全 文 ：第 5 卷 第 7 期
2009 年 7 月
亚 太 传 统 医 药
Asia-Pacific T r aditional M edicine
Vo l.5 No.7
Jul.2009
收稿日期:2009-04-05
作者简介:李苏翠(1965-),女 , 湖南怀化人 ,湖南正清制药集团股份有限公司工程师 ,从事中医药理制剂研究;舒孝顺(1964-),
湖南人 , 长沙理工大学教授 , 博士 、硕士生导师 ,从事中药 、天然产物新药药理作用及其机制和剂型的研究。
菝葜根茎活性部位的抗炎作用及其
对环氧化酶活性影响的研究
李苏翠1 ,舒孝顺2＊ ,杨祥良3
(1.湖南正清制药集团股份有限公司 , 湖南 怀化 418000;
2.长沙理工大学 化学与生物工程学院 , 湖南 长沙 410076;
3.华中科技大学 药物研究所 ,湖北 武汉 430074)
摘　要:目的:研究菝葜水提醇沉物及其膜分离物对急性 、慢性炎症的抗炎作用。方法:采用蛋清致足肿胀 、甲醛
致足肿胀 、二甲苯致耳肿胀和醋酸致腹膜炎模型对菝葜不同提取物对急性 、早期炎症的抗炎作用进行了研究。结
果:在 100g ·生药/ kg 剂量下 ,提取物能显著降低蛋清诱导的大鼠足跖肿胀程度 , 明显抑制甲醛诱导的小鼠足肿
胀程度 、小鼠腹腔毛细血管通透性增高和二甲苯诱导的耳廓肿胀 , 对炎症晚期(慢性炎症)也有一定的抑制作用。
结论:菝葜对急性 、早期炎症具有明显的抗炎作用 , 对炎症晚期(慢性炎症)也有一定的抑制作用。
关键词:菝葜;提取物;抗炎作用;作用机理
中图分类号:R285　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1673-2197(2009)07-0016-06
　　菝葜为百合科菝葜属植物的根茎 ,具有消肿止痛、祛风利
湿 、活血化瘀及抗肿瘤等作用[ 1-4] ,临床单用或与其它药物配伍
用于各种炎症性疾病 ,如妇科盆腔炎症及炎症性包块、前列腺
炎 、类风湿性关节炎及各种肿瘤等 ,均取得满意疗效。
菝葜在目前临床上常单用或与其它药物配伍用于各种
炎症性疾病 ,尤其是妇科盆腔炎症及炎症性包块的治疗 ,但
对其治疗盆腔炎 、慢性盆腔炎等妇科疾病相关的药理学没有
进行过系统全面的研究 ,以致疗效不甚理想 ,影响了其在临
床上的进一步推广应用。因此有必要对相关的药理学进行
深入 、全面和系统的研究 ,进行二次开发以进一步提高疗效 。
菝葜(金刚藤)临床上虽早已用于治疗妇科盆腔炎症及
炎症性包块等疾病 ,并研制出了一系列产品如胶囊 、糖浆 、
颗粒 、片剂等 ,采用的是传统提取技术———水提醇沉工艺 。
为了给临床用药及对其进行进一步深度开发利用提供理论
与实验依据 ,本实验采用了炎症不同阶段 、不同机理的多种
相应动物炎症模型及细胞模型 , 对其抗炎作用及其机理进
行了较为系统的探讨研究。
1　材料与方法
1.1　实验仪器
UNICTM-UV-2102PC型紫外可见分光光度计(尤尼
柯(上海)仪器有限公司产品);电热恒温水浴锅(武汉琴台
医疗仪器有限公司);真空旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器
厂);101C-2型电热鼓风干燥箱和ZKF030电热真空干燥箱
(上海实验仪器有限公司);SWCJCO型超净工作台(苏州
净化仪器设备有限公司);Z323K 型冷冻台式高速离心机
(HERmLE Corporation , Germany);CO2 培养箱(New
Brun sw ick Scientific Corporation , USA);BCD-223G 低温
冰箱(Ronshen Corporation ,USA);毛细管放大体积测定仪
(自制);YXQ-SG41-280电热手提压力蒸汽消毒器(上海医
用核子仪器厂);电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有
