全 文 ：２０１５年
第３５卷　第４期
河北大学学报（自然科学版）
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｈｅｂｅｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ）
２０１５
Ｖｏｌ．３５Ｎｏ．４
ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－１５６５．２０１５．０４．００８
华北蓝盆花再生体系的建立及其黄酮类化合物研究
郭萌，许东婷，王俊丽，张荣荣，黄婧婧
（中央民族大学 生命与环境科学学院，北京　１０００８１）
　　摘　要：为了有效保护和利用野生华北蓝盆花（Ｓｃａｂｉｏｓａ　ｔｓｃｈｉｌｉｅｎｓｉｓ　Ｇｒｕｎｎｉｎｇ）资源，通过离体培养技术
建立了华北蓝盆花再生体系．研究结果表明：以子叶为外植体，诱导愈伤组织较适宜的培养基为 ＭＳ＋ＴＤＺ
１．０ｍｇ／Ｌ，诱导率达８２．７４％；诱导不定芽的培养基为 ＭＳ＋６－ＢＡ　４．０ｍｇ／Ｌ，诱导率为８６．３０％；生根培养
基为 ＭＳ＋ＩＢＡ　２．０ｍｇ／Ｌ，生根率为７３．８５％．愈伤组织、野生植株总黄酮含量较高，其醇提物具有较强的抗
氧化活性，对ＤＰＰＨ自由基具有很高的清除率．
关键词：华北蓝盆花；愈伤组织诱导；植株再生；总黄酮；抗氧化活性
中图分类号：Ｑ９４５　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１０００－１５６５（２０１５）０４－０３７９－０６
Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ　ｏｆ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ　ａｎｄ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ
Ｓｃａｂｉｏｓａ　ｔｓｃｈｉｌｉｅｎｓｉｓ　Ｇｒｕｎｎｉｎｇ
ＧＵＯ　Ｍｅｎｇ，ＸＵ　Ｄｏｎｇｔｉｎｇ，ＷＡＮＧ　Ｊｕｎｌｉ，ＺＨＡＮＧ　Ｒｏｎｇｒｏｎｇ，ＨＵＡＮＧ　Ｊｉｎｇｊｉｎｇ
（Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　ａｎｄ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍｉｎｚｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０００８１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｆｏｒ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｗｉｌｄ　Ｓｃａｂｉｏｓａ　ｔｓｃｈｉｌｉｅｎｓｉｓ　Ｇｒｕｎｎｉｎｇ，ａｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｓｙｓ－
ｔｅｍ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｗａｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｌｅａｆ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｆｒｏｍ　ａｓｅｐｔｉｃ　ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ　ｏｆ　Ｓ．ｔｓｃｈｉｌｉｅｎｓｉｓ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ
ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｗａｓ　ＭＳ＋ＴＤＺ　１．０ｍｇ／Ｌ，ａｎｄ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　ａ－
ｂｏｕｔ　８２．７４％．Ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｓｈｏｏｔｓ　ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ　ｗｈｅｎ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｏｎ　ＭＳ＋６－ＢＡ　４．０ｍｇ／Ｌ　ａｎｄ
ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ　ｗａｓ　ａｓ　ｈｉｇｈ　ａｓ　８６．３０％．ＭＳ＋ＩＢＡ　２．０ｍｇ／Ｌ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ａｎｄ
７３．８５％ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ｓｈｏｏｔｓ　ｆｏｒｍｅｄ　ｃｏｍｐｌｅｔｅ　ｐｌａｎｔｌｅｔｓ．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｓｈｏｗｅｄ
ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｐｒｏｆｉｌｅｓ　ｏｆ　ｃａｌｕｓｅｓ　ｗｅｒｅ　ｓｉｍｉｌａｒ　ｔｏ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ　ｐｌａｎｔｓ．Ｔｈｅ　２，２－ｄｉｐｈｅｎｙｌ－１－
ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ（ＤＰＰＨ）ａｓｓａｙ　ｒｅｖｅａｌｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　ｃａｌｕｓｅｓ　ａｎｄ　ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ　ｐｌａｎｔｓ　ｈａｄ
ｓｔｒｏｎｇ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｓｃａｂｉｏｓａ　ｔｓｃｈｉｌｉｅｎｓｉｓ　Ｇｒｕｎｎｉｎｇ；ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ；ｐｌａｎｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ；ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ａｎｔｉｏｘｉ－
ｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ
　收稿日期：２０１４－１２－２３
　基金项目：高等学校学科创新引智计划项目（Ｂ０８０４４）；一流大学一流学科建设项目（ＹＬＤＸ０１０１３）
　第一作者：郭萌（１９８９－），女，河北保定人，中央民族大学在读硕士研究生．Ｅ－ｍａｉｌ：ｍｏｎｉｃａ１０７１７＠１２６．ｃｏｍ
　通信作者：王俊丽（１９６４－），女，河北新乐人，中央民族大学教授，博士生导师，主要从事植物细胞工程及资源利用等方面研
究．Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｊｕｎｌｉ１６９８＠１６３．ｃｏｍ
华北蓝盆花（Ｓｃａｂｉｏｓａ　ｔｓｃｈｉｌｉｅｎｓｉｓ　Ｇｒｕｎｎｉｎｇ）是川续断科（Ｄｉｐｓａｃａｃｅａｅ）蓝盆花属（Ｓｃａｂｉｏｓａ）植物，该植
河北大学学报（自然科学版） 第３５卷
物主要分布于西北、东北和华北地区．华北蓝盆花的干燥花序入药，是一种重要的蒙药材（蒙药名为套森－套
日麻）［１］．
目前有关华北蓝盆花研究较少，相关研究工作多为化学成分的提取，尤其是黄酮类化合物的研究［２］．由
于华北蓝盆花植物资源量较少，并且入药的部位仅为花序，再加之人们对植物天然药物的需求越来越多，使
得华北蓝盆花这一药用植物资源日渐匮乏．本研究的目的在于探索华北蓝盆花愈伤组织和不定芽诱导条件，
建立高效离体繁殖体系，为华北蓝盆花的种质保存提供有效途径．
１　植物材料
研究所用材料为华北蓝盆花种子，其成熟果实采自北京市门头沟区的灵山，采样地的海拔高度为
１　４００～１　９００ｍ．
２　实验方法
２．１　无菌苗的培养
选用 ＭＳ作为基本培养基，附加质量分数为３％的蔗糖和质量分数为０．７％的琼脂，ｐＨ值均为５．８，经
１２１℃高压灭菌２０ｍｉｎ．消毒后的种子接种于 ＭＳ培养基中，接种后将培养物置于（２５±２）℃、光照强度为
２　０００～３　０００ｌｘ、光照时间为每天１６ｈ的条件下进行培养，３０ｄ后即可获得无菌苗．
２．２　愈伤组织的诱导
研究所用基本培养基为 ＭＳ培养基，其内分别添加２，４－Ｄ和ＴＤＺ，其质量浓度分别为０，０．５，１．０，２．０，
４．０ｍｇ／Ｌ．将无菌苗的叶片剪成大小为０．５ｃｍ×０．５ｃｍ的切块，接种于培养基内，每处理外植体接种５６块，
实验重复３次，３０ｄ后观察统计愈伤组织的诱导率．
２．３　不定芽的诱导
