物资源开发研究中心 ,云南文山 663000;
2.中国科学院 昆明植物研究所 ,云南 昆明 650204)
　　【摘要】　文山红柱兰授粉后180天的种子具有较高的萌发率 ,且 1/3MS 培养基显著优于其他基本培养基;基本
培养基中添加10%的椰乳有利于种子的萌发;茎尖在MS +NAA0.3 +BA3.0(单位:mg / L ,下同)+椰乳 10%的培养
基上诱导产生原球茎的几率最高;原球茎在MS +NAA0.1 +BA0.5的培养基上增殖 ,同时部分分化成芽;幼芽在附
加5%香蕉汁和5%马铃薯汁的 1/2 MS培养基上诱导出根而再生完整小植株。
【关键词】　兰属;文山红柱兰;种子;茎尖;组织培养;快速繁殖
【中图分类号】Q949.71　【文献标识码】A　【文章编号】1671-3303(2005)03-0225-02
　　文山红柱兰(Cymbidium wenshanense Y.S.Wu et F.
Y.Liu)产于云南文山 ,是 1990年发现的兰科兰属新
种[ 1] ,又称彩蝶玉兰。在兰花热潮的冲击下 ,挖掘野生
兰花一度到了疯狂的程度 ,包括文山红柱兰在内的国产
珍稀大花种类 ,如美花兰 、大雪兰 、独占春已濒临灭绝 ,
仅在一些交通极不发达的偏远山区还保存有少量植株 。
文山红柱兰快速繁殖至今尚未见报道。最近 ,作者以其
种子和茎尖为材料 ,利用植物组织培养技术 ,建立了人
工快速繁殖技术体系 ,为快速繁殖和开发利用这一野生
资源奠定了基础。
1 材料与方法
1.1材料
材料为引种栽培的云南省文山州野生文山红柱兰
植株 ,取其人工授粉后 4 ～ 10个月的果实和 5 ～ 10cm高
的嫩芽。
1.2方法
材料经表面清洗后 ,放入 75%酒精中灭菌 30秒 ,再
以0.1%升汞灭菌 7 ～ 10分钟 ,用无菌水冲洗 4 ～ 5次 。
在无菌条件下把果实切开 ,将种子均匀撒播在培养基
上 ,茎尖材料剥取约 10 mm3 的生长点接种到诱导培养
基上。
以花宝一号(Hyponex l , 7-6-19)3 g/L 、改良
VW(Vacin和Went , 1949 , 添加MS 的微量元素)、MS ,
KC (Knudson C , 1946)为基本培养基 ,根据不同培养阶
段及不同试验方法 ,添加不同的激素。蔗糖浓度 2%,灭
菌前调整 pH值至 5.6。培养温度 25℃,每天连续光照
12 h ,光照强度1 500～ 3 000 lx 。表1 ～表2的试验中 ,每
种处理接种 5瓶材料 ,重复试验 2次。增殖率为两次试
验的平均值 (污染瓶数不在统计范围 )。文山红柱兰
类原球茎个体较小 ,本次试验以培养前后原球茎鲜重差
求算月增殖率。
2 结果与分析
2.1影响文山红柱兰种子萌发的因素
试验结果如表 1所示。在各种培养基上 ,授粉后 4
个月的种子仅有少量能萌发 ,5个月的种子萌发率更佳 ,
6月时达到最高 ,随着时间的推移 ,种子过熟 ,萌发率反
而逐步下降。这说明成熟度合适的种子具有最好的萌
发能力。试验中添加椰乳(CM)10%有利于种子的萌发。
试验结果还表明 ,以 1/3MS 作基本培养基 ,种子萌发率
高于花宝培养基 、KC培养基和改良的VW培养基。
表 1 影响文山红柱兰种子萌发的因素
培养基 Medium(mg/ L)
1/3MS
1/3MS+10%CM
Hyponex
Hyponex+10%CM
改良 VW
改良 VW+10%CM
KC
KC+10%CM
种子成熟度 Seed maturity(month)
4 5 6 7 8
31 62 90 72 54
45 75 96 78 61
25 41 53 47 51
36 49 61 52 57
19 35 50 41 37
24 41 56 49 42
23 38 49 38 30
31 43 58 40 35
　　注:播种 2个月后统计萌发率。
2.2 类原球茎的诱导 、增殖及植株再生
从表 2可以看出 ,茎尖外植体接种到激素组合为
NAA0.3+BA3.0 mg 的培养基中 ,两周后可观察到茎尖
外植体膨大 、变绿 ,诱导率最高达61%;而在PLB的后续
发育过程中 ,虽然以添加 NAA0.1+BA1.0的繁殖率最
高 ,但PLB细弱发黄;在组合NAA0.1+BA0.5中 ,类原
球茎经过培养不断增殖 ,颗粒增大 、变绿 ,形成直径 2 ～ 3
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　第 18卷　第 3期　　　　　　　　　　　文山师范高等专科学校学报　　　　　　　　　　　Vol.18　No.3　
　2005年 9月　　　　　　　　　JOURNAL OFWENSHAN TEACHERS COLLEGE　　　　　　　　Sep.2005　
繲收稿日期:2005-06-11作者简介:丁长春(1974-),男 ,彝族 ,云南砚山人, 助教, 硕士 , 主要从事植物生态遗传与物种保护研究。
mm的圆形颗粒。
类原球茎在增殖培养基中培养约 2 ～ 3个月即进入
器官分化 ,形成小芽(见图 1)。小芽在添加 5%香蕉汁
和5%马铃薯的 1/2MS培养基中培养 1～ 2个月 ,可形成
具有2 ～ 3条小根的完整再生植株(见图 2)。再经过约
100天 ,待幼苗植株高度达 10厘米左右时即可进行炼苗
