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三种杀菌剂对平邑甜茶生理指标的影响



全 文 :果 树 学 报 2013,30(5): 823~828
Journal of Fruit Science
三种杀菌剂对平邑甜茶生理指标的影响
赵国玲 1,姜兴印 1*,孙 燕 1,周丽萍 1,李 振 1,毛志泉 2*
(1山东农业大学植物保护学院, 山东泰安 271018; 2山东农业大学园艺学院, 山东泰安 271018)
摘 要:【目的】再植障碍是苹果园更新过程中面临的难题,生物因素是引起果树再植障碍的主要因素之一,杀菌剂
混土处理后对再植障碍起缓解作用,为大田实际应用提供理论依据。 【方法】通过盆栽试验,研究了连作土和定量接
入菌麦粒的的灭菌土药剂处理分别为代森锰锌 80% WP 2.5 a.i g /10 kg 土;多菌灵 50% WP 2.5 a.i g /10 kg 土;咯菌腈
50% WP 1.25 a.i g /10 kg 土对平邑甜茶幼苗生长量、根系活力、叶绿素含量及保护酶活性的影响。 【结果】杀菌剂混土
处理后对平邑甜茶生长的促进作用显著,根系活力提高、叶绿素含量增多、保护酶活性有不同程度的提高。 【结论】杀
菌剂可以显著增加幼苗生物量,减轻苹果连作障碍现象。
关键词: 平邑甜茶; 杀菌剂; 尖孢镰刀菌; 再植障碍; 保护酶
中图分类号:S661.9 文献标志码:A 文章编号:1009-9980(2013)05-0823-06
Effects of three fungicides on physiological characteristics of the growth
of Malus hupehensis seedlings
ZHAO Guo-ling1, JIANG Xing-yin1*, SUAN Yan1, ZHOU Li-ping1, LI Zhen1, MAO Zhi-quan2*
(1College of Plant Protection, Shandong Agricultural University, Tai’an, Shandong 271018 China; 2College of horticulture, Shandong A-
gricultural University,Tai’an, Shandong 271018 China)
Abstract: 【Objiective】Replant causes many problems in fruit tree nursery and old orchards. Biological
factors are among the most important factors contributed to the occurrence of crop replant disorder. It has
theoretical significance to explore the effective ways to alleviate apple replant disease. 【Method】Through a
pot experiment, effects of three fungicides including Mancozeb WP 2.5 g a.i per 10 kg soil, Carbendazim
WP 2.5 g a.i per 10 kg soil and Fludioxonil WP 1.25 g a.i per 10 kg soil on the biomass of seedlings, phys-
iological indicators of roots, and chlorophyll content was studied. 【Result】 The three kinds of treatments
significantly enhanced plant height, stem diameter close to ground, weight above ground, root activity
and chlorophyll content. The results showed that fungicides affected the metabolism of reactive oxygen.
SOD, POD and CAT activities in roots with treatment increased first and then declined. MDA content were
higher than the controls. 【Conclusion】Fungicides can significantly increase seedling biomass and allevi-
ate replant disorder.
Key words: Malus hupehensis seedings; Fungicides; F. oxysporum; Replant problem; Protective enzyme
再植障碍又叫重茬 [1-3],是指同种作物或近缘作
物在同一土壤上连续种植时, 即使用正常的栽培管
理措施也会发生产量降低、品质变劣、生育状况变差
的现象[4-5]。 土壤巴氏灭菌和熏蒸显著促进连作果园
苹果生长的事实证明引起苹果再植障碍的主要原因
为生物因素[6]。长期连作栽培,使得蔬菜、西瓜病原菌
数量剧增,产生严重的再植障碍,导致产量和品质均
下降[7-8]。 王树桐等[9]研究表明随着苹果树龄的提高,
根际土壤中真菌种类和数量显著增加, 而细菌的种
类和数量则随着树龄的增加显著减少。 前人研究发
现连作条件下土壤主要微生物类群由 “细菌型”向
“真菌型”转变[10-11]。已报道与苹果再植病有关的病原
真菌主要有镰刀菌(Fusariumspp)、立枯丝核菌(Rhi-
zoctonia solani)等[12]。 尽管人们很早就在农业生产中
收稿日期: 2013-03-23 接受日期: 2013-05-28