限公司)和超滤杯。
1.2　化学试剂
细菌脂多糖(LPS)Sigma公司产品;小牛血清 、RPMI-
1640为 Gibco(USA)产品;NO测定试剂盒(南京建成生物
工程公司产品);花生四烯酸(arachidonic acid , AA)、TBX
和 PGE2 放免试剂盒(苏州大学医学院血拴室提供);卵磷
脂(PC)(北京海淀区微生物制品厂生化试剂);Evans Blue
和印度墨汁购自上海化学试剂采购供应站;链霉素 、氨苄青
霉素是重庆第六制药厂产品;乙酰水扬酸 (A cetylsalicylic
acid ,ASA)、吲哚美辛(indomethacin)、醋酸 、乌来糖 、琼脂 、
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甲醛 、二甲苯 、DMSO 、甘氨酸 、硼酸和去氧胆酸钠等均为国
产分析纯试剂。
1.3　实验材料
菝葜药材(根茎),产于湖南 ,由湖北午时药业有限公司
提供。
1.4　实验动物
健康纯种雌性昆明小鼠 ,体重(21±1.5)g ,健康纯种雌
性 Sp rague-Daw ley大鼠 ,体重(230±20)g ,均由武汉市卫
生防疫站医学实验中心实验动物房提供 ,饲养于 12h/12 h
明暗循环的房间 ,并保持 25℃恒温及 55%的相对湿度 。
1.5　动物分组
蛋清抗炎实验中 ,取体重(230 ±20)g 健康纯种的
Sprague-Daw ley雌性大鼠 ,将其随机分组 ,每组 8 只(n =
8),各组大鼠于实验前禁食 18 h 。正常对照组 1(Cont rol
group):灌胃(i.g)生理盐水(0.9%, 10 mL/kg);乙酰水扬
酸阳性对照组 2(A cetylsalicylic acid 200 mg/kg i.g.);实验
组 3 、4依此为剂量 50g生药/ kg i.g 和 100 g生药/kg i.g.
的菝葜水提醇沉物组。其它抗炎实验中 ,均取健康纯种雌
性昆明小鼠 ,体重(21±1.5)g ,将其随机分组(同上),每组
10只(n=10),饲养及处理同上 。
1.6　实验方法
1.6.1　新鲜鸡蛋清诱发大鼠足跖炎症模型的制备与检测
参考文献[ 5-7]所述方法稍加修改 ,将 32 只 Sprague-Daw-
ley雌性大鼠随机分为 4组(n=8),各组动物每天分别给药
1次 ,连续 7 d 。每鼠左后脚爪正面上端用记号笔作一清晰
横线 ,以排水法测鼠爪体积 ,末次给药 l h 后 ,在小鼠的右足
跖皮下注射 10%新鲜鸡蛋清溶液(0.10 mL/只)致炎 ,然后
于 0.5、1 、2 、3 、4和 5h 测定致炎足的足容积。肿胀程度表
示为致炎前与致炎后的右足容积差 ,肿胀抑制率以下式表
示:
肿胀抑制率=对照组足容积-给药组足容积对照组容积 ×100%
以肿胀程度和药物对肿胀的抑制率为指标评价炎症效
果 。
1.6.2　二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀模型的制备与检测　参
考文献[ 8-10]所述方法稍加修改 ,将 40只雌性昆明小鼠随
机分为 4组(n=10),各组动物每天分别给药 1 次 ,连续 7
d ,末次给药 l.5 h 后 ,将 20μL二甲苯均匀涂抹于小鼠右耳
廓两面致炎 ,以左耳作对照。0.5 h后将小鼠脱颈椎处死 ,
沿耳廓基线剪下两耳并以直径 9 mm打孔器分别在左右耳
对称部位打下圆形耳片 ,电子天平称重 ,计算肿胀度和肿胀
抑制率 ,小鼠耳廓肿胀程度以每鼠左右耳片重量之差平均
值来表示 ,肿胀抑制率以下式表示:
肿胀抑制率=对照组肿胀程度-给药组肿胀程度对照组肿胀程度 ×100%
1.6.3　甲醛致小鼠足肿胀模型的制备与检测　参考文献
[11-12]所述方法稍加修改 ,将 40只雌性昆明小鼠随机分
为 4组(n=10),各组动物每天分别给药 1次 ,连续 7d ,末次
