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( 20() 2
一 1 1 一 2 9 收稿 )
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A加atr ct hT e p er v e n t iv e a n d th e ar p e u t ie e fe e t s o f s a p o n in for m rT ib u l哪 ze er s t r is L . o n d ie t一 in d u e e d h y p e lr i P id e m ia i n m ie e
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菠葵对小鼠佐剂性关节炎作用的研究
吕永宁 , 陈东生 , 邓俊刚 2 田连起 ,
( 1
. 华中科技 大学同济医学院附属协和 医院 , 武 汉 43 0 03 0 ; 2 . 华中科技大学同济医学院 , 武汉 43 0 3 ;0
3
. 湖北中医学院药学系 , 武汉 4 3 0 0 61 )
摘要 目的 :研究援莫对佐剂性关节炎 ( a duj 二 it , ar thr it 、 , A )A 小鼠的治疗作用及作用机理 。 方法 :观察菠葵
佐剂性关节炎 ( A )A 小鼠给药后继发性足肿胀 、胸腺系数 (胸腺 /体重 ) 、脾系数 (脾 /体重 ) 、 T 细胞亚群 、 B 细胞 、 自
然杀伤细胞 ( N K ) 的变化 。 结果 :获葵 ( 90 、 180 9 · k g 一 , )灌胃给药能明显抑制 A A 小鼠继发性足肿胀 ,减轻胸腺和脾
脏重量 ,减少 CD 4 十 T 细胞 , 增加 C D S ` T 细胞 ,降低 CD 4 / CD 。 , 极少影响 B 细胞 、 NK 细胞 。 结论 :菠葵可能通过调节
细胞免疫减轻 A A 小鼠继发性足肿胀 ,但不同于地塞米松 , 不影响体液免疫 。
关键词 筱羹 抗炎作用 佐剂性关节炎 免疫细胞亚群
菠葵为百合科筱奠属植物 Sm iaxl ch ian L . 的根
茎 ,具有消肿止痛 、祛风利湿 、 活血化疲及抗肿瘤作
用 ,临床单用或与其它药物配伍用于各种炎症性疾
病 ,如妇科盆腔炎及炎症性包块 、前列腺炎 、 类风湿
性关节炎及各种肿瘤等 , 均取得一定疗效 。 现代药
理学研究证实获奠具有抗炎作用 、 抑菌作用 、 抗肿瘤
作用 、类激素作用 、抗诱变作用 〔4 一 6〕 。 本实验选择小
鼠佐剂性关节炎模型来研究援莫的抗炎作用 ,现将
结果报道如下 。
仪器与材料
实验动物 昆明种小鼠 ( km 19刁 5 2 ) , 2 0 一 2 5
g
,
5 6 只 , 由华中科技大学同济医学院实验动物中心
提供 。
1
.
2 药品与试剂 菠莫 : 采自武昌金水镇 , 由笔者
·
34
·
鉴定 ;地塞米松肠溶片 : 浙江医药股份有限公司仙居
制药厂生产 ,批号 : 0 0 0 7 0 ;6 氢氧化钠 、 甲醇均为分析
纯 ;0 . 9 % 氯化钠注射液 :湖北滨湖双鹤药业有限公
司生产 ; F r e u n d ` s 完全佐剂 : Si g m a 公司生产 , 批号 :
10 90 6 14 ;硫喷妥钠粉针剂 : 上海新亚药业有限公司
生 产 ; p I T C a n t i一 m o u s e C D 3 e 1 1习0 3 1 、 IP T C a n t i -
m o u s e C D
4 1 2习0 4 2 、 P IT C a n t i一m o u s e C D s a 12刁 0 8 1 、
PE
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m o u s e C D
1 9 1 2刀 1 9 2 、 P IT C a n ti 一m o u s e C D 一6
1 1习 1 61 均为美国 E B 公司产品 。
1
.
