全 文 ：褐变数
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诱导率
（%）
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诱导出原球
茎外植体数
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接种外
植体数
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40
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40
40
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激素
0（CK）
0.5mg/L 6-BA
1.0mg/L 6-BA
3.0mg/L 6-BA
5.0mg/L 6-BA
7.0mg/L 6-BA
0.5mg/L KT
1.0mg/L KT
3.0mg/L K
5.0mg/L KT
7.0mg/L KT
表 1 不同浓度 6-BA 和 KT对蝴蝶兰幼叶诱导原球茎的影响
不同激素对蝴蝶兰幼叶诱导原球茎的影响
马生健， 杨艳梅
（湛江师范学院生命科学与技术学院，广东 湛江 524048）
摘 要：以蝴蝶兰（Phalaenopsis）无菌小苗幼叶作为外植体，接种在附加有不同浓度激素（6-BA、NAA、KT、2,4-D）组合与 15%
椰乳的 MS 培养基上培养。 结果表明，6-BA、KT 对原球茎的诱导起着重要的作用，NAA、2,4-D 也有一定的辅助作用。 在添加 5.0
mg/L 6-BA 的培养基中，叶片原球茎状体的诱导率达 50%；在添加 10.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA 的培养基中，原球茎诱导率达
60%。
关键词：蝴蝶兰； 叶片； 原球茎； 激素
中图分类号：S682.3 文献标识码：A 文章编号：1004-874X（2011）10-0036-02
蝴蝶兰（Phalaenopsis）属热带或亚热带地区的兰科植
物，素有“兰花皇后”之美誉，具有极高的观赏价值和经济
价值，倍受人们的青睐 [1]。 但蝴蝶兰为单茎性气生兰，其
再生能力弱、分株繁殖系数低、种子繁殖萌发率极低，难
以满足市场的需求。 国内外有很多关于以蝴蝶兰叶片诱
导原球茎的研究 [2]，影响蝴蝶兰叶诱导原球茎的因素很
多，如有机添加物、激素，环境因子等，本试验选取激素进
行研究， 旨在筛选出蝴蝶兰叶片诱导原球茎激素适合浓
度组合。
1 材料与方法
1.1 试验材料
供试材料为组织培养得到的无菌蝴蝶兰幼叶。
培养基：（1）叶诱导原球茎的培养基以 MS 为基本培
养基， 附加细胞分裂素 0.5~7.0 mg/L 6-BA 或 0.5~7.0
mg/L KT；（2） 外植体褐变研究培养基也以 MS 为基本培
养基， 附加 0.5~5.0 mg/L NAA 或 0.5~5.0 mg/L 2,4-D；
（3） 细胞分裂素与生长素组合成的叶诱导原球茎的培养
基也以 MS 为基本培养基，附加激素组合 3.0~15.0 mg/L
6-BA+1.0~2.0 mg/L NAA 或 3.0~15.0 mg/L KT+1.0~3.0
mg/L NAA。 上述培养基均添加 15%椰乳、30 g/L 蔗糖和
8 g/L 琼脂，调节 pH 至 5.8~6.0，分装，121℃高压灭菌 20
min，冷却备用。
1.2 试验方法
取无菌的蝴蝶兰幼叶， 在无菌条件下用解剖刀切成
约 0.5 cm×0.5 cm 的叶块，正面朝上接种于上述 3 种培养
基上，每瓶接种 40 个幼叶片，每种激素处理设 3 个重复。
接种后置于培养温度 25℃、光照强度 1 200 lx、光照周期
12 h/d的培养室培养。 接种后 50 d进行观察叶诱导原球
茎与外植体褐变情况结果，统计诱导率和褐化率，其中原
球茎诱导率（%）＝（诱导出原球茎的外植体数/接种的外植
体数）×100，褐化率（%）＝（褐化的外植体数/接种的外植体
数）×100。
2 结果与分析
2.1 不同细胞分裂素对蝴蝶兰幼叶诱导原球茎的影响
外植体叶块接入叶诱导原球茎培养基后 3 d，发现叶
片伤口处释放出一些黑褐色的酚类物质，接种后 50 d 观
察统计原球茎的诱导情况，结果见表 1。由表 1可知，细胞
分裂素 6-BA 和 KT 是决定蝴蝶兰原球茎状体能否产生
的重要因素， 未添加细胞分裂素的对照不能诱导出原球
茎。 随着 6-BA浓度的升高，诱导率逐渐升高，6-BA 浓度
为 1.0 mg/L 时诱导率为 15%，原球茎颗粒大、颜色绿色；
当 6-BA 浓度为 5.0 mg/L 时，原球茎诱导率最高达 50%，
但颗粒较小、颜色浅绿；当 6-BA 浓度为 7.0 mg/L 时，原
球茎诱导率降低为 35%，但长势较差、颜色偏黄，部分甚
至褐变死亡，这可能与高浓度的 6-BA 刺激多酚氧化酶的
作用有关。
KT的总诱导效果不及 6-BA， 低浓度 （0.5~3.0 mg/L
KT的原球茎诱导率较高、 为 20%~25%， 颗粒大且绿；当
KT 浓度为 5.0 mg/L，诱导率显著下降为 10%；当 KT 浓度
为 7.0 mg/L 时，无原球茎颗粒被诱导出来，且外植体褐化
现象严重。
2.2 不同生长素对蝴蝶兰外植体褐变的影响
不同浓度 NAA、2,4-D 对蝴蝶兰外植体褐变的影响结
果见表 2。 由表 2可知，外植体的褐变率随着生长素浓度的