给药 l h后 ,小鼠右足注射 0.05 mL 2.5%甲醛致炎 ,以左
足作对照。致炎 1 h 后将小鼠脱颈椎处死 ,沿踝关节上
0.05mm 处剪下双足 ,电子天平称重 ,计算肿胀度和肿胀抑
制率 ,小鼠足肿胀程度以每鼠左右足重量之差平均值来表
示 ,肿胀抑制率以下式表示:
肿胀抑制率=对照组肿胀度-给药组肿胀度对照组肿胀度 ×100%
1.6.4　腹腔注射醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高模
型的制备与检测　参考文献[ 13-14]所述方法稍加修改 ,将
40只雌性昆明小鼠随机分为 4组(n=10), 将各组动物每
天分别给药 1次 ,连续 7 d 。末次给药 l.5h后 ,每只小鼠尾
静脉注射 2%Evans Blue生理盐水水溶液 0.1 mL/20g ,并
立即腹腔注射 0.7%醋酸溶液(0.1 mL/10g)致炎 , 30 min
后颈椎脱臼处死小鼠 。剖开腹部 ,用 5 mL 生理盐水反复
冲洗腹腔 ,吸管吸出洗涤液 ,合并洗涤液后再以生理盐水稀
释 ,最后定容到 10 mL ,摇匀 、1000r/min离心 10 min ,取上
清 ,在 590 nm处测定其吸光度值(A590值),对小鼠腹腔毛
细血管通透性增高的抑制率表示如下:
抑制率=生理盐水组 A590 -空白组 A590平均含量生理盐水组 A590 ×100%
1.6.5　琼脂植入致小鼠肉芽肿形成模型的制备与检测　
参考文献[ 15-16]所述方法稍加修改 ,将 40 只雌性昆明小
鼠随机分为 4 组(n=10)。给药 lh后 ,在每小鼠背中线同
一部位将毛剪尽 ,再浅麻(腹腔注射 10%乌来糖 0.15 mL/
20g),背部皮下无菌快速注射 0.2 mL 2%琼脂 ,各组动物
每天分别给药 1次 ,连续 9 d 。第 9天将小鼠断头处死 ,仔
细剥离并取出各组动物的琼脂肉芽组织 ,剔除结缔组织 ,电
子天平称重 ,其重表示肉芽肿重量 ,对肉芽肿的抑制率以下
式表示:
抑制率=
对照组肉牙肿平均重量-给药组肉牙肿平均重量对照组肉牙肿平均重量 ×100%
1.6.6　菝葜对血小板COX-1活性的影响　血小板制备及
COX-1活性测定参照文献[ 17-19]方法稍加修改。
血小板制备:大鼠心脏抽血(14:1-0.1M EDTA 抗
凝), 1000 r/min离心 8 min ,吸取富含血小板血浆 , 3000 r/
min离心 10 min ,去上清 ,沉淀用 EDTA-PBS洗涤 , 2500 r/
min离心 10 min ,去上清 ,血小板用 PBS悬浮 。
提取物对血小板 COX-1活性的影响:离心后的血小板
用 PBS 调整浓度为 106 个 l/mL ,再接种 96孔培养板(0.2
mL/孔),每处理组重复 3孔 ,1号为空白组:只加溶剂;2号
为吲哚美辛组:终浓度 1g/mL;3-5号依次为 1 、10 、100 g/
mL的提取物组 。接着置 37℃, 5%CO2 下培养 10 min ,再
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加钙 、镁离子溶液各 2 μL ,AA 2 μL ,继续培养 40 min ,加
20 μL 冰乙酸终止反应 , 1000 r/min离心 10 min ,上清-20℃
保存待测 ,用 TXB2 放免试剂盒测 COX-1 代谢产物 TXB2
含量 ,对 COX-1活性的抑制率以下式表示:
抑制率=
空白对照组 TXB2 平均含量-给药组 TXB2 平均含量空白对照组平均含量 ×100%
1.6.7　菝葜对腹腔巨噬细胞 COX-2活性的影响　鼠腹腔
巨噬细胞的制备及 COX-2活性的测定参照文献[ 20-24]方
法稍加修改 。
鼠腹腔巨噬细胞的制备:大鼠颈椎脱臼处死 , 75%乙醇
浸泡 3 min ,腹腔注射 6mL D-hanks 液 ,再轻揉腹部 5 min ,