3 仪器 流式细胞仪 : 美国 B e e t o n D i e k i n s o n 公
司生产 。
取援莫饮片 16 . 5 k g ,用 p H S 一 9 的氢氧化钾溶
液煎煮两次 , 合并煎煮液调 PH 至 6 左右 , 浓缩至
4 0 0 0 m l
,取 2 0 0 0 m l ,蒸干得药膏 19 2 9 ,取适量用蒸
中药材第 26 卷第 5 期 20 3 年 5 月
DOI : 10. 13863 /j . i ssn1001 -4454. 2003. 05. 015
馏水配制成水煎液高浓度组 (l ml 相当于生药 6
g )
、 低浓度组 (l ml 相当于生药 3 9 )。
2 实验方法
取小 鼠28 只 ,随机分为 4 组 ,见表 1 ,每组 7 只 。
每只小鼠右后足趾皮下注射 rF eu dn ’ S 完全佐剂 0 . 1
m l
, 制备 A A 模型 。 分别灌 胃 0 . 9 % 氯化钠注射液
( A 组 ) 、 15 0 9 · k g 一 ,水煎液 ( B 组 ) 、 9 0 9 · k g 一`水煎
液 ( C组 ) 、 1 m g · k g ” 地塞米松水溶液 ( D 组 ) 〔7〕 ,每
日一次 ,连续 30 天 , 分别在第 12 、 16 、 20 、 24 天测量
各组小鼠左 、右后足趾厚度 ,并计算肿胀度 (左右后
足趾厚度差 , △ m l ) 。 第 30 天麻醉后摘眼球取血 ,
摘取并分离脾脏及胸腺 ,称重 ,用流式细胞仪测血液
中 C D 4 + 、 CD : + T 细胞 、 C D 19 + B 细胞 、 C D ,。 + N K 细
胞 ,并计算 C D 4 / C D: 和免疫器官系数 (脏器重 /体
重 ) 。 数据统计采用均值 士标准差表示 ,组间比较
采用 t 检验 。
3 实验结果
3
.
1 对 A A 小 鼠足趾肿胀的影响 筱葵水煎液
高 、低剂量灌胃给药均能明显抑制 A A 小鼠继发性
足肿胀 (与模型组比较 P < 0 . 01 ,见表 l ) 。
3
.
2 筱莫提取物对 A A 小鼠免疫细胞的调节作用
菠莫水煎液小鼠 CD 4 细胞低于模型组 , C D 4 / CD :
比值测量显示筱葵水煎液低剂量组与模型组比较有
显著差异 ( P < 0 . 05 ) 。 菠葵提取物能提高 C D I冬B 细
胞百分率 , c D+eI N K 细胞变异系数太大 , 各组间没有
统计学差异 ,见表 2 。
3
.
3 搜葵提取物对 A A 小鼠胸腺与脾脏作用 筱
莫提取物高 、低剂量组胸腺系数 ( 胸腺/ 体重 ) 均低
于模型组 ( P < 0 . 0 5 ) 。 见表 3 。
4 讨论
表 , 菠葵对 A A 小鼠继发性炎症反应的影响 (天土 s , n 二 7)
组别 给药后足趾肿胀度 (
△ m l)
第 12 天 第 16 天 第 20 天 第 24 天
模型组 ( A )
高剂量菠葵组 ( )B
低剂量菠葵组 ( )C
地塞米松组 ( D )
0
.
13 09 士 0 . 0 1 13
0
.
14 53 士 0 . 0 118
0
.
139 1 士 0 . 008 1
0
.
139 3 士 0 . 0 124
0
.
10 34 士 0 . 02 95
0
.
05 87 士 0 . 0 159 巾
0
.
06 77 士 0 . 0 10 7
0
.
05 74 土 0 . 0 16 2 *
0
.
0 8 13 土 0
.
0 135 0
.
0 934 土 0 . 02 4 2
0
.
04 26 土 0
.
0 1 5 4
协 .
0
.
04 16 士 0
.
0 208
, ,
0
.
04 84
士 0 . 0 1 96 申 . 0 . 0 549 士 0 . 0 1 18二
0
.