以 ＭＳ为基本培养基，培养基内添加质量浓度分别为０，０．５，１．０，２．０，４．０ｍｇ／Ｌ的６－ＢＡ或ＫＴ，将大小
为０．５ｃｍ×０．５ｃｍ的叶片切块接种于配置好的培养基内，每处理外植体接种５６块，实验重复３次，３０ｄ后
观察统计不定芽的诱导率．
２．４　不定根诱导培养
在 ＭＳ基本培养基中附加ＩＢＡ作为生根培养基，ＩＢＡ的质量浓度分别为０，０．５，１．０，２．０，４．０ｍｇ／Ｌ．选
取生长良好且高度为３～５ｃｍ的不定芽接入生根培养基进行不定根的诱导培养，每处理接种５０个不定芽，
实验重复３次，３０ｄ后观察统计不定芽的生根率．
２．５　再生苗移栽
将生根培养４５ｄ后的三角瓶的瓶塞打开，在培养室内炼苗１周，然后将再生苗小心从瓶中取出，用自来
水冲洗根部的培养基后，移栽到由泥炭土、珍珠岩、沙混合而成的基质中，三者的体积比为４∶３∶２．
２．６　总黄酮的提取与含量测定
实验材料分别为愈伤组织、再生植株及野生植株，先将其在自然条件下晾干，然后用粉碎机进行粉碎．取
各干燥样品５．０ｇ，置于回流装置中，加入体积分数为６０％的乙醇５０ｍＬ，回流提取２次，抽滤提取液，在旋
转蒸发仪上分别将不同样品的提取液减压浓缩到５０ｍＬ．在２５ｍＬ容量瓶内分别加入２．５ｍＬ浓缩液、５ｍＬ
体积分数为６０％的乙醇和１ｍＬ质量分数为５％的ＮａＮＯ２，摇匀后放置６ｍｉｎ；之后加入质量分数为１０％的
Ａｌ（ＮＯ３）３１ｍＬ，放置６ｍｉｎ后，再加入质量分数为４％的ＮａＯＨ　１０ｍＬ，混合均匀，用体积分数为６０％的乙
醇定容，１５ｍｉｎ后采用分光光度计分别测出其吸光度值，测定波长为４８６ｎｍ．
２．７　乙醇提取物的抗氧化活性测定
称取８．０ｍｇ的醇提物干燥样品和维生素 Ｃ（Ｖｃ），将其分别溶于甲醇溶液中，使其质量浓度为
８００μｇ／ｍＬ，再用甲醇将其稀释为质量浓度分别为４００，２００，１００，５０，２５，１０，５μｇ／ｍＬ的溶液．准确称取
０８３
第４期 郭　萌等：华北蓝盆花再生体系的建立及其黄酮类化合物研究
０．４７３ｍｇ　２，２－二苯基－１－苦基肼（２，２－ｄｉｐｈｅｎｙｌ－１－ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ，ＤＰＰＨ）溶于甲醇溶液中，配成终质量浓度为
６０μｇ／ｍＬ的溶液．将１００μＬ样品液按质量浓度由低到高的顺序加入９６孔板的孔内，每孔加入１００μＬ　ＤＰ－
ＰＨ溶液，对照孔加入１００μＬ甲醇，在避光、室温条件下放置４０ｍｉｎ后，用酶标仪测定其吸光值，测定波长为
５１７ｎｍ．
３　结果与分析
３．１　愈伤组织的诱导
将华北蓝盆花叶片外植体接种于添加不同质量浓度２，４－Ｄ培养基内，７ｄ后在伤口处诱导出淡黄绿色
愈伤组织，随着培养时间的延长，愈伤组织由淡黄绿色变成黄褐色，并且愈伤组织增殖不明显．由表１可知，
２，４－Ｄ质量浓度为０．５ｍｇ／Ｌ时，诱导率为５３．５７％．将叶片外植体接种于附加不同ＴＤＺ质量浓度的培养基
内，７ｄ后在叶片边缘和刻伤处出现深绿色颗粒状愈伤组织．当ＴＤＺ的质量浓度为１．０ｍｇ／Ｌ时，诱导率最
高，达到８２．７４％（图１ａ）．
表１　２，４－Ｄ，ＴＤＺ对华北蓝盆花愈伤组织诱导的影响
Ｔａｂ．１　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　２，４－Ｄ　ａｎｄ　ＴＤＺ　ｏｎ　ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｃａｂｉｏｓａ　ｔｓｃｈｉｌｉｅｎｓｉｓ
ρ（２，４－Ｄ）／（ｍｇ·Ｌ
－１） 诱导率／％
０　 ０ｅ
０．５　 ５３．５７±３．０９ａ
１．０　 ４７．０２±１．０３ｂ
２．０　 ４１．０７±１．７８ｃ
４．０　 ３７．７４±１．７８ｄ
ρ（ＴＤＺ）／（ｍｇ·Ｌ
－１） 诱导率／％
０　 ０ｃ
０．５　 ７７．３８±１．０３ｂ
１．０　 ８２．７４±１．０３ａ
２．０　 ７５．００±１．７９ｂ
４．０　 ７７．９８±２．０６ｂ
　　数据以ｘ±ＳＤ表示，ｎ＝３，Ｐ＜０．０５．
３．２　不定芽的诱导
将叶片外植体接种于附加不同质量浓度６－ＢＡ的培养基中，除对照组外，１０ｄ后出现丛生不定芽，３０ｄ
后丛生不定芽的高度可达１～３ｃｍ（图１ｂ）．在实验质量浓度范围内，随着６－ＢＡ质量浓度升高，不定芽的诱
导率也升高（表２），当６－ＢＡ质量浓度为４．０ｍｇ／Ｌ时，其不定芽的诱导率达到最高（８６．３％）．
表２　６－ＢＡ，ＫＴ对华北蓝盆花不定芽诱导的影响