吸取腹腔液 , 1000 r/min离心 10 min ,去上清 ,再用 PBS 溶
液洗涤 ,1000 r/min离心 10 min ,去上清 ,沉淀即为腹腔巨
噬细胞 。
巨噬细胞的培养及处理:离心后的腹腔巨噬细胞加无
血清 RPM I-1640培养液 ,调整细胞浓度为 106 cell/mL ,再
接种 96孔培养板(0.2 mL/孔), 37℃, 5%CO2 下培养 4 h ,
吸去培养液 ,用 5%血清 RPM I-1640完全培养液洗涤 ,去上
清 ,再加 5%血清 RPM I-1640完全培养液 0.2 mL/孔 ,每处
理组重复 3孔 , 1 号为空白组:只加溶剂;2-6 号分别加
LPS(终浓度均为 1 g /mL),其中 2号为对照组 , 3号为吲
哚美辛组:终浓度 0.4g/mL , 3-6号依次为 1 、10 、100 g/
mL的提取物组。
(1)提取物对 COX-2蛋白表达的影响 。
经上述处理后 ,37℃, 5%CO2 下培养 6 h ,再加花生四
烯酸 2 μL ,继续培养 40 min ,1000 r/min离心 10 min ,上清
液-20℃保存待测 ,用 PGE2 放免试剂盒测 COX-2代谢产物
PGE2 含量 ,对 COX-2蛋白表达的以下式表示:
抑制率=
对照组PGE2 平均含量-给药组 PGE2 平均含量对照组PGE2 平均含量-空白组 PGE2 平均含量×100%
(2)提取物对 COX-2蛋白表达的影响 。
各组加入 DMSO 、LPS后(未加待测物),先 37℃, 5%
CO2 下培养 6 h ,加各提取物 ,继续培养 40 min ,再加花生四
烯酸 2 μL ,继续培养 40 min ,1000 r/min离心 10 min ,上清
液-20℃保存待测 ,用 PGE2 放免试剂盒检测 COX-2代谢
产物 PGE2 含量(按试剂盒说明操作),对 COX-2 蛋白表达
后活性的抑制率以下式表示:
抑制率=
对照组PGE2 平均含量-给药组 PGE2 平均含量
对照组PGE2 平均含量-空白组 PGE2 平均含量×100%
1.7　统计学处理
所有实验结果均以 x±s表示 ,组间差异的显著性分析
采用 t检验法 ,当 P<0.05时 ,则认为两数据间有显著性差
异。
2　结果
图 1　菝葜提取物对蛋清致足跖肿胀的抑制
2.1　菝葜对急性炎症的影响
2.1.1　菝葜对新鲜鸡蛋清诱发大鼠足跖炎症的影响　对
足跖肿胀的抑制率结果见图 3.1 ,结果显示:菝葜低剂量组
自 100min后对足跖肿胀的抑制率一直高于阳性对照(SW1
自 100 min至 240 min),而高剂量组自致炎后对足跖肿胀
的抑制率就一直明显高于阳性对照 ,抗炎效果突出。
本研究实验结果表明提取物各剂量均能显著抑制蛋清
性足跖肿胀 ,有十分明显的抗炎作用 ,且显著强于阳性对照
组;菝葜提取物对足跖肿胀抑制效果在不同剂量组之间表
现出一定的剂量依赖效应。
2.1.2　菝葜对二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀的影响
药物对二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀的作用以耳廓肿胀程
度 、肿胀抑制率为指标来进行 。菝葜对二甲苯诱导小鼠耳
廓肿胀的影响结果见表 1 。
与生理盐水组比较 ,菝葜提取物组以及阳性对照小鼠
耳廓肿胀程度均有较大幅度下降(22.31%～ 54.62%),差
异显著 ,其中高剂量(100 g生药/kg)组有极显著差异 。结
果表明提取物均能显著抑制二甲苯诱导的小鼠耳廓肿胀 ,
并有显著的剂量依赖效应 ,其中高剂量的抑制率高达到
50.77%。
表 1　菝葜对二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀的影响
G roups Dose(g/ kg)No.of mice Edema w eight(mg) Inhibi ti on(%)
