全 文 ：菝葜乙酸乙酯提取物抑菌作用研究
王 涛 ,薛淑好
郑州大学护理学院　郑州市　450052
　　摘要　目的　菝葜属百合科植物 , 为一种常用中药 ,目前所用的菝葜提取物多为其 40%的乙醇提取物 ,本
实验室首创了菝葜的乙酸乙酯提取工艺并对其进行了抑菌活性研究 , 旨在开发出一种更加符合现代中药要求的
新制剂。方法　使用液体试管二倍稀释法及小鼠体内抑菌实验 , 检测菝葜乙酸乙酯提取物在体内外对常见菌的
抑制作用。结果　菝葜乙酸乙酯提取物可以在体外有效抑制常见菌的增殖 , 并对染菌小鼠起到显著的保护作
用。结论　菝葜乙酸乙酯提取物可以在小剂量使用时与菝葜乙醇提取物大剂量使用起到相同的抑菌作用。
关键词　菝葜;抑菌;乙酸乙酯
中图分类号:R284.2　　文献标识码:B　　文章编号:1672-3422(2006)21-0023-03
GrowthinhibitionofEthylacetateExtractionof
SmilaxChinaL.onBacterium
WANGTao, XUEShuhao
TheNursingColegeofZhengzhouUniversity, Zhengzhou450052, China
ABSTRACT　Objective　ChineseherbSmilaxChinaL.(SCL)isaliliaceousplantwhichis
incommonuse.Now, thepreparationsofSmilaxareusualyextractedby40% ethanol, weinventa
newmeanstoextracttheefectivematerialinSmilaxandmakemuchresearchonitsactionofanti-
bacterium.Thisstudywasdesignedtoexplodreanewpreparation.Methods　TheefectofSCLextract
onbacteriumproliferationweredeterminedbymousemodelandbycultivatebacteriumin-vitro.Re-
sults　SCLextractshowedproliferationinhibitiononseveralbacteriumandtheextractofethylacetate
canobtainthesameefectonproliferationinhibitionofbacteriuminthelessdosage.Conclusion　Eth-
ylacetateextractionofSmilaxChinaL.canrestrainfamiliarbacteriumeficiencilywiththelessdose
thantheethanolextractionofSmilaxChinaL.
KEY　WORDS　SmilaxChinaL;Anti-bacterium;Ethylacetate
　　菝葜又名金刚藤 、金刚刺等 ,属百合科植物
(SmilaxChinaL.),为一种民间常用药物 ,主要应
用于妇科炎症的治疗[ 1] 。传统菝葜制剂主要使用
其乙醇提取物[ 2] ,由于有效成分低 ,服用量过大 ,
在一定程度上影响了其使用 。为进一步提高传统
中药菝葜的样标含量 ,富集有效成分 ,本实验室率
先改进了菝葜的提取工艺。经研究表明 ,菝葜乙
酸乙酯提取物为其治疗多种疾病的最有效部位 。
作者通过对菝葜乙酸乙酯提取物与菝葜乙醇提取
物进行体内 、外抑菌作用的对比研究。探讨小剂
量菝葜乙酸乙酯提取物与大剂量乙醇提取物对多
种临床常见菌的体内外抑制作用 ,旨在为其开发
应用提供依据。
1　材料与方法
1.1　材料　①实验所用金黄色葡萄球菌 、大肠杆
菌 、表皮葡萄球菌 、白色念珠菌 、表皮毛癣菌均由
华中科技大学同济医学院微生物教研室提供 ,实
验前一天 ,取上述金黄色葡萄球菌 1株 ,接种于
5ml肉汤的试管中 ,置 37℃的培养箱中培养 16h后
作为原液 。昆明种小鼠 190只 ,体重(20±2)g,其
中雌性 165只 ,雄性 25只 ,由华中科技大学实验动
物中心提供 。 ②菝葜乙酸乙酯提取物自备 ,生药
含量为 388.9g/kg;菝葜乙醇提取物由湖北省福人