Ｔａｂ．２　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　６－ＢＡ　ａｎｄ　ＫＴ　ｏｎ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｓｈｏｏｔｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｃａｂｉｏｓａ　ｔｓｃｈｉｌｉｅｎｓｉｓ
ρ（６－ＢＡ）／（ｍｇ·Ｌ
－１） 诱导率／％
０　 ０ｅ
０．５　 ３３．９３±１．７９ｄ
１．０　 ６６．０７±３．５７ｃ
２．０　 ７３．２１±１．７８ｂ
４．０　 ８６．３０±１．０３ａ
ρ（ＫＴ）／（ｍｇ·Ｌ
－１） 诱导率／％
０　 ０ｄ
０．５　 ４．１７±１．０３ｃ
１．０　 ３９．２８±１．７９ａ
２．０　 ５．３５±１．７９ｂｃ
４．０　 ７．１４±０．００ｂ
　　数据以ｘ±ＳＤ表示，ｎ＝３，Ｐ＜０．０５．
与６－ＢＡ相比，ＫＴ对不定芽诱导效应不及６－ＢＡ，当ＫＴ质量浓度为１．０ｍｇ／Ｌ时，不定芽的诱导率仅为
３９．２８％，明显低于６－ＢＡ的诱导率．研究还发现，高浓度ＫＴ抑制不定芽的诱导．
３．３　生根培养
将不定芽接种到含有不同质量浓度ＩＢＡ的培养基中，１０ｄ后开始出现白色根尖，３０ｄ后可分化出辐射
分布的２～５条不定根（图１ｃ），最长根可达１０ｃｍ以上．从图２中可看出，当ＩＢＡ质量浓度为２．０ｍｇ／Ｌ时，
生根率最高，达到７３．８５％（图２ａ），平均根数最多，为３．２５条，平均根长最长，达到６．９８ｃｍ（图２ｂ）．因此，
最佳诱导生根培养基为 ＭＳ＋ＩＢＡ　２．０ｍｇ／Ｌ．
１８３
河北大学学报（自然科学版） 第３５卷
ａ，愈伤组织；ｂ，不定芽；ｃ，再生植株．
图１　华北蓝盆花愈伤组织诱导及植株再生
Ｆｉｇ．１　Ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｌａｎｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｃａｂｉｏｓａ　ｔｓｃｈｉｌｉｅｎｓｉｓ
　　
ａ．生根率；ｂ．平均生根数和根长．
图２　ＩＢＡ对华北蓝盆花不定根诱导的影响
Ｆｉｇ．２　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ＩＢＡ　ｏｎ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｒｏｏｔｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｃａｂｉｏｓａ　ｔｓｃｈｉｌｉｅｎｓｉｓ
３．４　炼苗与移栽
经过１周的炼苗，将华北蓝盆花再生苗进行移栽，并将移栽的植株置于相对湿度较高（８０％～９０％）、温
度为２０～２５℃的环境中遮阴培养３０ｄ后，成活率可达８５％．
３．５　华北蓝盆花总黄酮含量
通过分光光度法测定的不同样品的总黄酮含量如表３所示．
表３　不同愈伤组织、再生及野生植株的总黄酮含量（干重）及清除ＤＰＰＨ自由基的ＩＣ５０值
Ｔａｂ．３　Ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ａｎｄ　ＩＣ５０ｖａｌｕｅｓ　ｏｆ　ＤＰＰＨ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ
ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｆｒｏｍ　ｃａｌｕｓｅｓ，ａｎｄ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ａｎｄ　ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ　ｐｌａｎｔｓ　ｏｆ　Ｓｃａｂｉｏｓａ　ｔｓｃｈｉｌｉｅｎｓｉｓ
培养基 材料类型 ｗ（总黄酮）／（ｍｇ·ｇ－１） ＩＣ５０／（μｇ·ｍＬ
－１）
ＭＳ＋ＴＤＺ　０．５ｍｇ／Ｌ 愈伤组织 １２．６０±０．１１ｄ ２３．９４±０．５８ｅ
ＭＳ＋ＴＤＺ　１．０ｍｇ／Ｌ 愈伤组织 １５．０３±０．２５ａ ２７．９５±１．７４ｄ
ＭＳ＋ＴＤＺ　２．０ｍｇ／Ｌ 愈伤组织 １４．２４±０．１４ｂ ５０．８６±１．２２ｂ
ＭＳ＋ＴＤＺ　４．０ｍｇ／Ｌ 愈伤组织 １３．４３±０．１９ｃ ３７．２３±０．９３ｃ
— 再生植株 １．５１±０．１２ｆ １５１．５１±２．１６ａ
— 野生植株 ９．２１±０．１５ｅ ２６．５０±０．６３ｄ
— 维生素Ｃ — ５．４１±０．３３ｆ
　　数据以ｘ±ＳＤ表示，ｎ＝３，Ｐ＜０．０５．
从表３中可以看出，培养基中添加ＴＤＺ时，诱导出的愈伤组织中的总黄酮含量为１２．６０～１５．０３ｍｇ／ｇ，