Saline 10 0.026±0.001
ASP 0.2 10 0.012±0.003＊＊ 54.62
SM1 50 10 0.019±0.002＊ 22.31
SM2 100 10 0.0130±0.003＊＊ 50.77
2.1.3　菝葜对甲醛致小鼠足肿胀的影响　菝葜对甲醛诱
导小鼠足肿胀的抑制作用以足肿胀程度 、肿胀抑制率为指
标进行评价 。菝葜对甲醛致小鼠足肿胀的影响见表 2 。
与生理盐水组比较 ,菝葜各组以及阳性对照小鼠足肿
胀程度均有较大幅度下降(27.27%～ 58.36%),差异显著 ,
其中菝葜高剂量(100 g生药/kg)差异极显著 。实验结果表
明提取物能显著抑制甲醛诱导的小鼠足肿胀 , 并有显著的
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剂量依赖效应。
表 2　菝葜对甲醛诱导小鼠足肿胀的影响
Groups Dose(g/ kg)No.of mice Edema w eigh t(m g) Inhibit ion(%)
S aline 10 0.196±0.017
ASP 0.2 10 0.082±0.022＊＊ 58.36
SM1 50 10 0.142±0.002＊ 27.27
SM2 100 10 0.112±0.015＊＊ 42.85
2.1.4　菝葜对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影
响　腹腔注射 0.7%醋酸使小鼠腹腔毛细血管通透性增
高 ,Evans Blue自毛细血管透入腹腔的量就会增多 ,其吸光
度也会相应增大。菝葜各组对醋酸诱导毛细血管通透性增
高的抑制作用以吸光度 A590 、透性增高的抑制率为指标来
进行评价。菝葜对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的
影响结果见表 3 。
与生理盐水组比较 ,菝葜组以及阳性对照组的 A590
均有较大幅度降低(20.22%～ 41.57%),并有显著性差异 ,
其中高剂量(100g 生药/kg)组差异极显著 ,对小鼠腹腔毛
细血管通透性的抑制甚至比阳性对照还高。
Table实验结果显示:提取物能明显抑制醋酸诱导的
小鼠腹腔毛细血管通透性增高 ,剂量增高 1倍 ,其相应的抑
制效果也增加 1倍以上 。
表 3　菝葜对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响
Groups Dose(g/ kg)No.of mice A 590 Inhibit ion(%)
S aline 10 0.334±0.014
ASP 0.2 10 0.201±0.010＊＊＊ 39.95
SM1 50 10 0.275±0.014＊ 17.70
SM2 100 10 0.195±0.012＊＊＊ 41.57
2.2　菝葜对慢性炎症的影响 ———对琼脂植入致小鼠肉芽
肿形成的影响
皮下注射 2%琼脂以诱导肉牙肿的形成 ,生理盐水对
照组形成肉牙肿的诱导作用较明显 。各给药组高剂量(100
g生药/kg)及阳性对照组琼脂肉牙肿则明显减轻。菝葜对
肉牙肿形成的抑制作用结果见表 4。
表 4　菝葜对肉牙肿形成的影响
Groups Dose(g/ kg)No.of mice Granuloma(mg) Inhibit ion(%)
S aline 10 0.264±0.008
ASP 0.2 10 0.215±0.003＊＊ 18.75
SM1 50 10 0.245±0.005 7.56
SM2 100 10 0.229±0.012＊ 13.54
　　菝葜对肉牙肿形成的抑制作用以琼脂肉牙肿重量及对
肉牙肿增重的抑制率为指标来进行评价 。
与生理盐水组比较 ,阳性对照组小鼠琼脂肉牙肿重量
减轻较明显 ,达到极显著程度 ,菝葜低剂量组琼脂肉牙肿重
量虽有减轻 ,然而没有显著性差异 ,但统计学分析表明高剂