基金项目: 现代农业产业技术体系建设专项 CARS-28; 山东省农业重大应用技术创新课题
作者简介: 赵国玲,女,在读硕士生, E-mail: ZGL_8765@163.com
觹 通讯作者 Author for correspondence. Tel: 0538-8241897, E-mail: tajxy@163.com; E-mail: zhiquanmao@sdau.edu.cn
DOI:10.13925/j.cnki.gsxb.2013.05.017
果 树 学 报 30 卷
认识到再植障碍问题,但由于土地资源限制,经济利
益驱动,生产栽培条件影响等尽量采用休耕、轮作等
措施来避免或减轻这一现象, 但是作物再植障碍仍
然时有发生。 我们以生产上较常用苹果砧木—平邑
甜茶(Malus hupehensis seedings)为试验材材,在前
期苹果连作土壤微生物分离鉴定的基础上筛选出 3
种杀菌剂,后选取 3种杀菌剂不同剂量,通过盆栽试
验测定了其对连作土幼苗和菌土幼苗的生长量、根
系活力、叶绿素含量、保护酶活性变化的影响,以期
为解决或部分解决苹果再植障碍问题提供理论依
据。
1 材料和方法
1.1 供试果树品种
1 a生平邑甜茶实生苗 (Malus hupehensis seed-
ings)
1.2 供试土壤及菌麦粒制备
连作土壤采自山东省泰安市道朗镇幺家庄村一
苹果园,苹果园建园时间为 1991 年,树龄 19 a 生,
土质为壤土,主栽品种为红富士和嘎拉,砧木为平邑
甜茶, 于 2012 年 3 月底采集距苹果树树干 40 cm、
深 10~30 cm范围内的连作土壤, 多点随机取样,混
匀、过筛以去除石子、杂质等备用。
非连作土壤采自山东农业大学新校区黄淮海区
域玉米技术创新中心的试验基地,试验地地势平坦,
土质为壤土 , 有良好的排灌设施 , 有机质含量
1.25%,pH 7.1,70℃条件下灭菌 120 min备用。
供试真菌尖孢镰刀菌从连作土壤经分离纯化获
得,经科赫法则验证。 择新鲜无霉变的麦粒,沸水煮
15 min,然后装瓶、灭菌、冷却后接种,25℃条件下培
养当菌落覆盖麦层麦粒后,全瓶摇散、摇匀备用。
1.3 供试药剂
代森锰锌 80% WP(Mancozeb 80% WP)、咯菌腈
50% WP (Fludioxonil 50% WP) 和多菌灵 50% WP
(Carbendazim 50% WP)。
1.4 方法
连作土和已灭菌的非连作土(定量接入菌麦粒)
混药均匀后分别装人 23 cm×16 cm(直径×高)的瓦
盆中备用。 将经低温层积 45d的平邑甜茶种子播于
基质中,待长到 3~4片真叶时移入盆中(不带土),每
盆 1株,各 20盆,常规管理。 试验于 2012 年在山东
农业大学植物保护学院进行。 试验设置 3组处理。
A组:菌土土壤共设 3 个处理,药剂处理分别为
A1 代森锰锌 80% WP 2.5 g a.i/10 kg 土;A2 多菌灵
50% WP 2.5g a.i/10 kg 土;A3 咯菌腈 50% WP 1.25 g
a.i/10 kg土。
B 组: 连作土壤共设 3 处理, 药剂处理分别为
B1 代森锰锌 80% WP 2.5 g a.i/10 kg 土;B2 多菌灵
50% WP2.5g a.i/10 kg 土;B3 咯菌腈 50% WP 1.25 g
a.i/10 kg土。
对照组:共设置灭菌土 CK1、菌土 CK2、连作土
CK3 3个对照。
1.5 测定项目及方法
1.5.1 幼苗生长量的测定 于 9月份幼苗基本停止
生长时,分别各个处理随机取样,每处理随机选取 5
株,测定幼苗的株高、地径、根长、根干质量、地上鲜
质量和叶面积。株高用卷尺测量,茎粗度用游标卡尺
测量,叶面积采用叶面积扫描仪扫描。
1.5.2 幼苗根系活力及叶绿素含量的测定 根系活
力测定采用甲基蓝光电比色法即 TTC[13]法;叶绿素
含量测定采用浸提法[14]。
1.5.3 幼苗根系保护酶活性及丙二醛含量的测定
过氧化物酶(POD)活性测定参考 Kraus 等 [15]的方
法 ,过氧化氢酶 (CAT)活性测定参考赵世杰等 [16]
的方法,参考李合生 [17]的方法测定超氧化物歧化
酶(SOD)活性,参照汤章诚 [18]的方法测定丙二醛的
含量。
1.6 数据处理
采用 DPS v 6.55 统计软件及 Microsoft Excel
2003进行数据处理。
2 结果与分析
2.1 三种杀菌剂对幼苗生物量的影响
由表 1可以看出, 药剂处理后显著提高了植株
的株高、地上地下重量、叶面积,各项指标达到差异
显著水平。 A 组处理较对照 CK2 株高分别提高了
64.93%、61.46%、37.85%, 较对照 CK1 处理 A1、A2
也相应提高了 17.28%、14.81%, 处理 A1、A2、A3 地
径较 CK1、CK2 相差不明显, 根系干重较 CK1 分别
提高了 33.37%、27.34%、21.92%, 地上干重与 CK1
相比 67.74%、37.33%、27.65%, 叶面积分别提高了
63.09%、34.39%、33.55%。 B 组处理中株高分别较
CK3 提高了 92.70%、68.40%、62.15%,B1、B2、B3 较
对照 CK3 分别提高了 38.65%、29.48%、26.85%,根
系干重分别较对照 CK3 提高了 152.97%、143.78%、
160.54% , 叶面积分别提高了 111.45% 、90.18% 、
71.73%;各处理与空白对照差异不大。
2.2 三种杀菌剂对幼苗根系活力的影响
824
5 期 赵国玲等: 三种杀菌剂对平邑甜茶生理指标的影响
表 1 3 种杀菌剂对平邑甜茶幼苗生物量的影响
Table 1 Effect of three fungicides on biomass and leaf area of M. hupehensis seedlings
图 1 三种杀菌剂对菌土幼苗根系活力的影响
Fig. 1 Effect of three fungicides on roots activity of
Bacterial soil M. hupehensis seedlings