显著高于野生植株（９．２１ｍｇ／ｇ），当ＴＤＺ质量浓度为１．０ｍｇ／Ｌ时，总黄酮含量最高，达到１５．０３ｍｇ／ｇ，这
２８３
第４期 郭　萌等：华北蓝盆花再生体系的建立及其黄酮类化合物研究
表明不同质量浓度的ＴＤＺ对细胞中黄酮类化合物积累有一定的影响，１．０ｍｇ／Ｌ　ＴＤＺ最有利于细胞中黄酮
类化合物积累．再生植株与野生植株相比，总黄酮含量很低，仅为１．５１ｍｇ／ｇ．
３．６　华北蓝盆花乙醇提取物的抗氧化活性
根据不同样品的ＤＰＰＨ自由基清除率，计算ＩＣ５０，结果如表３．ＩＣ５０值越大，抗氧化活性越弱．各样品的
ＩＣ５０与对照维生素Ｃ（Ｖｃ）相比，虽然没有Ｖｃ的抗氧化活性强，但除再生植株外，其他样品均表现出较强的抗
氧化活性，ＩＣ５０为２３．９４４～５０．８６１μｇ／ｍＬ，其中 ＭＳ＋ＴＤＺ　１．０ｍｇ／Ｌ培养基诱导的愈伤组织的抗氧化活性
与野生植株相当，ＭＳ＋ＴＤＺ　０．５ｍｇ／Ｌ培养基诱导的愈伤组织的抗氧化活性强于野生植株．
４　讨论
本研究发现，在培养基中只添加２，４－Ｄ时，愈伤组织的诱导率低，并且诱导出的愈伤组织生长状态较差．
Ｔａｎ等［３］研究发现，培养基中附加２，４－Ｄ，对凹唇姜进行愈伤组织诱导培养时，愈伤组织诱导率不高，并且高
质量浓度２，４－Ｄ对愈伤组织的诱导有抑制作用．这一结果与本研究相一致．
６－ＢＡ对于华北蓝盆花不定芽的诱导效果最好，当６－ＢＡ质量浓度为４．０ｍｇ／Ｌ时，其不定芽的诱导率达
到８６．３％．Ｍａｈｅｎｄｒａ等［４］研究发现，培养基中附加６－ＢＡ对美花狸尾豆的叶片进行不定芽诱导培养时，诱导
率也很高．许多研究表明，生长素与细胞分裂素配合使用时能促进植物细胞的分化，但在本研究中发现，当
６－ＢＡ与ＮＡＡ配合使用时，华北蓝盆花不定芽的诱导率很低，并且有大量毛状根的形成．Ｄａｉ等［５］对山楂的
研究也得到相类似的结果，他们用１７．７６μｍｏｌ／Ｌ的６－ＢＡ和１２．８９μｍｏｌ／Ｌ的ＮＡＡ配合使用，诱导率仅为
３０．５％．
本研究还发现，采用单独添加ＴＤＺ的 ＭＳ培养基进行愈伤组织诱导培养时，其愈伤组织中总黄酮含量
（１２．６０～１５．０３ｍｇ／ｇ）均明显高于野生植株，说明ＴＤＺ对总黄酮的积累效果显著．高丽华等［６］采用分光光
度法对雪莲细胞培养物的黄酮含量进行测定，发现其质量分数为１２．２４％±０．０７％，是天然雪莲黄酮含量的
３０倍左右．
赵宗孝等［７］通过对５种蒙药材比较研究发现，蓝盆花清除自由基的能力较好，对超氧阴离子消除作用较
强，其ＩＣ５０为３４．２７μｇ／ｍＬ；在对·ＯＨ清除的实验中发现，加入５ｍｇ的样品时，羟自由基的清除率高达
９７．４％．本研究也证实野生植株、ＴＤＺ诱导的愈伤组织的抗氧化活性都比较好．
目前，通过离体培养建立再生体系的药用植物已有几百种．如胭脂花［８］、雪莲［９］、半夏［１０］、华北八宝［１１］、
华北大黄［１２］等．建立华北蓝盆花快速繁殖体系，并且对其培养条件进行优化，可为华北蓝盆花的资源保护和
可持续开发利用奠定基础．
参　考　文　献：
［１］　王国英，薛培凤．蒙药蓝盆花及其同属植物的研究进展［Ｊ］．内蒙古医学院学报，２００９，３１（５）：４８７－４９０．
ＷＡＮＧ　Ｇｕｏｙｉｎｇ，ＸＵＥ　Ｐｅｉｆｅｎｇ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｍｏｎｇｏｌｉ　ａ　ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ｏｆ　Ｌａｎ　Ｐｅｎ　Ｈｕａ　ａｎｄ　ｏｔｈｅｒ
ｐｌａｎｔｓ　ｉｎ　Ｓｃａｂｉｏｓａ［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ａｃａｄｅｍｉａｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｅ　Ｎｅｉｍｏｎｇｏｌ，２００９，３１（５）：４８７－４９０．
［２］　ＺＨＥＮＧ　Ｑ，ＫＯＩＫＥ　ＫＡＺＵＯ，ＨＡＮ　Ｌ　Ｋ，ｅｔ　ａｌ．Ｎｅｗ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｙ　ａｃｔｉｖｅ　ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄ　ｓａｐｏｎｉｎｓ　ｆｒｏｍＳｃａｂｉｏｓａ　ｔｓｃｈｉｌｉｅｎｓｉｓ
［Ｊ］．Ｊ　Ｎａｔ　Ｐｒｏｄ，２００４，６７：６０４－６１３．
［３］　ＴＡＮ　Ｓ　Ｋ，ＰＩＰＰＥＮ　Ｒ，ＹＵＳＯＦ　Ｒ，ｅｔ　ａｌ．Ｓｉｍｐｌｅ　ｏｎｅ－ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｉｎｇｅｒ　ｒｏｏｔ［Ｂｏｅｓｅｎｂｅｒｇｉａ　ｒｏ－