量(100g生药/ kg)组能显著减少琼脂肉牙肿重量 , 说明菝
葜提取物对慢性炎症有显著的抑制作用 。
2.3　菝葜对组织细胞中环氧化酶(COX)的影响
2.3.1　菝葜对血小板COX-1活性的影响　菝葜提取物对
COX-1活性的抑制作用以所检测的血小板中花生四烯酸
代谢产物的衍生物 TXB2 的量及对它的抑制率为指标来进
行评价。菝葜对血小板中 TXB2含量/COX-1活性的影响
结果见表 5。
与生理盐水组比较 ,经统计学分析表明:吲哚美辛阳性
对照组的 T XB2 平均含量降低十分明显 ,达到极显著程度 ,
菝葜组 TXB2 也极显著降低:1 g/mL剂量即能极显著抑制
COX-1活性 , 10 g/mL 剂量即可抑制 COX-1 51.32%的活
性 , 100 g/mL时抑制率高达 73.39%,并呈明显的剂量依
赖效应。
表 5　菝葜对血小板中 TXB2 含量/COX-1活性的影响
G roups Dose(g/mL) n TXB2 concent ration(pg/mL) Inhibi ti on(%)
Cont rol 3 538.16±15.31
I 0.4 3 270.14±9.57＊＊＊ 49.8
M1 1 3 387.62±5.87＊＊ 27.97
M10 10 3 261.96±5.87＊＊＊ 51.32
M100 100 3 143.22±3.83＊＊＊ 73.39
2.3.2　菝葜对腹腔巨噬细胞 COX-2活性的影响　(1)提
取物对 COX-2蛋白表达的影响。菝葜提取物对 COX-2蛋
白表达的抑制作用以所检测的大鼠腹腔巨噬细胞中 COX-
2催化的花生四烯酸代谢产物 PGE2 的量及对它合成的抑
制率为指标来进行评价。菝葜对血小板中 PGE2 含量/
COX-2蛋白表达的影响结果见表 6 。
与生理盐水组比较 ,经统计学分析表明:吲哚美辛及菝
葜组均能极显著降低巨噬细胞中 LPS 诱导的 PGE2 合成;
菝葜提取物 1 g/mL及以上剂量即能极显著抑制 COX-2蛋
白表达 , 10 g/mL剂量其抑制率达 50.0%以上 , 100 g/mL
剂量时则高达 74.0%以上 , 提取物抑制 COX-2蛋白表达
呈明显的剂量依赖效应。
表 6　菝葜对腹腔巨噬细胞 PGE2 含量/
COX-2 蛋白表达的影响
G roups Dose(g/mL) n PGE2 concent ration(pg/mL) Inhibi ti on(%)
Cont rol 3 15.28±0.07
Blank 3 3.84±0.15
I 0.4 3 7.38±0.14＊＊＊ 69.07
M1 1 3 11.26±0.42＊＊＊ 35.17
M10 10 3 9.34±0.19＊＊＊ 51.95
M100 100 3 6.72±0.13＊＊＊ 74.84
　　(2)提取物对 COX-2蛋白表达后活性的影响。
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表 7　菝葜对腹腔巨噬细胞 PGE2 含量/
COX-2蛋白表达后活性的影响
Groups Dose(g/mL) n PGE2 concent ration(pg/mL) Inhibit ion(%)
Cont rol 3 4.16±0.59
Blank 3 27.28±0.43
I 0.4 3 25.46±0.66 7.86
M1 1 3 18.51±2.49＊ 37.91
M10 10 3 14.52±0.16＊＊＊ 55.19
M100 100 3 11.08±0.83＊＊＊ 70.07
　　菝葜对 COX-2蛋白表达后活性的抑制作用以所检测
的大鼠腹腔巨噬细胞中 PGE2的量及对它合成的抑制率为
指标来进行评价 。菝葜对血小板中 PGE2 含量/COX-2 蛋
白表达后活性的影响结果见表 7 。
与生理盐水组比较 ,经统计学分析表明:吲哚美辛虽能