  
A1 A2 A3
CK1 CK2
TT
C



TT
C
re
du
ct
io
n
in
te
ns
ity
/(
μg
·
g-
1 ·
h-
1 )
处理
Treatment
植株高度
Plant height/cm
地径
Ground diameter of plant/cm
根系干质量
Dry mass of root/g
地上干质量
Dry mass of above ground/g
叶面积
Leaf area/cm2
CK1
CK2
CK3
A1
A2
A3
B1
B2
B3
20.25 f
16.35 h
14.40 i
23.75 a
23.25 b
19.85 g
22.67 c
21.17 d
20.74 e
0.49 a
0.42 b
0.43 b
0.50 a
0.49 a
0.51 a
0.49 a
0.46 b
0.47 a
4.36 f
2.09 g
1.85 h
5.42 a
5.17 b
4.95 c
4.68 d
4.51 fe
4.82 d
2.17 g
1.88 h
1.50 i
3.64 a
2.98 c
2.77 e
3.53 b
2.88 d
2.48 f
16.24 d
11.51 h
9.08 i
19.20 a
17.27 c
15.59 e
18.77 b
15.47 f
15.37 g
注:表中数据经 Duncan’新复极差检验,同列中不同字母表示 0.05 水平差异显著。
Note: Different letters within the same column mean significant difference at P<0.05 by Duncan’s multiple test.