移栽工作。
表 2 外源激素对茎尖诱导 PLB及其发育的影响
处　理 诱导率 处　理 增殖率
NAA0.1+BA1 18% NAA0.1+BA0.1 110%
NAA0.2+BA2 29% NAA0.1+BA0.5 370%
NAA0.3+BA3 61% NAA0.1+BA1.0 430%
3 小结
(1)文山红柱兰种子在不含激素的改良1/3MS培养
基上能够萌发 ,在 6个月内 ,萌发率随着种子成熟度的
提高而增加 。种子萌发后 ,胚发育形成原球茎而不是根
状茎 ,这与地生兰类种子萌发后形成根状茎的情况不
同。
(2)添加适量的椰乳后 ,种子萌发率显著增加 ,表明
椰乳内具有某种活性物质可促进种子的萌发 ,我们在对
兰科杏黄兜兰的研究中也得到类似的结果【2】。
(3)文山红柱兰幼苗茎尖在MS+NAA0.3+BA3.0
+椰乳 10%的培养基上诱导产生原球茎的几率最高。
(4)文山红柱兰原球茎最佳继代培养配方是M S+
BA 0.5 +NAA 0.1 ,它既可以使原球茎保持较高的繁殖
系数 ,同时也获得较多有根小苗用于移栽 ,这部分苗不
需经生根培养的程序 ,有利于大量生产移栽苗。
(5)在生根培养过程中 ,培养基中附加 5%的香蕉汁
及5%的土豆汁对试管苗壮苗及生根有明显促进作用。
　 　
　　　　　　　　　　　　图 1　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　图 2
参考文献:
[ 1] 吴应祥, 刘方媛.云南兰属一新种[ J] .云南植物研究 , 1990 ,
12(3):291-292.
[ 2] 丁长春 , 虞泓 , 刘方媛.影响杏黄兜兰种子萌发的因素[ J] .
云南植物研究 , 2004 , 26(6):673-677.
Rapid Propagation of Cymbidium wenshanense Y .S .Wu et F.Y.Liu
DING Chang-chun1　ZHANG Tie1　LIU Fang-yuan2
(1.Wenshan Biological Resources Development Centre , Wenshan Yunnan 663000 , China;
2.Kunming Plant Research Institute of Chinese Academy of Sciences ,Kunming Yunnan 650204 ,China)
　　Abstract:A rapid propagation method of Cymbidium wenshanense through in vitro culture of seeds and shoot tips is de-
scribed in this paper .The germination capacity of young seed is very low but become prominently higher when it reaches six
months old.Although seeds could germinate on basic medium , adding of coconut milk to the medium clearly stimulats the germi-
nation of seed.After germination , the embryos developed into Protocorm-like bodies(PLBs), which later multiplicate and dif-
ferentiate into leaves and roots , and form complete plantlet.It takes more than seven months for seeds to develop into plantlets
after sowing.PLBs are induced from shoot tip explants in MS medium supplemented with NAA 0 .1 mg/L , BA 3.0 mg/L and
with coconut milk 10%.PLBs multiplicate in MS medium supplemented with NAA 0.1 mg/L and BA 0.5 mg/L.Plantlets are
induced from PLBs in the media without hormone.Roots are induced in 1/2 MS medium supplemented with 5%banana juice
and 5%potato juice.
Key words:Cymbidium;Cymbidium wenshanense;seeds;shoot tips;tissue culture;rapid propagation
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　第18卷　　　　　　　　　　　文山师范高等专科学校学报　　　　　　　　　　　2005年　第 3期