ｔｕｎｄａ（Ｌ．）ｍａｎｓｆ．ｋｕｌｔｕｒｐｆｌ．］ｖｉａ　ｓｏｍａｔｉｃ　ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．Ｉｎ　Ｖｉｔｒｏ　Ｃｅｌ　Ｄｅｖ　Ｂｉｏｌ－Ｐｌａｎｔ，２００５，４１：７５７－７６１．
［４］　ＭＡＨＥＮＤＲＡ　Ｌ　Ａ，ＳＡＶＡＬＩＲＡＭ　Ｇ　Ｇ，ＶＩＮＡＹＡＫ　Ｈ　Ｌ，ｅｔ　ａｌ．Ｍｉｃｒｏｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｕｒａｒｉａ　ｐｉｃｔａｔｈｒｏｕｇｈ　ａｄｖｅｎｔｉ－
ｔｉｏｕｓ　ｂｕｄｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｃａｌｕｓ［Ｊ］．Ｉｎ　Ｖｉｔｒｏ　Ｃｅｌ　Ｄｅｖ　Ｂｉｏｌ－Ｐｌａｎｔ，２０１１，４７：４８８－４９５．
［５］　ＤＡＩ　Ｈｏｎｇｙａｎ，ＺＨＡＮＧ　Ｚｈｉｈｏｎｇ，ＧＵＯ　Ｘｉｕｗｕ．Ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｌｅａｆ　ａｎｄ　ｃｏｔｙｌｅｄｏｎ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｏｆ　Ｃｈｉ－
ｎｅｓｅ　ｈａｗｔｈｏｒｎ（Ｃｒａｔａｅｇｕｓ　ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ　Ｂｇｅ．ｖａｒ．ｍａｊｏｒ　Ｎ．Ｅ．Ｂｒ．）［Ｊ］．Ｉｎ　Ｖｉｔｒｏ　Ｃｅｌｕｌａｒ　＆Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ－
Ｐｌａｎｔ，２００７，４３（１）：２－８．
［６］　高丽华，胡显文．分光光度法测定水母雪莲细胞培养物中的总黄酮［Ｊ］．生物技术通讯，２００３，１４（２）：１３６－１３７．
３８３
河北大学学报（自然科学版） 第３５卷
ＧＡＯ　Ｌｉｈｕ，ＨＵ　Ｘｉａｎｗｅｎ．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃａｌｕｓ　ｃｕｌｔｕｒｅｓ　ｏｆ　Ｓａｕｓｓｕｒｅａ　ｍｅｄｕｓａ［Ｊ］．Ｌｅｔｔｅｒｓ　ｉｎ　Ｂｉｏｔｅｃｈ－
ｎｏｌｏｇｙ，２００３，１４（２）：１３６－１３７．
［７］　赵宗孝，好斯巴特，汤文莉，等．五种中药材清除自由基作用的实验研究［Ｊ］．时珍国医国药，２００４，１５（２）：７１－７２．
ＺＨＡＯ　Ｚｏｎｇｘｉａｏ，ＨＡＯＳＩＢＡＴＥ，ＴＡＮＧ　Ｗｅｎｌｉ，ｅｔ　ａｌ．Ａｎ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｃｌｅａｒａｎｃｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ｆｒｅｅ　ｂａｓｅ　ｏｆ　５
ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　ｃｈｉｎｅｓｅ　ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　ｈｅｒｂｓ［Ｊ］．Ｌｉｓｈｉｚｈｅｎ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ａｎｄ　Ｍａｔｅｒｉａ　Ｍｅｄｉｃａ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００４，１５（２）：７１－７２．
［８］　宋韵霏，王俊丽，毕凯丽，等．胭脂花的组织培养与植株再生［Ｊ］．河北大学学报：自然科学版，２０１２，３２（６）：６３０－６３４．
ＳＯＮＧ　Ｙｕｎｆｅｉ，ＷＡＮＧ　Ｊｕｎｌｉ，ＢＩ　Ｋａｉｌｉ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｐｌａｎｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｒｉｍｕｌａ　ｍａｘｉｍｏｗｉｃｚｉｉ［Ｊ］．Ｊｏｕｒ－
ｎａｌ　ｏｆ　Ｈｅｂｅｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ：Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０１２，３２（６）：６３０－６３４．