04 3 1 土 0
.
0 1 53
申 申
0
.
0 324 士 0
.
0 1 19
巾 .
0
.
10 34 士 0 . 0 16 8
0
.
05 59 士 0 . 02 4 9 启 中
0
.
05 9 1 土 0 . 0 11 6二
0
.
037 4 土 0 . 0 15 6 申 .
与模型组 比较 , * 为 P < 0 . 05 , ’ . P < 0 . 01
表 2 菠莫对 A A 小鼠免疫细胞的调节作用 (又土 s , n = 7)
组别 C D犷( % ) C D矿( % ) CD志( % ) C D论( % )
模型组
高剂量菠葵组
低剂量菠葵组
地塞米松组
4 6
.
983 士 8
.
2 1 2
4 1
,
82 6 士 6 . 468
3 9 82 4 土 5 . 84 7
4 5
.
7 0 4 士 7
.
502
1 6
.
9 7 1 士 5 . 83 7
1 7
.
3 94 土 4 . 3科
22
.
3 03 士 7 . 15 9
32
.
(X) 7 土 4
.
7 3 2
C D犷+ / CD矿
3
.
0 1 8 土 1 . 0 7 6
2
.
4 1 6 土 0 . 332
1
.
9 4 6 士 0 . 7 12 中
1
.
4 7 5 士 0 . 4 29 平
2 8
.
50 3 土 8
.
82 2
36
.
634 土 6 . 7 75
39
.
4 7 4 土 5 . 995
1 8
.
9 32 士 7 . 590
1
.
4 1 1 士 1 . 384
1
.
84 0 土 1. 3 11
1
.
6 0 1 土 0 . 85 4
}
4
.
1 1 7 士 3
.
27 8
与模型组比较 , ’ 为 P < 0 . 05
表 3
组别 模型组
筱莫对 A A 小鼠胸腺与脾脏作用 (元士 s , n = 7 x 10勺
高剂量菠莫组 低剂量菠葵组 地塞米松组
胸腺 /体重 5 . 16 土 1 . 06 2 . 8 2 土 0 . 7 9 ’
脾 /体重 10 . 5 0 土 0 . 5 3 9 . 1 6 士 1. 9 5
与模型组比较 , ’ 为 P < 0 . 05 , ’ ` P < 0 . 01
4
.
1 用 rF eu n d ` s 完全佐剂诱发的关节炎续发病变
是一种迟发型超敏反应 ( D T H ) , 主要 由 T 细胞介
导 , 参与 DT H 的 T 细胞主要有 C D、 + T n T H 、 C D 4 十
C T L
。
T DT
H细胞与相应抗原结合后 ,释放多种淋巴因
子 ,导致血管通透性增高 、 渗出增多 , 或发生趋化作
用 ,使大量淋巴细胞 、单核 / 巨噬细胞及中性粒细胞
聚集于炎症区 , 导致局部小血管栓塞 , 血管变性坏
死 ,致敏 T 细胞活化巨噬细胞 ,释放溶酶体酶 , 导致
邻近组织坏死 ; C T L 引起靶细胞溶解 。 从本实验可
中药材第 26 卷第 5 期 20 3 年 5 月
3
.
9 7 士 0 . 52 中
5
.
84 士 1
.
2 4
.
1
.
85 士 0 . 5 1 申 *
2
.
7 1 士 0 . 63 *
以看出 ,筱葵对胸腺有抑制作用 , 能降低 C D ; + T 细
胞 ,从而抑制 C D 4 + T 细胞介导的迟发型超敏反应 ,
减轻了 A A 小鼠的继发性足肿胀 。
4
.