降低巨噬细胞中 LPS 诱导的 PGE2 合成 ,但降幅很小 ,没有
显著性差异;但菝葜各组均能显著降低巨噬细胞中 PGE2
合成:菝葜提取物 1g/mL及以上剂量即能显著抑制 COX-2
蛋白表达后的活性 ,10 g/mL及以上剂量极显著 ,抑制率超
过 55.0%, 100 g/mL剂量时更为强烈 ,抑制率高达 70.0%
以上 , 提取物对 COX-2蛋白表达后活性的抑制呈明显的
剂量依赖效应。
3　讨论
炎症是活体组织对损伤因子所发生的防御反应 ,外源
性和内源性损伤因子均可引起机体组织细胞各种各样的损
伤性变化 ,与此同时机体的局部和全身也发生一系列复杂
反应 ,以局限和消灭损伤因子 ,清除和吸收坏死组织细胞 ,
并通过实质和间质细胞的再生修复损伤 ,这种机体的损伤
和对损伤的复杂反应构成炎症现象 。其病理变化首先是致
炎因子引起局部组织变质 ,炎性介质活化 ,毛细血管扩张及
通透性增大 ,炎症部位出现渗出 、水肿;随后炎症部位发热 、
致痛;最后炎症区域肉芽组织增生和修复[ 25] 。
炎症早期主要以毛细血管扩张和通透性增高 、渗出水
肿等病理变化为主 [ 26] 。足跖肿胀炎症模型是模仿研究此
期病理变化的常用抗炎模型 ,多种化学物质如蛋清 、甲醛 、
等均可刺激小鼠导致足爪红肿 ,根据其发展 、消退的快慢常
分为急性 、亚急性或慢性足肿胀 ,急性者于数十分钟至几个
小时内炎症迅速发展又迅速消退;慢性者数日至十日以上
才达到炎症高峰 ,持续数十日;而亚急性介于二者之间 ,持
续数日 。为了研究菝葜的抗炎作用 ,了解其抗炎机理 ,本文
利用与炎症过程发展阶段相应的多种动物炎症模型及细胞
模型对其进行了探讨。
新鲜鸡蛋清性大鼠足肿胀炎症模型和甲醛致小鼠足肿
胀炎症模型均为研究早期炎症病理的常用模型 ,其病理变
化主要为急性炎性渗出水肿 ,炎症十几分钟即发展到高峰 ,
而且对药物反应灵敏 ,并有较好的重现性 ,大鼠足表现出的
红肿(毛细血管扩张 、渗出)、热(血流加速)、痛(水肿及炎性
介质的刺激)等常与临床某些炎症很相似 。醋酸会引起毛
细血管扩张及通透性增加 ,小鼠腹腔内注射 0.7%醋酸溶
液 ,H +将刺激腹腔内毛细血管使其通透性增高 ,血管内一
些血液液体成分就会渗入腹腔 ,当静脉内注射 Evan2 Blue
染料时 ,它就与血浆蛋白瞬间结合 ,并渗入腹腔 ,腹腔洗出
液中染料浓度(A590大小)即可反映毛细血管的通透性 ,可
以间接表示毛细血管透性的高低 。二甲苯性小鼠耳廓肿胀
属非特异性炎症 ,其强烈的局部刺激作用导致毛细血管通
透性亢进 ,主要表现为肿胀 、渗出 ,也是一种急性炎症模型。
蛋清致炎实验和甲醛致炎实验结果表明:菝葜提取物
均能显著抑制大鼠蛋清性足跖肿胀和甲醛诱导的小鼠足肿
胀;醋酸致腹膜炎和二甲苯致耳肿胀模型也表明菝葜对醋
酸诱导的小鼠腹腔毛细血管通透性增高及二甲苯诱导的小
鼠耳廓肿胀有显著抑制作用 ,并有显著的剂量依赖效应。
上述抗炎实验有力地说明菝葜提取物对急性 、早期炎症具
有很好的抗炎作用。
纤维组织增生和肉芽屏障的形成是晚期炎症的特征之
一 ,琼脂致肉芽模型就是一种筛选抑制炎症后期(增殖期)
药物的慢性炎症动物模型 ,皮下注射琼脂主要诱导产生与
炎症后期病理变化相似的肉芽组织增生 ,实验证明菝葜提
取物不同剂量均显示了不同程度的抑制琼脂诱导的小鼠肉
芽肿形成 ,其中高剂量的抑制作用较为显著 ,进一步表明菝
葜对炎症晚期(慢性炎症)也有一定的抑制作用。
菝葜对炎症反应的多种环节 ,如炎性渗出 、炎性介质的
释放均有影响 ,能较强抑制多种致炎剂所致的早期急性渗出
性炎症反应 ,减轻组织损害 ,控制炎症发展;同时能抑制肉芽
组织增生 ,提示菝葜对炎症过程的 3个阶段均有较好的抑制
效果 ,具有十分明显的抗炎效应 。急性炎症的血管扩张 、透
性增加和白细胞渗出的发生机制 ,是炎症发生机制的中心环
节 ,这些炎症反应主要是通过一系列炎症介质的介导来实现
的 ,本实验的巨噬细胞和血小板培养实验结果显示:提取物