［９］　ＧＵＯ　Ｂｉｎ，ＧＡＯ　Ｍｉｎ，ＬＩＵ　Ｃｈｕｎｚｈａｏ．Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎ　ｅｎｄａｎｇｅｒｅｄ　ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　ｐｌａｎｔ　Ｓａｕｓｓｕｒｅａ　ｉｎｖｏｌｕｃｒａｔａ　Ｋａｒ．ｅｔ
Ｋｉｒ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌ　Ｒｅｐ，２００７（２６）：２６１－２６５．
［１０］　ＷＡＮＧ　Ｊｕｎｌｉ，ＷＡＮＧ　Ｑｉａｎ，ＷＡＮＧ　Ｊｕｅ，ｅｔ　ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｌａｎｔ　ｇｒｏｗｔｈ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ　ｏｎ　ｍｉｃｒｏ－ｔｕｂｅｒ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ
ｐｌａｎｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｉｎｅｌｌｉａ　ｔｅｒｎａｔｅ （Ｔｈｕｎｂ）Ｂｒｉｅｔ［Ｊ］．Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｐｌａｎｔｓ，２００９，１５（４）：
３５９－３６５．
［１１］　ＷＡＮＧ　Ｊｕｎｌｉ，ＷＡＮＧ　Ｊｕｅ，ＬＩＵ　Ｋｕｎ，ｅｔ　ａｌ．Ａｎ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｐｌａｎｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ　ｗｉｔｈ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｆｏｒ
Ｈｙｌｏｔｅｌｅｐｈｉｕｍ　ｔａｔａｒｉｎｏｗｉｉ（Ｍａｘｉｍ．）Ｈ．Ｏｈｂａ［Ｊ］．Ｉｎ　Ｖｉｔｒｏ　Ｃｅｌ　Ｄｅｖ　Ｂｉｏｌ－Ｐｌａｎｔ，２０１０，４６：４４５－４５０．
［１２］　王俊丽，陆远，刘坤，等．华北大黄愈伤组织培养及土大黄苷含量研究［Ｊ］．河北大学学报：自然科学版，２０１１，３１（２）：１９５－
１９９．
ＷＡＮＧ　Ｊｕｎｌｉ，ＬＵ　Ｙｕａｎ，ＬＩＵ　Ｋｕｎ，ｅｔ　ａｌ．Ｃａｌｕｓ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｒｈａｐｏｎｔｉｃｉｎ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｒｈｅｕｍ　ｆｒａｎｚｅｎｂａｃｈｉｉ　Ｍｕｎｔ
［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｈｅｂｅｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ：Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０１１，３１（２）：１９５－１９９．
（责任编辑：赵藏赏）
（上接第３７８页）
参　考　文　献：
［１］　刘成，王兆印，何耘，等．环渤海湾诸河口底质现状的调查研究［Ｊ］．环境科学学报，２００３，２３（１）：５８－６３．
ＬＩＵ　Ｃｈｅｎｇ，ＷＡＮＧ　Ｚｈａｏｙｉｎ，ＨＥ　Ｙｕｎ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｏｔｔｏｍ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ｐｒｅｓｅｎｔ　ｓｉｔｕａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｅｓｔｕａｒｉｅｓ　ａｒｏｕｎｄ
ｔｈｅ　Ｂｏｈａｉ　Ｂａｙ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　ｓｃｉｅｎｃｅ，２００３，２３（１）：５８－６３．
［２］　梁淑轩，吴虹，齐学先，等．氢化物发生－原子荧光光谱法测定大气颗粒物中的砷形态［Ｊ］．河北大学学报：自然科学版，
２０１１，３１（０１）：４２－４７．
ＬＩＡＮＧ　Ｓｈｕｘｕａｎ，ＷＵ　Ｈｏｎｇ，ＱＩ　Ｘｕｅｘｉａｎ，ｅｔ　ａｌ．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｒｓｅｎｉｃ　ｓｔａｔｅ　ｉｎ　ａｔｍｏｓｐｈｅｒｉｃ　ｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅｓ　ｂｙ　ｈｙｄｒｉｄｅ－ａ－