升高而下降， 说明适当浓度的生长素对外植体的褐变产生
一定的延缓作用、 在未添加 NAA和 2,4-D的对照组合中，
外植体的褐变率为 50%； 当 NAA和 2,4-D的浓度达到 5.0
mg/L时，褐变率则降低至 25%。 此外，在单独添加 NAA和
收稿日期：2011-03-12
基金项目：湛江师范学院博士启动项目（ZL0909）
作者简介：马生健（1977-），男，博士，讲师，E-mail：mashengjian1
@163.com
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褐变率
（%）
50
35
30
30
30
25
40
35
35
30
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褐变数
20
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12
12
12
10
16
14
14
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10
接种外植体数
40
40
40
40
40
40
40
40
40
40
40
激素
0（CK）
0.5mg/L NAA
1.0mg/L NAA
2.0mg/L NAA
3.0mg/L NAA
5.0mg/L NAA
0.5mg/L 2,4-D
1.0mg/L 2,4-D
2.0mg/L 2,4-D
3.0mg/L 2,4-D
5.0mg/L 2,4-D
表 2 不同浓度 NAA 和 2,4-D 对蝴蝶兰幼叶外植体褐变的影响
褐变
数
20
24
24
26
26
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20
24
24
26
26
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诱导
率（%）
0
0
0
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20
5
0
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10
0
0
诱导出原球茎
的外植体数
0
0
0
2
24
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2
0
4
4
0
0
接种外
植体数
40
40
40
40
40
40
40
40
40
40
40
40
激素组合
6-BA3.0mg/L+NAA1.0mg/L
6-BA9.0mg/L+NAA3.0mg/L
6-BA5.0mg/L+NAA1.0mg/L
6-BA10.0mg/L+NAA2.0mg/L
6-BA10.0mg/L+NAA1.0mg/L
6-BA15.0mg/L+NAA1.5mg/L
KT3.0mg/L+NAA1.0mg/L
KT9.0mg/L+NAA3.0mg/L
KT5.0mg/L+NAA1.0mg/L
KT10.0mg/L+NAA2.0mg/L
KT10.0mg/L+NAA1.0mg/L
KT15.0mg/L+NAA1.5mg/L
表 3 不同浓度 6-BA 和 NAA 组合对蝴蝶兰原球茎诱导的影响
2,4-D的培养基中，均未发现有原球茎的诱导产生。
2.3 不同细胞分裂素和生长素组合对蝴蝶兰幼叶诱导原
球茎的影响
细胞分裂素和 NAA 搭配使用与细胞分裂素单独使
用对蝴蝶兰原球茎的诱导效果不同， 细胞分裂素与 NAA
搭配的比例不同，对原球茎的诱导也有很大影响，由表 3
可知，当 6-BA 与 NAA的比例为 3∶1 时，没有原球茎的产
生，外植体大部分褐化死亡。随着 6-BA与 NAA激素浓度
与激素比例的升高， 原球茎的数目也逐渐增多 ，6-BA
10.0 mg/L+NAA 2.0 mg/L 组合原球茎的诱导率达 5%，此
时原球茎数目少，但长势好，颜色鲜绿，褐变程度不大；当
6-BA 与 NAA 的比例达 10 ∶1 （即 6-BA10.0 mg/L+NAA
1.0 mg/L）时，原球茎的诱导率最高、达 60%，但由于激素
浓度过高，外植体的褐变数目增多。 当 KT 与 NAA 以 5∶1
的比例搭配时效果最好， 即 KT 5.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L
或 KT 10.0 mg/L+NAA 2.0 mg/L 时为最佳组合， 原球茎
的诱导率最高达 10%， 且 KT的作用效果以低浓度较好，
高浓度反而使外植体易褐变，但比例过低（3∶1）或比例过
高（10∶1），几乎不能诱导出原球茎。
3 结语
蝴蝶兰为单茎气生兰，植株上极少发生侧枝，组织培
养时，若以茎为种植体会损伤母株，若以花梗侧芽为外植
体则取材受开花与否限制， 本研究以组培苗幼叶为外植
体，也能较好地诱导出原球茎。 蝴蝶兰原球茎的诱导过程
是典型的体细胞胚胎发生过程，这个过程主要受 6-BA 浓
度的影响， 激动素 KT对其诱导也有一定的促进作用，刘
林[3]研究认为，单独使用激动素，原球茎的诱导率为 0。 而
本研究发现， 添加低浓度的 KT， 蝴蝶兰原球茎诱导率达
25%。 此外，生长素 NAA和 6-BA组合能达到很好的原球
茎诱导效果，这与秦凡等 [4]的研究结果相似，适当浓度的
生长素对外植体的褐变还有一定的延缓作用。
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