 
A1 A2 A3
CK1 CK2
由图 1,2可知药剂混土处理后可显著促进幼苗
地下部分的生长,增强根系活力。菌土处理根系活力
的提高显著高于连作土处理。 8 月份根系活力增长
幅度较大 , 菌土处理根系活力的增长率分别为
24.62%、27.57%、18.25%。 菌土处理中最高为多菌灵
2.5 g a.i /10 kg 土,在 8月份达到 428.5 μg·g-1·h-1;菌
土幼苗根系活力提高幅度分别为 18.52%、21.10%、
13.02%,最高为多菌灵 2.5g a.i /10 kg 土,达到 365.6
μg·g-1·h-1。 菌土幼苗根系活力提高幅度较连作土幼
苗要高。
2.3 三种杀菌剂对幼苗叶绿素含量的影响
由图 3,4可知, 药剂混土处理后可显著提高幼
苗叶绿素的含量,随着时间的增长,2 组处理中叶绿
素变化的规律大体一致先上升后下降。AB两组处理
与空白对照叶绿素含量变化差异不大。 菌土幼苗叶
绿素含量显著高于连作土幼苗。 对于菌土幼苗,6月
份各药剂处理的叶绿素较对照分别提高 19.63%、
18.69%、16.82%,7 月份较菌土处理提高 50.83%、
46.41%、30.94%,8 月份分别提高 52.26%、51.26%、
49.25%,9 月份提高 66.94%、66.12%、54.55%。 连作
土幼苗叶绿素含量 6 月份各处理分别提高 23.76%、
29.70%、32..96%,7 月份分别提高 39.56%、29.12%、
20.60%,8 月份分别提高 38.14%、34.42%、20.84%,9







  
B1 B2 B3
CK1 CK3
图 2 三种杀菌剂对连作土幼苗根系活力的影响
Fig. 2 Eeffect of three fungicides on roots activity of
Replant M. hupehensis seedlings
TT
C



TT
C
re
du
ct
io
n
in
te
m
sit
y
/(
μg
·
g-
1 ·
h-
1 )
图 3 三种杀菌剂对菌土幼树叶绿素含量的影响
Fig. 3 Effect of three fungicides on chlorophyll content of
Bacterial soil M. hupehensis seedlings

绿



Ch
lo
ro
ph
yl
lc
on
te
nt
/(
m

L-
1 )





 
B1 B2 B3
CK1 CK3
图 4 三种杀菌剂对连作土幼树叶绿素含量的影响
Fig. 4 Effect of three fungicides on chlorophyll content of
Replant M. hupehensis seedlings

绿



ch
lo
ro
ph
yl
lc
on
te
nt
/(
m

L-
1 )
B3
CK1 CK3
月份 Month
月份 Month月份 Month
月份 Month
825
果 树 学 报 30 卷





   
A1 A2 A3
CK1 CK2







B1 B2 B3
CK1 CK3





  
A1 A2 A3
CK1 CK2




   
B1 B2 B3
CK1 CK3





 
A1 A2 A3
CK1 CK2





 
B1 B2 B3
CK1 CK3
图 5 三种杀菌剂对菌土根系 SOD 活性的影响
Fig. 5 Eeffect of three fungicides on SOD activity in roots of
Bacterial soil M. hupenhensis seedlings
图 6 三种杀菌剂对连作土根系 SOD 活性的影响
Fig. 6 Eeffect of three fungicides on SOD activity in roots of
replant soil M. hupenhensis seedlings
SO
D