2 A A 模型在临床表现 、关节组织病理学及血中
变化与 R A 相似 〔’ 〕 ,是一种常用的免疫炎症性模型 ,
多用于对 R A 的实验研究 。 现代药理学的观点认为
RA 的发病和进展与免疫有关 , 有的药物在治疗类
风湿关节炎过程中有免疫抑制作用 , 如激素和免疫
抑制剂等 。 一般认为微生物感染及其抗原在 RA 的
·
345
·
发病机制中占主导地位 ,近年来证明细胞免疫似更
突出 。 在细胞免疫中 T 淋巴细胞对机体免疫性能
的稳定起着重要的调节作用 ,从 R A 看 , T 淋巴细胞
的免疫障碍主要为 C D犷细胞和 C D+s 细胞的数 目和
功能改变 , 表现为 CD犷细胞增多 , C D扩细胞减少 ,
CD犷/ C D+s 比值增高 , 同时 C D犷细胞功能增 强 ,
C D+s 细胞功能低于正常 。 本实验结果提示 , 至造模
后第 30 天 , 实验组的 C D犷明显降低 , C D+s 明显增
高 , c D犷/ C D+s 比值下降 , 与空白对照组比较有显著
性差异 ( P < 0 . 05 ) 。 拨葵对胸腺有抑制作用 , 同时
调节免疫细胞 , 抑制 C D犷, 促进 C D+s , 降低 C D犷/
C D+s
,临床可用于 RA 的治疗 。
4
.
3 从本实验的结果来看 ,筱莫同地塞米松一样 ,
抑制细胞免疫 ;但不同于地塞米松 , 菠莫对体液 B
细胞有增加的趋势 , 与地塞米松降低 B 细胞相 比
较 ,有非常显著性差异 。
参 考 文 献
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( 2 0 0 3 一 0 2 一 2 5 收稿 )
注 :本文为湖北省科技攻关项 目 (编号 : Zo Z lP l0 5)
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国际学术会议通知
为庆祝中国医学科学院药用植物研究所成立 20 周年及国际著名传统药物学家肖培根教授从事药用植物研究工作 50 周
年 ,中国医学科学院药用植物研究所将举办主题为 “ 国际天然与传统药物新成就 ” ( hT e I nt e nr at ion al S y m p os iu m on N e w A -
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e v e m e n t o f N a t u间 a n d T ar d it io n a l M e d ie in e , xs N A N T M 20 0 3 )的学术会议 ,将邀请当今国内外学术界知名学者 , 包括历届国际
传统药物大会主席 ,如美国的 N . R . aF nr sw ort h 教授 、德国的 H . w ag n e r 教授 、法国的 R . A nt on 教授 、 巴西的 E . lE ias be tsk ey 教
授 、英国的 J . D . hP il isP on 教授 、 日本的难波恒雄教授 、瑞典的 J . G . B ur hn 教授等 40 多名国外代表 , 以及有关国际组织的代
表参加 。 会议举办时间拟定为 : 20 3 年 8 月 31 日至 9 月 2 日 ,会议地点为 :北京香山饭店 。 学术活动包括大会报告 ,分组报告
和专业参观 。 召集论文主题为 ( l) 二十一世纪天然和传统药物展望 ; ( 2) 新的天然药物研究与开发 ; ( 3) 先导化合物及已知天
然化合物新生物活性的发现 ; ( 4) 天然产物分离 、纯化及结构确定 ; ( 5) 夭然和传统药物药理学与化合物构效关系 ; ( 6) 天然和
传统药物资源保护和利用 ; ( 7) 天然和传统药物的质量评价和质量控制 ; ( 8) 药用动植物的种植 /养殖和可持续利用 。 会议预
注册时间截止为 6 月 巧 日 ,会议注册和论文截止日期为 7 月 巧 日 ,欢迎踊跃投稿和积极参会 。 联系方式 : 北京市海淀区西北
旺药用植物研究所国际会议组委会秘书处 ( 1 000 94 ) , 张新国 、郭宝林 , T e l : ( 0 10 ) 6 2 89 97 1 或 628 997 1 4 ; F a x : ( 0 1 0 ) 62 89 62 8 8 ; E -
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34 6
· 中药材第 26 卷第 5 期 2 0 3 年 5 月