ｔｏｍｉｃ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｈｅｂｅｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ：Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０１１，３１（０１）：４２－４７．
［３］　安立会，郑丙辉，张雷，等．渤海湾河口沉积物重金属污染及潜在生态风险评价［Ｊ］．中国环境科学，２０１０，３０（５）：６６６－６７０．
ＡＮ　Ｌｉｈｕｉ，ＺＨＥＮＧ　Ｂｉｎｇｈｕｉ，ＺＨＡＮＧ　Ｌｅｉ，ｅｔ　ａｌ．Ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ　ｏｆ　ｈｅａｖｙ　ｍｅｔａｌｓ　ｉｎ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｓｅｄｉｍｅｎｔｓ　ｆｒｏｍ　ｅｓｔｕａｒｉｅｓ　ｉｎ　Ｂｏｈａｉ
ｂａｙ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ　ｒｉｓｋ　ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｃｈｉｎａ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１０，３０（５）：６６６－６７０．
［４］　林洪瑛，韩舞鹰．珠江口伶仃洋枯水期十年前后的水质状况与评价［Ｊ］．海洋环境科学，２００１，２０（２）：２８－３１．
ＬＩＮ　Ｈｏｎｇｙｉｎｇ，ＨＡＮ　Ｗｕｙｉｎｇ．Ｔｈｅ　ｗａｔｅｒ　ｑｕａｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｌｉｎｇｄｉｎｇｙａｎｇ　ｄｕｒｉｎｇ　ｄｒｙ　ｂｅｆｏｒｅ　ａｎｄ　ａｆｔｅｒ　ｔｅｎ　ｙｅａｒｓ　ｉｎ
Ｐｅａｒｌ　ｅｓｔｕａｒｉｎｅ［Ｊ］．Ｍａｒｉｎｅ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００１，２０（２）：２８－３１．
［５］　ＧＢ　３０９７—１９９７，海水水质标准［Ｓ］．
［６］　何孟常，王子健．利用综合评价方法和等级模型评价乐安江水体重金属污染［Ｊ］．生态学报，２００２，２２（１）：８０－８６．
ＨＥ　Ｍｅｎｇｃｈａｎｇ，ＷＡＮＧ　Ｚｉｊｉａｎ．Ｔｈｅ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｅａｖｙ　ｍｅｔａｌｓ　ｐｏｌｕｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｌｅ’ａｎ　Ｒｉｖｅｒ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ　ｅｖａｌｕａ－
ｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ａｎｄ　ｍｏｄｅｌ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ａｃｔａ　ｅｃｏｌｏｇｉｃａ　ｓｉｎｉｃａ，２００２，２２（１）：８０－８６．
［７］　徐恒振，刘现明，周传光．海洋生物质量监测技术规程［Ｍ］．北京：国家海洋局，２００２：５－８．
［８］　ＧＢ　１８４２１—２００１，海洋生物质量［Ｓ］．
［９］　何雪琴，温伟英．大亚湾底栖生物重金属现状与评价［Ｊ］．河海大学学报：自然科学版，２００１，２９（３）：１０３－１０６．
ＨＥ　Ｘｕｅｑｉｎ，ＷＥＮ　Ｗｅｉｙｉｎｇ．Ｔｈｅ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｅｎｔｈｉｃ　ｈｅａｖｙ　ｍｅｔａｌｓ　ｓｔａｔｕｓ　ｉｎ　Ｄａｙａ　ｂａｙ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｈｅｈａｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ：
Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１，２９（３）：１０３－１０６．
（责任编辑：赵藏赏）
４８３