SO
D
ac
tiv
ity
/(

g-
1 )
SO
D


SO
D
ac
tiv
ity
/(

g-
1 )
月份分别提高 35.42%、42.36%、29.86%。 2种处理下
代森锰锌 2.5g a.i/10 kg和多菌灵 2.5 g a.i/10 kg 土可
以明显提高叶绿素含量。
2.4 对保护酶活性及对丙二醛含量的影响
由图 5,6 可知,A、B 两组经过药剂处理后 SOD
活性升高,其中 A各个处理较 B变化显著,7、8 月份
低于 CK1。 A菌土和 B连作土各个处理变化规律一
致,B连作土各个处理变化幅度较大。
POD 活性变化趋势由图 7,8 可以看出,在 A 菌
土处理中 6 月份 POD 活性低于对照 CK1, 除 A1、
A2、A3 高于对照 CK2 外其余处理较对照 CK2 变化
不大,7、8、9 月份经过药剂处理的 POD 活性显著升
高均高于对照 CK1、CK2。 B连作土处理中各处理的
变化幅度明显低于 A菌土处理。 B连作土处理中 7、
8 月份酶活性变化不大,B1、B2、B3、B4 的 POD 活性
与 CK1 差别不大略高,高于 CK3。 A、B 两处理存酶
活性变化存在一致性。
随着时间的变化由图 9,10 可以看出 CAT 活性
有降低趋势。 6月份对照平邑甜茶根系 CAT活性低
于各处理,7 月份 CAT 活性对照高于各个处理,之
后不同处理酶活性开始降低。 菌土和连作土处理中
以 A1、B1 的变化幅度大,在 7、8、9 月份分别为对照
的 3.39、1.48、1.90、1.57、1.64、2.06、1.09 倍。 A 菌土
处理 CAT活性变化显著高于 B连作土处理。
由图 11,12 可以看出, 测定期内 MDA 含量呈
下降趋势。 与空白对照 CK1 相比,处理后平邑甜茶
根系中 MDA 的含量增加,但不同处理对 MDA 含量
图 7 三种杀菌剂对菌土幼苗根系 POD 活性的影响
Fig.7 Effect of three fungicides on POD activity of Bacterial
soilM. hupehensis seedlings
PO
D


PO
D
ac
tiv
ity
/(

g-
1 ·
m
in
-1

图 8 三种杀菌剂对连作土幼苗根系 POD 活性的影响
Fig. 8 Effect of three fungicides on POD activity of Replant
M. hupehensis seedlings
PO
D


PO
D
ac
tiv
ity
/(

g-
1 ·
m
in
-1

图 9 三种杀菌剂对菌土幼苗根系 CAT 活性的影响
Fig. 9 Effect of three fungicides on CAT activity of Bacterial
soilM. hupehensis seedlings
CA
T


CA
T
ac
tiv
ity
/(

g-
1 ·
m
in
-1

图 10 三种杀菌剂对连作土幼苗根系 CAT 活性的影响
Fig. 10 Effect of three fungicides on CAT activity of Replant
M. hupehensis seedlings
CA
T


CA
T
ac
tiv
ity
/(

g-
1 ·
m
in
-1

2
1 32
1 2
A1 2
1 C 2
B3
C 1 C 3
3
月份 Month
月份 Month
月份 Month
月份 Month
月份 Month
月份 Month
826
5 期 赵国玲等: 三种杀菌剂对平邑甜茶生理指标的影响





   
A1 A2 A3
CK1 CK2





   
B1 B2 B3
CK1 CK3
图 11 3 种杀菌剂对菌土幼苗根系 MDA 含量的影响
Fig. 11 Effect of three funcigides MDA content on roots of
Bacterial soil M. hupehensis seedlings
图 12 三种杀菌剂对连作土幼苗 MDA 含量的影响
Fig. 12 Effect of three funcigides MDA content on roots
of Rplant M. hupehensis seedlings
M
DA


M
DA
co
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en
t/(
μm
ol·
g-
1 )
M
DA