制药厂生产 ,生药浓度为 20g/kg;实验时配成所需
浓度 。细菌培养基 、真菌培养基自备;诺氟沙星滴
眼液由扬州制药有限公司生产 , 批号:国药准字
·23·　JournalofMedicalForum　Vol.27　No.21　November2006　
0400601;氟康唑滴眼液由沈阳兴齐制药厂生产 ,批
号:国药准字 040101;头孢氨苄胶囊由广州白云山
制药集团生产 ,批号:国药准字 030812。
1.2　实验方法　①体外抑菌实验:取 12支灭菌
小试管 ,各放入灭菌培养基 2ml。在无菌条件下
吸取该提取物的初溶液 2ml放入第 1管中 , 混
匀;吸出 2ml加至第 2管…… ,如此稀释至第 10
管 ,弃去 2ml, 这时药物浓度分别为 0.75g/ml,
0.375g/ml, 0.188g/ml…… 0.0015g/ml, 第 11
管作空白对照 ,第 12管作阳性对照管 , 其中细
菌试验组加入浓度为 200μg/ml的诺氟沙星滴
眼液 1ml(浓度为 100μg/ml),真菌试验组加入
200μg/ml的 氟 康 唑 滴 眼 液 (浓 度 为 100
μg/ml)。各管中均加入 0.1ml10-3倍稀释的新
鲜菌液 , 在 37℃培养箱中培养 , 细菌培养 24h,
真菌培养 72h,之后观察有无菌类生长 。菌类不
生长的最高药物稀释度 , 即为该药物的最低抑
菌浓度(MIC)。同法求出菝葜乙醇提取物的最
低抑菌浓度 (MIC)[ 3] ,对两者进行比较 。 ②体
内抑菌实验:将备用的菌液取 1ml以 9ml5%
pepsin溶液稀释为 10-1倍 , 再取 10-1倍稀释的
菌液 1ml以 9ml5%pepsin溶液稀释为 10-2倍
…… ,以此类推 ,共制得菌液浓度为 10-1 , 10-2 ,
10
-3 , 10-4 , 10-5倍稀释的细菌悬液 5管 ,备用 。
取 50只昆明种小白鼠 , 雌雄各半;将小鼠随机
分为 5组 ,每组 10只 ,雌雄各半 。第 1组动物
腹腔注射 0.5ml浓度为 10-1倍稀释的细菌悬
液 ,第 2组动物腹腔注射 0.5ml浓度为 10-2倍
稀释的细菌悬液……以此类推至第 5组 。接种
后立即观察 48h内动物死亡数 。以死亡率 80%
～ 100%的菌液浓度作为最大致死量 MLD(最
好取 90%死亡率的菌液浓度 )。在测定金葡菌
对小鼠 MLD的基础上 ,开展菝葜乙酸乙酯提取
物与乙醇提取物对金葡菌感染小鼠保护作用的
研究 。取昆明种小白鼠 140只 ,雌性 , 随机分为
14组 ,每组各 10只 。将准备好的 MLD浓度的
金葡菌悬液以 0.5ml/只的量腹腔注入各组动物
体内 。设第 1 ～ 6组为菝葜乙酸乙酯提取物组 ,
剂量从高到低依次为 60g/kg, 55g/kg, 50g/kg,
45 g/kg, 40g/kg, 35g/kg;第 7 ～ 12组为菝葜乙
醇提取物组 ,剂量从高到低依次和菝葜乙酸乙
酯提取物组相同;第 13组为阳性头孢氨苄组 ,
剂量为 25mg/kg, 0.5ml/只灌胃给药;第 14组
为阴性对照组 , 不给任何药物 , 以蒸馏水灌胃
做对照 。各鼠于感染细菌前 1h与感染后 1h、
6h、 12h分别 按上述剂量进行等体 积 (0.5
ml/只)灌胃给药 , 观察动物在 7d内的死亡数
和各种症状 [ 3] 。
1.3　结果　菝葜乙酸乙酯提取物与乙醇提取物对
实验所用 54株临床分离菌的最低抑菌浓度见表
1。由表 1可知 ,菝葜乙酸乙酯提取物与乙醇提取
物的抑菌活性基本一致 。
表 1　体外抗菌实验结果
菌名 株数 试验药物 MIC50 MIC90 MIC范围
金黄色葡萄球菌 12 乙酸乙酯提取物 0.094 0.188 0.04～ 0.375
乙醇提取物 0.094 0.188 0.04～ 0.375
诺氟沙星 +++ +++
大肠杆菌 10 乙酸乙酯提取物 0.375 0.75 0.094～ 0.75
乙醇提取物 0.375 0.75 0.094～ 0.75
诺氟沙星 +++ +++
表皮葡萄球菌 11 乙酸乙酯提取物 0.188 0.375 0.094～ 0.75
乙醇提取物 0.188 0.375 0.094～ 0.75
诺氟沙星 +++ +++