能显著抑制COX-1活性 ,从而强烈抑制 TXB2等炎性介质的
产生;对COX-2 ,各提取物既能显著抑制 COX-2蛋白表达 ,
又能强烈抑制COX-2蛋白表达后的活性 ,由于对 COX-2的
强烈抑制 ,因而大大降低了巨噬细胞对 PGE2 的合成和释
放 ,使炎症部位 PGE2的量显著减少 , 由于对花生四烯酸代
谢这一关键环节的抑制 ,最终大大减少了炎症部位炎性介质
的量 ,从而减轻炎症反应 ,达到抗炎作用。
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(责任编辑:胡　静)
Affects on COX-1 、2 Activities and Anti-inflammations
Effects of the Smilax.China L Extraction
Li Sucui1 ,Shu Xiaoshun2 ,Yang Xiangliang 3
(1.Zheng Qing Pharmacy G ROUP CO.LTD., Huaihua 418000 , China;2.Co llege of Biolog y &Chemist ry ,
Chang sha U niversi ty of Science &Technolog y , Changsha 410076 , Hunan , China;
3.Insti tute of M ateria M edica , Huazhong University of Science and Techno logy , Wuhan , 430074 , China)
Abstract:Objective:To study anti-inflammations on acute inflammation and chronic inflammation for Smilax.china L.Methods:
The rat paw edema induced by egg-albumin , the ear edema and the fo ot edema of mice induced by xy lene and formaldehyde , the
increase o f vascular permeability induced by intrape ritoneal injection of 0.7 % ace tic acid in mice w ere used to study on the acute ,
ea rly inflammations and chronic inf lammation fo r the extr act of s.china L.Results:The ex tract(100g.raw medicine /kg)can sig-
nificantly decrease the ra t paw edema for the inhibition effects on foo t edema , inhibit the ea r edema , vascular permeability increase
and fo ot edema o f mice and also display a cer tain ex tent inhibition effec ts on the g r anuloma induced by aga r in mice that also exhibit
their anti-inflammator y effects on the chronic inflammation.Conclusion:Smila x.china L
Key words:Smilax.china L;Ex traction;Anti-inflammations.
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