M
DA
co
nt
en
t/(
μm
ol·
g-
1 )
影响不同。幼苗根系内自由基增多,膜脂过氧化程度
加剧,氧化终产物为丙二醛,会引起蛋白质、核酸等
生命大分子的交联聚合, 具有细胞毒性使细胞膜的
结构和功能受到破坏。
3 讨 论
中国苹果优势产区土地资源紧张, 倒茬和轮作
存在困难, 再植障碍是苹果生产发展面临的重大难
题。 连作条件下土壤主要微生物类群由“细菌型”向
“真菌型”转变,真菌数量则呈线性增长[19-20]。 随着对
果树再植障碍研究的深入, 人们现在普遍认为引起
再植障碍的主要原因是生物因素而不是非生物因
素。 肖宏等[21]研究表明,连作土一定温度下灭菌可以
不同程度地促进苹果砧木平邑甜茶幼苗的生长。 目
前,国内对大豆再植障碍的研究较多且深入,对果树
的研究较少, 特别是针对苹果再植障碍的系统研究
报道很少。研究结果表明,重茬连作土壤物理性状恶
化,土壤中钾、磷和铝等有效养分降低,土壤有机质
减少[22-23]。
植株在遭受逆境条件下体内细胞在结构及生理
生化上发生一系列适应性变化, 最终要在植株的生
长状况和形态特征上有所表现。 根系是植物生命活
动中的重要器官, 与植物的生长与产量有密切的关
系[24]。 根系活力泛指根系的吸收、合成、氧化和还原
能力等, 是一种客观地反映根系生命活动的生理指
标[25]。 TTC 还原能力测定的是与呼吸有关的琥珀酸
脱氢酶的含量,所以 TTC 还原量与呼吸有一定的关
系。 呼吸可提供能量,对根系执行吸收、运输及合成
功能起至关重要的重要的作用。 杀菌剂处理后根系
活力提高,促进地上部分的生长,叶绿素含量相应提
高。叶绿素是光合作用的基础,光合作用是植物生长
发育的基础,是植物体内碳素的重要来源,植物的光
合研究一直受到重视[26-27]。本试验先后测定了不同月
份的根系活力、叶绿素含量,实验结果表明表明杀菌
剂施用后促进了幼苗叶绿素含量的增加, 且非连作
幼苗叶绿素含量较连作幼苗又有所增加, 光合色素
含量增加, 这可能与土壤中铁和镁的有效性增加有
关。杀菌剂施用后改善了根部的生存环境,使根系对
矿质营养的吸收能力增强,促使土壤中铁、镁等矿质
营养可利用性明显增加,促进了叶绿素的合成。
植物在逆境条件下保护酶系统包括超氧化物歧
化酶、过氧化物酶、过氧化氢酶、等活性和丙二醛含
量的变化, 已广泛用于植物对逆境的反应机理的研
究[28-29]。MDA是膜脂过氧化反应的主要产物之一,有
很强的细胞毒性,MDA 含量高低是反映细胞膜脂过
氧化作用强弱重要指标之一 [30],可以反映植物遭受
逆境伤害的程度。 试验结果表明 SOD、POD 活性经
过处理后有显著的提高,CAT 活性经过处理后活性
降低,但是这并不意味着它清楚自由基的能力降低。
在处理过程中它的活性变化稳定性远远高于对照
CK3, 这种稳定性就可以很好地保持活性氧与防御
酶之间的平衡。 处理组 MDA 含量显著低于对照
CK2、CK3,明显高于空白对照 CK1。
4 结 论
杀菌剂处理后可增加幼苗生物量, 促进植株生
长,缓解苹果再植障碍现象,其中代森锰锌 WP 2.5
a.i g/10 kg土时作用最显著。 盆栽条件下,对比三组
试验结果发现杀菌剂处理后菌土处理生物量、 酶活
性等均高于连作土, 说明镰刀菌是引起连作障碍的
因素之一,但引起再植障碍的原因复杂多样,究竟哪
些因素起主导作用,还是几个因素的综合效应,尚不
明了需要进一步深入研究,防治措施需进一步综合。
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果 树 学 报 30 卷828