白色念珠菌 15 乙酸乙酯提取物 0.094 0.375 0.047～ 0.75
乙醇提取物 0.094 0.375 0.047～ 0.75
诺氟沙星 +++ +++
表皮毛癣菌 6 乙酸乙酯提取物 0.094 0.188 0.04～ 0.188
乙醇提取物 0.094 0.188 0.04～ 0.188
诺氟沙星 +++ +++
　　阳性对照诺
氟沙星 、氟康唑组
均有较强的抑菌
活性。此外 , 本实
验所设的肉汤 (培
养基)对照管未见
细菌生长 ,但细菌
对照管细菌生长
良好 , 从而说明实
验结果可靠。
本实验所选
用的菌种均为临
床上较为常见的
致病菌 ,有革兰氏
阳性球菌 ,也有革
兰氏阴性杆菌和
妇科常见的白色
念珠菌 、毛癣菌 ,
菝葜乙酸乙酯提
·24· 　医药论坛杂志　2006年 11月　第 27卷　第 21期　
表 2　菝葜乙酸乙酯提取物与乙醇提取物对金葡菌感染小鼠的保护作用
实验药品 剂量(g/kg) 对数剂量(x) 动物数(n) 存活数 (n) 存活率(%) ED50(g/kg)
菝葜乙酸乙酯提取物 60 1.778 10 9 90 49.89
55 1.740 10 7 60
50 1.699 10 4 50
45 1.653 10 3 30
40 1.602 10 1 10
35 1.544 10 0 0
菝葜乙醇提取物 60 1.778 10 8 80 51.39
55 1.740 10 6 60
50 1.699 10 4 40
45 1.653 10 3 30
40 1.602 10 2 20
35 1.544 10 0 0
头孢氨苄 25mg/kg 10 10 100
生理盐水 10 0 0
取物与乙醇提取物对上述菌类均具有较好的抑菌
活性 ,与有关的文献报道菝葜的体外抑菌活性基
本一致 [ 4] 。由此说明菝葜乙酸乙酯提取物是该药
物的体外抑菌活性部位 。提示通过改进工艺可以
使在服用较少剂量药物的同时取得和临床常用药
物大剂量应用时相同的治疗效果。
通过最大致死量实验可知 ,金黄色葡萄球菌
对小白鼠的最大致死量 MLD为 10-1。在此基础
上进行菝葜乙酸乙酯提取物与乙醇提取物对金葡
菌的半数有效量(ED50)实验 ,结果见表 2。
从表 2可知:菝葜乙酸乙酯提取物的 ED50为
49.89g/kg(生药剂量),菝葜乙醇提取物的 ED50
为 51.39g/kg(生药剂量),两者无明显差异 ,说明
菝葜乙酸乙酯提取物与乙醇提取物体内抗菌作用
具有等效性 ,提示服用乙酸乙酯提取物较少剂量
可以取得与传统药物相同的治疗效果;提示菝葜
乙酸乙酯提取物是该药物的抑菌活性部位。此
外 ,阳性对照头孢氨苄胶囊组的存活率为 100%,
生理盐水组小鼠的存活率为 0%,说明该实验结果
可靠。
2　讨论
利用现代分离分析技术 ,采用体外培养以及
动物模型进行中药提取部位和主要成分的筛选 ,
是中药现代化研究的重要手段 。作者利用液体试
管二倍稀释法并结合动物模型对不同提取工艺的
菝葜提取物进行了抑菌试验 ,发现菝葜的乙酸乙
酯提取物具有较好的抑菌活性 ,具有深入研究开
发的价值 。
通过体外液体试管二倍稀释法和动物模型 ,
发现菝葜乙酸乙酯提取物与乙醇提取物对多种致
病菌均具有显著的抑制活性。对金黄色葡萄球菌
感染小鼠的半数有效量(ED50),菝葜乙酸乙酯提
取物与乙醇提取物分别为 49.89g/kg(生药剂量)、
51.39g/kg(生药剂量),两者无明显差异 。考虑到
菝葜乙酸乙酯提取物与乙醇提取物的生药浓度分
别为 388.9g/kg(生药)和 20g/kg(生药)。即:使
用乙酸乙酯提取物 ,患者只需服用传统制剂(乙醇
提取物)1/20的量就可以取得和传统制剂相当的
治疗效果 ,大大克服了其传统制剂服用量大 ,患者
不易接受的缺点 ,结果是令人满意的。
随后 ,我们将进一步对菝葜乙酸乙酯提取物
的活性成分进行追踪分离 ,鉴定其结构 ,进行系统
研究 ,阐明其抑菌活性的机制 ,为其开发应用提供
基础 。
参考文献
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技 , 1996, 3(5):16 2006-08-11收稿
·25·　JournalofMedicalForum　Vol.27　No.21　November2006